常见实验用溶液的配制方法解析

1、常见实验用溶液的配制方法一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:力口 100mg的牛血清蛋白（组分 V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），

2、盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20Co1mol/L二硫苏糖醇（DTT ）:在二硫苏糖醇 5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl ）:溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约

3、 90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L ）,混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取 186.1g的Na2EDT A 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2）,然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :力口 8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-3 -D-半乳糖苷

4、）于 10ml水中，分成小份贮存于 -20C。1mol/LMgCI2:溶解 20.3g MgCI2 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋

5、白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH5.0） o溶解后于水浴中煮沸 15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5,于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCI）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH ）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10% SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定 容至1L。2moI/L山梨（糖）醇（S

6、orbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸（TCA ）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚3 -半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF ），用铝箔包裹装液管， 贮存于-20 C。100 x Denhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分 V）水2g2g2g

7、加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCl21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L 贮液5mmol/L盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）0.5ml 10

8、mg/mL 贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以购买到 100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少 6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20% PEG

9、8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 X SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水20m加100ul DEPC于100ml水中，使

10、DEPC的体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高压灭菌n，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h,可去除甲酰胺中的离子。hatma n 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 m

11、ol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4 H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存 DNA ）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1ml 1

12、mol/L Tris-HCl ( pH7.4-8.0 , 25 C)1mmol/L EDTA200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)水98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCI buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 x Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2m

13、ol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 补足1L5 x Tris-硼酸(TBE )缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)补足1L染料1 %溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于 100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %一甲本青 F

14、F (xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml。4C贮存。5 mmol/L EDTA50%甘油水100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)3ml3.9ml6 x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝1.5ml 1 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF1.5ml 1 %二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)40%聚蔗糖4g水补足到10ml10 x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2 %溴酚蓝

15、20mg0.2 %二甲苯青FF20mg200 mmol/L EDTA4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)0.1 % SDS100ul 10 % SDS50%甘油5ml水补足到10ml二.常用培养基I D拉关苴LB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g12g/L,上层琼脂平板添加琼脂如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉粉 7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压

16、灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L 氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HP

17、O4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用 0.22um的滤膜过滤除菌）。2 X YT培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素

18、氨苄青霉素(ampicillin) ( 100mg/ml )溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素(carbenicillin ) (50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicillin ) (100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素(kanamycin) (10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素(chloramphenicol) (25mg/ml)溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素(streptomycin ) (50mg/ml)