基因工程原理王莹基因工程题库讲解

1、提高基因重组效率基因工程试题库001 基因工程操作的三大基本元件是【 】 I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V002 根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【 】I 分离纯化基因 II 大量生产生物分子 III 构建新型物种 IV I + II + III I + II + IV I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV 003 基因工程的三大理论基石是【 】 经典遗传学、细胞生物学、微生物学 分子

2、遗传学、分子生物学、生化工程学 动物学、植物学、微生物学 生物化学、生化工程学、化学工程学 生理学、仿生学、免疫学004 根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 基因诱变 分子克隆 DNA 重组 遗传工程 基因无性繁殖005 基因工程的单元操作顺序是【 】 增，转，检，切，接 切，接，转，增，检 接，转，增，检，切 检，切，接，增，转 切，接，增，转，检006 生物工程的上游技术是【 】 基因工程及分离工程 基因工程及发酵工程 基因工程及酶工程 基因工程及细胞工程 基因工程及蛋白质工程007 基因工程作为一种技术诞生于【 】 上世纪 50 年代初 上世纪 60 年代初 上世纪

3、70 年代初 上世纪 80 年代初 上世纪 90 年代初008 利用基因工程扩增基因是依据【 】 基因定向重排 强化启动基因 增强子重组 SD 顺序的存在 载体自主复制009 第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白(多肽)药物是【 】 生长激素( Growth hormone ) 胰岛素( Insulin ) 干扰素( Interferon ) 白细胞间溶菌素( Interleukin ) 生长激素释放抑制素( Somatostatin )010 下列有关基因的叙述，错误的是【 】 蛋白质是基因表达的唯一产物 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段 基因也可以是 RNA 基因突变不一定导致其表达产

4、物改变结构 基因具有方向性011 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 修复自身的遗传缺陷 促进自身的基因重组 强化自身的核酸代谢 提高自身的防御能力 补充自身的核苷酸消耗 012 天然 PstI 限制性内切酶的来源是【 】 Bacillus amyloliquefaciens Escherichia coli Haemophilus influenzae Providencia stuartii Streptomyces lividans013 根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成 【 】 2 大类 3 大类 4 大类 5 大类 6 大类014 下列五个 DNA

5、 片段中含有回文结构的是【 】 GAAACTGCTTTGAC GAAACTGGAAACTG GAAACTGGTCAAAG GAAACTGCAGTTTC GAAACTGCAGAAAGAluI 、 BglII 、 ClaI 、 DpnI并保留 EcoRI 酶切位点， 则合适的插015 下列五个 DNA 片段，最可能含有 SstI 酶切位点的是 【 】 GGAGAGCTCT GAGCACATCT CCCTGTGGGA ATCCTACATG AACCTTGGAA 016 从 dam 型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒 DNA 能被 BamHI 、 BglII 和 Sau3AI 降解（如果上述 酶切位点存

6、在），但对 BclI 和 MboI 不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是 【 】 Dam 甲基化酶使 BclI 和 MboI 识别序列甲基化，但对 BamHI 、 BglII 以及 Sau3AI 不起作用 Dam 甲基化酶既可使 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，也可使胞嘧啶 C 5 甲基化，这两种甲 基化作用对限制性内切酶活性的影响不同 Dam 甲基化酶能使所有 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基 化作用的敏感性不同 Dam 甲基化酶的作用位点在 5-GATC-3 序列内部， 但该酶与 DNA 靶序列的结合还依赖于 5-GAT

7、C-3 序列左右两端的其它碱基组成 Dam 甲基化酶既能使 5-GATC-3 序列中的腺嘌呤 N 6 单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能 抵御相应限制性内切酶的切割作用017 T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是 【 】 2 -OH 和 5 -P 2 -OH 和 3 -P 3 -OH 和 2 -P 3 -OH 和 5 -P 5 -OH 和 3 -P018 下列 DNA 片段中，通过加热并用 S1 核酸酶处理即可使 DNA 断裂的是 【 】 CCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGT

8、GGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCA AAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTAT TTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATA TATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTTTC ATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAG GAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAG CTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGAT

9、CCCATAGAGACATCCCGGATC GCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGT CGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA019 Bal31 工具酶是一种【 】 只切双链 DNA 的外切酶 双链单链 DNA 均切的外切酶 双链单链 DNA 和 RNA 均切的外切酶 双链单链 RNA 均切的外切酶 只切双链 RNA 的外切酶020 下列有关连接反应的叙述，错误的是 【 】 连接反应的最佳温度为 37 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM 连

10、接酶通常应过量 2-5 倍 DTT 可以维持连接酶的结构021 某一质粒的多克隆位点上含有下列单一限制性内切酶识别序列： EcoRV ， 若将含有 EcoRI 粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上， 入位点是【 】 AluI BglII ClaIN 酶粘性末端的外源 DNA 片段中，能直接与载体拼接的024 下列各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的ClaI 限制性内切酶酶切位点的是【 】DNA 片段经补平并连接后，其重组分子内能产生 DpnI EcoRV 022 若将含有 5 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3 末端 4 碱基突出的载体质粒上， 又必 须保证连接区域的碱基对数

11、目既不增加也不减少，则需用的工具酶是【 】I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶 III I + III II + III I + II + III I + II + III + IV023 若载体 DNA 用 M 酶切开，则下列五种带有 是【】M N A/AGCTT T/TCGAA C/CATGG ACATG/T CCC/GGG G/GGCCC G/GATCC A/GATCT GAGCT/C G/AGCTC BglII / BamHI HindIII / BamHI MluI / BamHI SpeI / BamHI XbaI

12、/ BamHI 025 质粒 DNA 和外源 DNA 各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。下列各组重组子中有 可能含有两种相反基因极性的是 【 】 ApaI / ClaI BamHI / BglII BclI / SmaI HindIII / KpnI SphI / PstI 026 提高重组率的方法包括 【 】I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间 I + II I + II + III I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV027 载体的功能是 【 】I 运送外源

13、基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 I I + II I + III II + III I + II + III028 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】 质粒是共价环状的双链 DNA 分子 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 质粒并非其宿主细胞生长所必需029 带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 穿梭质粒 表达质粒 探针质粒 整合质粒 多拷贝质粒030 多聚接头( Polylinker )指的是【 】 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的

14、人工 DNA 片段 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 含有多种启动基因的人工 DNA 片段 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段031 l -DNA 体外包装的上下限是天然 l -DNA 长度的 【 】 25 - 50 % 50 - 100 % 75 - 100 % 75 - 105 % 100 - 125 % 032 l -DNA 体外包装系统通常分成分离的两部分，其原因是【 】 安全 包装蛋白含量太大难于溶解 便于操作 提高转染率 包装蛋白组份的冷冻保藏条件不同033 琥珀突变是指 【 】 起始密码的突变 终止密码子的突变 精氨酸密码子的突

15、变 谷酰胺密码子的突变 丙氨酸密码子的突变034 考斯质粒( cosmid )是一种【 】 天然质粒载体 由 l -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 能裂解受体细胞的烈性载体 具有溶原性质的载体 能在受体细胞内复制并包装的载体035 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】 Cosmid l -DNA Plasmid l -DNA Cosmid Plasmid Plasmid l -DNA Cosmid Cosmid Plasmid l -DNA l -DNA Plasmid Cosmid 036 目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是 质粒 DNA041 某一重组转化系

16、统的重组率为 体转化率为原来的 1% 。若欲获得 噬菌体 DNA 病毒 DNA 线粒体 DNA 叶绿体 DNA037 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 【 】 大肠杆菌繁殖迅速 枯草杆菌分泌机制健全 链霉菌遗传稳定 酵母菌表达产物具有真核性 动物细胞具有完善的蛋白质糖基化功能038 基因工程的受体细胞必须具备 【 】 I 限制性缺陷 II 营养缺陷 III 感染寄生缺陷 I I + II I + III II + III I + II + III 039 促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌 生产人的促红细胞生长素，

17、这是因为 【 】 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用 人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化040 原生质体转化方法不大适用于 【 】 大肠杆菌 枯草杆菌 酵母菌 链霉菌 植物细胞10% ，转化率为 10 7 / m g DNA ，经切接单元操作后的载10,000 个重组克隆，需在重组实验中投入载体 【 】 0.1 m g 0.5 m g 1.0 m g 2.0 m g 10 m g 042 克隆菌扩增的目的是 【 】I 增殖外源基因拷贝 II

18、 表达标记基因 III 表达外源基因 I I + II I + III II + III I + II + III043 载体质粒 pBR325 共有三个选择性标记： Ap r 、 Tc r 、 Cm r 。它们分别含有一个单 一酶切位点： PstI 、 SphI 和 EcoRI 。若将一外源基因取代此载体上不含 Cm r 标记基因的 PstI-SphI 限制性 DNA 片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是 【 】 Ap Tc Cm Ap + Tc Ap + Cm044 经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组 DNA 分子的菌落， 其原因很可能是 【 】 标记基因发

19、生突变 载体或重组分子不稳定 载体或重组分子整合入受体染色体中 载体空载 筛选药物诱导受体细胞产生抗性045 若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入 【 】 半乳糖 葡萄糖 蔗糖 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - b -D- 半乳糖苷（ X-gal ） 异丙基巯基 - b - 半乳糖苷（ IPTG ）046 下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是 【 】 tsr Ap r lacZ Tc r Trp -047 在菌落原位杂交法中使用的0.4N NaOH 溶液的作用是 【 】I 破细胞壁 II 蛋白质变性 III DNA 变性 IV RNA 降

20、解 I + II + III I + II + IV I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV048 下列各组专业术语中，含义最为接近的是 【 】 终止子与终止密码子 基因表达与基因转译 DNA 退火与 DNA 复性 转化与转染 重组子与转化子049 分子杂交的化学原理是形成 【 】 共价键 离子键 疏水键 配位键 氢键053 某一重组 DNA ( 6.2 kb 电泳上出现四条长度不同的带子， 酶切位点共有 【 】) 的载体部分有两个 SmaI 其长度总和与已知数据吻合，酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶该重组分子插入片段上的 SmaI050 下

21、列设计的探针中，最佳的是 【 】 ACATTAAATTATT GGGCA ACCTTGATAAGGT CGGACTTGACCATC TTTAGG051 下列三种探针同位素标记法中，必须使用a - 32 P-dNTP 的是 【 】I T 4 -PNP 标记 II 缺口前移标记 III 反转录标记I I + II I + III II + III I + II + III052 能有效降低菌落原位杂交本底的方法是【 】I 延长嚗光时间 II 高离子强度溶液清洗薄膜III 高温杂交I I + II I + III II + III I + II + III5 个4 个3 个2 个 至少 2 个054

22、 Subcloning 法一般用于 【 】 基因杂交 基因定位 基因表达 基因调控 基因突变055 双脱氧末端终止法测定 DNA 序列是基于 【 】 DNA 的聚合反应 DNA 的连接反应 DNA 的降解反应 特殊的 DNA 连接酶 聚合单体 2 和 5 位的脱氧056 多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。为克隆其基因，最快速有 效的筛选方法是 【 】 噬菌斑模型 透明圈模型 颜色反应模型 免疫杂交模型 凝胶电泳模型，其方法有 【 】057 放射免疫原位杂交法所使用的菌体破碎方法是 【 】 I 氯仿蒸汽 II 碱溶液 III 烈性噬菌体 III I + II I + III

23、 II + III I + II + III 058 下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是 【 】 I 限制性酶切 II PCR 扩增 III 抗药性筛选I I + II I + III II + III I + II + III 059 下列能区分期望重组子的筛选方法是 【 】 抗药性 筛选法 营养缺陷 筛选法 显色 筛选法 次级克隆法 菌落原位杂交法060 鸟枪法克隆目的基因的战略适用于 原核细菌 酵母菌 丝状真菌 植物 人类061 鸟枪法克隆目的基因的第一步是随机或非随机切割外源 DNA I 超声波处理 II 酶解 III 机械搅拌 III I + II I + III II

24、+ III I + II + III 062 从凝胶上回收 DNA 片段有多种方法，其中无需将凝胶切下来的是 冻融法 滤纸法 吸附法 溶解法 低融点凝胶法063 mRNA 分离纯化技术的关键是 【 】 细胞的温和破碎 分离系统中不得含有痕量的 SDS 高离子强度缓冲液的使用 密度梯度超离心 严防核酸酶的降解064 cDNA 第一链合成所需的引物是 【 】 Poly A Poly C Poly G Poly T 发夹结构065 cDNA 合成中所涉及的三种工具酶是 【 】I T 4 -DNA 连接酶 II Klenow 聚合酶 III S1 核酸酶 IV Bal31 核酸酶 V 逆转录酶 I +

25、 II + III I + III + IV II + III + IV II + III + V III + IV + V 066 cDNA 法获得目的基因的优点是【 】 成功率高 不含内含子 操作简便 表达产物可以分泌 能纠正密码子的偏爱性067 Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，这是因为 【 】 Taq DNA 聚合酶能有效地变性基因扩增产物 Taq DNA 聚合酶催化的聚和反应不需要引物 Taq DNA 聚合酶具有极强的聚和活性 Taq DNA 聚合酶能使多轮扩增反应连续化 Taq DNA 聚合酶能使扩增反应在 DNA 变性条件下进行068 为了利用 P

26、CR 技术扩增下列染色体 DNA 片段上的虚线部分， 应选用的引物顺序是 【 】 I + II I + III I + IV II + III II + IV069 基因工程中采用人工合成目的基因战略的主要原因是 【 】 便于目的基因的分离纯化 便于目的基因的高效表达 便于目的基因的重组克隆 便于目的基因的顺序测定 便于目的基因的大量扩增070 人工合成 DNA 的单元操作包括 【 】 I 基团保护 II 缩合 III 去保护 IV 洗涤 I + II II + IV I + II + III II + III + IV I + II + III + IV 071 基因文库的构建方法包括 【

27、】I 合成法 II cDNA 法 III 鸟枪法 IV PCR 法 I + II I + III II + III II + IV III + IV 072 建立人的基因文库所需的技术是 【 】 分子克隆技术 体外转录技术 体外翻译技术 产物分泌技术 基因诱导表达技术073 构建基因文库一般使用的载体是 【 】 I 质粒 II l -DNA III CosmidI II III II + III I + II + III074 评估基因文库完备性的数学公式是 【 】N = ln (P-1)/ ln(f-1)N = lg (P+1)/ lg(f+1)N = ln (1-P)/ ln(1-f)N

28、= lg (1-P)/ ln(1-f)N = lg (1-f)/ ln(1-P)075 构建基因文库极为重要的原则是防止外源 DNA 片段之间的连接，其方法是 【 】 I DNA 片段分级分离 II 除去 DNA 片段末端的磷酸基团 III 用 TdT 酶增补人工粘性末端 II I + II I + III II + III I + II + III076 强化基因转录的元件是 【 】 密码子 复制子 启动子 内含子 外显子077 启动子的特征之一是 【 】 GC 富积区 TATA Box 转录起始位点 长度平均 1 kb 含有某些稀有碱基078 影响启动子功能的因素包括 【 】I 本身长度

29、II 与基因之间的距离 III 本身碱基排列顺序I II III I + II II + III079 pIJ486 是链霉菌的启动子探针质粒（如下图所示），其中 neo 和 tsr 分别为新霉素和硫 链丝菌素的抗性基因。为了准确克隆和筛选具有启动子活性的外源 DNA 片段，最为理想的插 入位点应是 【 】 ApaI BclI EcoRV KpnI PstI080 下列基因调控元件中属于反式调控元件的是 【 】 阻遏蛋白 启动子 操作子 终止子 增强子081 强化 mRNA 翻译的元件是 【 】 启动子 复制起始区 增强子 回文结构 SD 顺序082 下列 mRNA 5 端序列中，具有典型的原

30、核生物 Shine-Dalgarno 序列特征的是 【 】 5 UAUAAG3 5 AGGAGG3 5 AUAUCU3 5 CCUCCA3 5 GGCCCG3 083 下列亮氨酸密码子在大肠杆菌蛋白质结构基因中出现频率最低的是 【 】 CUA CUC CUG UUA UUG084 下面给出的 DNA 顺序是某链霉菌一个蛋白质结构基因的中间片段，其基因方向及阅读框 架是 【 】5.GCAGGGACTCGGAAGGCACCGACATGTCCTGC.3.123456789.从右至左，. . 876， 543从右至左，. 987， 654从左至右，. 123， 456从左至右，. 234， 567从左

31、至右，. 345， 678085 为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达，有时可以采用同步克隆表达受体菌 tRNA 基因的方法，其机理是 【 】 增强基因的转录 纠正受体菌密码子的偏爱性 促进氨酰基 tRNA 合成酶的表达 稳定 mRNA 在核糖体上的定位 启动 mRNA 的翻译086 高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是 【 】 表达产物浓度过高 表达产物不能正确折叠 表达产物不含糖基侧链 表达产物难以形成二硫键 表达产物中极性氨基酸残基比例下降087 下列五种重组 DNA 分子中，目的基因有可能获得高效表达的是088 包涵体是一种 【 】 受体细胞

32、中难溶于水的蛋白颗粒 大肠杆菌的亚细胞结构 噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒 用于转化动物细胞的脂质体 外源基因表达产物的混合物089 在基因工程中，外源基因表达产物的重折叠通常是指 【 】 氢键的形成 离子键的形成 疏水键的形成 酰胺键的形成 二硫键的形成090 Chaperone 协助蛋白质形成正确空间构象的机制是 【 】 结合折叠不正确的蛋白分子以阻断蛋白质的错误折叠途径 强化蛋白分子内容二硫键的正确形成 促进肽基脯氨酸顺式键与反式键之间的转换目的基因终止子启动子 SD 序列 蛋白质正确构象与错误构象之间的平衡 催化错误构象蛋白质的降解091 某一表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中高效

33、表达的基因 A ，若将外源基因 B 插入基因 A 的 3 末端，并维持基因 B 的阅读框架不变，使两者在受体细胞中产生融合蛋白，则正确的 重组策略是 【 】 A 基因用 PvuII 切开， A 基因用 SmaI 切开，B 基因用 SmaI 切开，连接 B 基因用 SmaI 切开，连接 A 基因用 BamHI 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 A 基因用 BglII 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 A 基因用 EcoRV 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接092 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是 【 】I 融合基因能稳定扩增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的

34、降解 III 表达产物易于亲和层析分离 III I + II I + III II + III I + II + III 093 有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是 核糖体 信号肽 终止子 亲水性氨基酸 多聚腺苷酸094 下列蛋白质 N 末端序列中，符合分泌型蛋白结构特征的是 MLSLRQSIRFFKPATRTLCSSRYLL MLVTAGVAAA MKRKHAIGPLLLAGLLAGVVAVLP MFSNLSKRWAQRTLSKSFYSTANA MVHAPNQSSTTWYHSCACGLIYWT 095 一般而言，分子量小的蛋白质更不稳定，其原因是 【 】 分子量越小，形成良好空间构象的可能性

35、越低 分子量越小，表达效率越高 分子量越小，分泌效果越佳 分子量越小，形成多聚体的概率越大 分子量越小，越容易被加工修饰096 越来越多的研究结果表明，与抗菌素生物合成有关的基因往往连锁在一起形成基因簇，它 包括 【 】I 合成基因 II 抗性基因 III 运输基因 IV 调控基因 I + II + III I + II + IV I + III + IV II + III + IV I + II + III + IV 097 利用染色体走读法分离抗菌素生物合成基因簇的第一步通常是克隆 【 】 限速步骤的生物合成基因 生物合成途径分支步骤的基因 抗菌素抗性基因 基因表达调控基因 控制途径第一步

36、反应的基因098 第二代基因工程是指 【 】 途径工程 代谢工程 蛋白质工程 RNA 基因工程 细胞器基因工程099 蛋白质工程的战略是设计定做新型蛋白质，但其具体操作是在基因水平上进行的，这些操 作技术包括基因定向突变及人工合成，其中 M13 法和 PCR 法定点突变的原理是 【 】 在 DNA 聚合反应所需的引物中直接引入突变 在 DNA 聚合反应过程中通过碱基对错配引入突变 在 DNA 模板单链中用化学试剂诱导突变 在 DNA 连接反应过程中引入突变 化学修饰 DNA 体外复制产物100 下列生化产品中二级基因产物的是 【 】 抗菌素 胰岛素 干扰素 生长激素 白细胞介素101 利用 D

37、NA 同源重组技术人们可以【】 灭活基因 表达基因 复制基因 纯化基因 合成基因102 重组分子的不稳定性表现在 【 】I DNA 片段缺失或重排 II 外源基因整合入受体细胞染色体 DNA 上 III 重组质粒丢失 I I + II I + III II + III I + II + III103 基因工程菌中重组质粒的丢失机制是 【 】 重组质粒渗透至细胞外 重组质粒被细胞内核酸酶降解 重组质粒在细胞分裂时不均匀分配 重组质粒杀死受体细胞 重组质粒刺激受体细胞提高其通透性列题目每部分选作两题：外源基因在大肠杆菌中的高效表达原理部分104105106107108109110111112113

38、114115116117大肠杆菌为什么能高效表达外源基因？ 什么叫开放性阅读框架（ ORF ）？ 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？ 启动子的克隆筛选如何操作？ 目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？ 启动子为何需要具有可控性？IPTG 诱导 Plac 启动子的分子机制是什么？PlacUV5 启动子与 Plac 启动子的区别是什么？cI857 与 cI 的区别是什么？Ptrp-Pl 双质粒系统的工作原理及优越性是什么？T7 启动子使用时为什么要选用大肠杆菌 DE3 株？什么是 RBS 和 SD 序列？ 什么是密码子的偏爱性？其影响因素有那些？ 怎样纠正大肠杆菌对外源基因

39、密码子的偏爱性？大肠杆菌工程菌的构建策略部分118119120121122123124125126127128129130131132133什么是包涵体？其形成机理是什么？ 盐酸胍和尿素为什么能溶解包涵体？ 包涵体型重组蛋白表达法的优缺点是什么？ 包涵体如何分离？ 分泌型异源蛋白表达法的优缺点是什么？T4-DNA 聚合酶为什么不催化聚合反应而催化单链切除反应？ 分子伴娘的作用及其名字的由来是什么？ 融合蛋白表达法的优缺点是什么？ 表达融合蛋白时应注意什么关键问题？Pinpoint 融合表达载体的功能是什么？寡聚型异源蛋白表达法的优缺点是什么？ 外源基因整合的主要用途是什么？ 什么叫同源序列？

40、什么是同源整合和同源交换？PEST 序列是什么？对付细胞内源性蛋白酶降解重组表达产物的手段有哪些？重组异源蛋白的体外复性活化部分134135136137138139140在由重组蛋白所产生的包涵体中，能形成可逆性集聚体的化学键是什么？ 尿素常用来变性包涵体，但在使用时常需要预处理，原因是什么？ 在蛋白质重折叠中，还原型和氧化型谷光甘肽的作用是什么？ 分泌在大肠杆菌细胞周质中的重组蛋白可以维持正确的折叠状态，原因是什么？ 革兰氏阳性菌能将蛋白质直接分泌到细胞外，革兰氏阳性菌为什么不能？ 促进二硫键正确配对的两大关键因素是什么？ 使用分子伴娘可明显改善变性蛋白的重折叠，有意义的尝试是什么？大肠杆菌

41、工程菌培养的最优化控制部分141 大肠杆菌在以葡萄糖为唯一碳源的培养基中有氧呼吸，其典型的 生长速率 Y 值为每克葡萄糖多少克干重细胞？142143 么？144细菌在什么培养阶段容易分泌内源性蛋白酶？连续式发酵对基因工程产品的大规模生产有什么优势？缺点是什重组异源蛋白和细胞内代谢产物的最大合成速度分别在何菌龄？基因工程菌的遗传不稳定性及其对策部分145146147148149 为什么？150基因工程菌的遗传不稳定性的两种主要表现形式是什么？ 基因工程菌的遗传不稳定性的主要机制是什么？ 什么叫转座子和转座元件？ 改善工程菌遗传不稳定性的对策有哪些？ 将大肠杆菌 ssb 基因克隆在载体上，能选择性

42、增殖含质粒的细胞，怎样才能在发酵过程中保持工程菌的遗传稳定性？利用重组大肠杆菌生产医用蛋白或多肽部分151152153长期使用猪胰岛素的副作用是什么？ 产人胰岛素的大肠杆菌工程菌的构建战略有哪几种？ 在人胰岛素 AB 链分别表达法中， 为何将 AB 链编码序列与 - 半乳糖苷酶基因融合？154155156157158胰岛素 AB 链体外混合时，为什么要采用二比一的分子比？ 胰岛素原表达法为何比 AB 链分别表达法更优越？Met-hGH 为何比 Phe-hGH 更加昂贵？Phe-hGH 工程菌的构建战略有哪两种？ 在四种氨肽酶中，哪几种能被用于由 Met-hGH 转化为 Phe-hGH的反应？为

43、什么？159160161162163什么叫等位基因和复等位基因？ 干扰素和白介素均为糖蛋白，为何可以用大肠杆菌生产？ 构建杂合 - 干扰素有何重要意义？ 重组抗体的生产战略有哪些？ 杂交瘤技术生产人源抗体的主要优缺点是什么？芽孢杆菌的重组表达系统部分164165166167芽孢杆菌作为基因工程受体的主要优缺点是什么？ 芽孢杆菌自身蛋白质工业化产物包括哪些？ 芽孢杆菌与大肠杆菌的启动子及 因子之间有什么关系？ 在芽孢杆菌中，外源基因的表达受到细菌生长期的严格限制，其原因是什么？168169170171172173174175176 么？177178芽孢杆菌型两大类载体质粒中的复制子分别来自什么菌

44、株？pYQL 质粒可控性表达外源基因的工作原理是什么？野生型芽孢杆菌表达外源基因的最大限制性因素是什么？ 芽孢杆菌碱金属离子转化法的优缺点各是什么？ 为什么说短小芽孢杆菌是一种较为理想的分泌表达系统？ 短小芽孢杆菌分泌蛋白质的机理是什么？ 高温工业酶制剂与普通酶制剂相比，其优点是什么？FGF 作为基因工程产物的主要用途是什么？苏云氏芽孢杆菌产生的昆虫毒性晶体蛋白作为农药的优缺点是什昆虫毒性晶体蛋白的杀虫机制是什么？ 构建苏云氏芽孢杆菌基因工程菌的主要战略有哪些？棒状杆菌的重组表达系统部分179180棒状杆菌作为基因工程受体的主要特征是什么？大肠杆菌、芽孢杆菌、链霉菌中部分启动子能在棒状杆菌属中

45、发挥作用，其分子机制是什么？181 棒状杆菌属 pAJ667 考斯质粒在转导受体细胞时需要使用辅助噬 菌体，原因是什么？182183184185186187棒状杆菌属的基因工程受体细胞最好是营养缺陷型的，为什么？ 棒状杆菌的转化方法有哪几种？ABC 运输系统的含义是什么？ 氨基酸基因工程菌的构建战略有哪几种？ 苏氨酸工程菌构建时主要解决的问题是什么？ 氨基酸生物合成基因表达调控的主要机制是什么？链霉菌的基因工程部分188189190191192193194195196197链霉菌作为基因工程受体的主要特征是什么？ 变铅青链霉菌作为受体菌的主要优点是什么？ 变铅青链霉菌的转化方法有哪几种？ 链霉

46、菌基因组的显著特征是什么？ 链霉菌启动子的主要特征是什么？ 抗生素生物合成基因在链霉菌中的顺序组织特征是什么？ 抗生素生物合成基因的克隆战略有哪些？ 哪些抗生素的生物合成与聚酮合酶（ PKS ）有关？ 林可霉素生产菌对林可霉素的抗性机制是什么？ 利用 DNA 重组技术改良抗生素生产菌的战略包括哪些方面？丝状真菌的基因工程部分丝状真菌作为基因工程受体的主要特征是什么？ 来自巢曲霉菌的 amdS 基因作为筛选标记的机理是什么？ 利用遗传互补发克隆丝状真菌功能基因的主要战略是什么？ 丝状真菌随机整合克隆战略的工作原理是什么？ 丝状真菌原生质体与链霉菌原生质体在制备方法上的区别说明什么？ 美国 FDA

47、 批准为基因工程安全受体菌的两个丝状真菌属是什么？ 丝状真菌基因表达调控的主要特征是什么？ 异源重组蛋白在丝状真菌中产量较低的主要原因是什么？ 阿洼曲霉菌属脱氧葡萄糖抗性受体株的优点是什么？ 青霉素和头孢菌素生物合成基因的分子遗传学特征是什么？ 解除抗生素生物合成途径限速步骤瓶颈效应的第一个成功范例是什么？ 上述类似的战略为什么不能在青霉素生产菌中奏效？ 利用 DNA 重组技术构建产 7-ACA 和 7-ADCA 工程菌的意义何在？ 构建高产 - 内酰胺类抗生素生产菌的三大战略是什么？酵母菌的基因工程部分 酵母菌作为基因工程受体的主要特征是什么？ 酵母菌受体菌诱变筛选的主要类型是什么？ 降低酵

48、母菌泛蛋白依赖型蛋白降解作用的三种方法是什么？ 酿酒酵母 2 质粒的主要特征是什么？ 酵母菌自主复制型载体质粒构建时所需复制子结构的来源是什么？ 酵母着丝粒区域 DNA 序列 CEN 的功能是什么？ 人造酵母染色体的组成和功能是什么？ 酵母菌的转化方法有哪些？ 酵母菌为什么能高频接纳线型 DNA 分子和单链 DNA 分子？ 常用于酵母菌载体构建的抗生素标记是什么？ 二氢叶酸还原酶 - 氨甲喋呤筛选系统的工作原理是什么？ 目前广泛使用的酵母菌可控性启动子有哪些？ 酿酒酵母 GAL 超诱导表达系统的工作原理是什么？ 酿酒酵母在表达外源基因时的限制性因素是什么？ 毕赤酵母表达外源基因的优势表现在哪些

49、方面？ 酵母菌蛋白质糖基化修饰的主要特征是什么？ 克服酵母菌超糖基化修饰的主要措施有哪些？ 利用酵母菌成功表达和生产医药的两个例子是什么？ 重组人血清白蛋白的主要困难是什么？其他具有重大经济价值的微生物基因工程部分 梭菌属的工业价值表现在哪些方面？ 如何克服梭菌属的低转化效率？ 将枯草芽孢杆菌噬菌体 3tI 甲基转移酶基因克隆入梭菌属的目的是什么？ 构建纤维素发酵乙醇的工程菌需要解决什么技术难题？ 食用乳杆菌基因工程改良的主要方向有哪些？ 假单孢菌属基因工程改良的意义是什么？ 硫杆菌属基因工程改良的意义是什么？动物转基因技术的基本概念部分1981992002012022032042052062

50、07208209210211212213214215216217218219220221222223224225226227228229230231232233234235236237转基因技术的基本内涵是什么？ 动物转基因的主要受体形式是什么？ 动物转基因过程的总有效率指的是什么？ 动物转基因的主要形式有哪些？ 转基因的分子结构有哪几大类型？ 转基因在动物体内的表达特征有哪些？ 时空特异性基因表达的主要控制节点在哪里？ 动物转基因的可控表达形式主要有哪些类型？ 很多情况下动物转基因可以用 IPTG 进行诱导，为什么？ 转基因的共抑制效应指的是什么？其特征如何？ 造成共抑制效应的可能因素是什么

51、？转基因导入动物体内的方法部分目前转基因的动物受体细胞类型主要是什么？ 动物细胞在转基因时常用的筛选标记是什么？ HAT 选择性培养基的工作原理是什么？ 动物细胞的物理转化方法有哪些？优缺点各是什么？ 动物病毒转染法的主要优缺点是什么？利用 SV40 为载体的外源基因的克隆程序是什么？ 逆转录病毒的感染及繁殖周期如何？ 利用逆转录病毒为载体的外源基因的克隆程序是什么？ 重组病毒转染时为什么要使用辅助病毒？ 什么是多效性胚胎干细胞（ ES ）？ 胚胎干细胞转染的基本过程是什么？利用动物转基因技术研究基因的表达与功能部分利用报告基因探测动物细胞内基因表达调控元件的原理是什么？ 利用同源基因灭活靶基

52、因的工作原理是什么？ 反义基因作为转基因的三种途径是什么？利用转基因动物或细胞生产生物大分子部分什么是动物反应器？ 转基因在动物细胞内高效表达的特殊方式是什么？ 动物基因表达载体上为什么还要加装内含子？ 第一个由重组哺乳动物细胞规模化生产的基因药物是什么？ 利用动物组织作为生物反应器生产基因药物的优点是什么？ 将动物乳腺作为生物反应器的理由是什么？ 多数人体基因不能在动物乳腺组织中高效表达的原因是什么？转基因技术在动物遗传特性改良中的应用部分转基因鼠的主要研究目标是什么？ 老年痴呆症的病因可能是什么？ 转基因牛的主要研究目的是什么？ 转基因鸡的主要研究目的是什么？基因治疗部分238239240

53、241242243244245246247248249250251252253254255256257258259260261262263264265266267268269270271272273274275276277278279280281282283基因治疗的基本定义是什么？ 基因治疗的四大基本内容是什么？ 基因诊断的主要方法有哪些？ 什么是体内疗法和体外疗法？ 用于基因治疗的基因转移方法有哪些？ 自杀基因的功能是什么？ 自杀基因的旁观者效应指的是什么？ 肿瘤基因治疗的主要策略是什么？ 骨髓细胞转基因的主要意义是什么？ 基因治疗的副作用主要表现在哪些方面？高等植物的遗传学特征部分284

54、285高等植物具有哪些对基因操作极为有利的遗传学特性？高等植物的什么特性对基因操作不利？高等植物的载体转化系统部分286Ti 质粒的主要分子生物学特征是什么？287Ti 质粒诱导植物根部生瘤的机理是什么？288Ti 质粒改造的内容主要有哪些？289Ti 质粒介导的共整合转化程序与二元整合转化系统有什么区别？290利用植物病毒作为载体转染植物的优点是什么？291植物原生质体的再生程序如何？利用植物转基因技术研究基因的表达与功能部分292293植物的报告基因常选用什么基因？利用 T-DNA 灭活和克隆植物基因的原理是什么？310 如何设计利用基因工程技术开发人参大规模生产的工艺过程？311海藻糖是

55、一种由两个葡萄糖分子以 a，a（ 1，1）糖苷键构成的非还原性双糖，存在于多种微生物和植 物的细胞内，难以分泌至胞外。海藻糖在高温、低温、干燥等极端环境中具有保护生物大分子和细胞的重 要功能，因此被广泛应用于医药、食品、保健品、化妆品的制造以及抗寒抗旱转基因植物的构建。相关研 究表明，利用来自原核生物节杆菌（ Arthrobacter ）的麦芽寡糖基海藻糖合酶（其编码基因为 mts）以及来自大肠杆菌的新型淀粉酶（其编码基因为 amy）联合转化淀粉，即可实现海藻糖的大规模产业化，然而上述两种酶在野生型菌株中的含量甚微。已知节杆菌中 mts 基因的部分序列为： 5 TCACCGATCCCTCCGC

56、CGTCGACCCCGAACGCGGCGGGCCGGAGGGC 3 请详细设计一株能高产分泌型麦芽寡糖基海藻糖合酶的基因工程菌的构建路线， 内容包括目的基因的克隆、 重组、表达。312从一种被激活的人白血病 T 淋巴细胞株中提取白细胞介素 2 （ IL-2 ）的 mRNA ，以此为模板体外 合成双链 cDNA ，并通过 TdT 酶增补同聚尾末端的方法将之克隆在 pBR322 的 PstI 位点上， 获得重组质 粒 pHIC7 。天然成熟的人 IL-2 N 端序列为 Ala-Pro- ，其上游为信号肽。为了构建能高效表达成熟人IL-2 的大肠杆菌基因工程菌，必须除去 IL-2 cDNA 中的信号

57、肽编码序列，添加翻译起始密码子ATG ，并将之置于 P L 启动子的控制之下。试利用所给的载体设计一条合理的重组表达质粒构建路线。313组织型纤溶酶原激活剂（ t-PA ）是治疗急性心肌梗塞的首选药物，但由于天然的人 t-PA 对血栓纤 维蛋白的特异性不高，临床上大剂量注射时容易破坏机体正常的凝血系统，导致大出血等致命的副作用。 大量的基础研究结果表明，若将人 t-PA cDNA 编码序列中的第 186 位丝氨酸（密码子为 TCA ）突变为色 氨酸，可有效提高 t-PA 对血栓纤维蛋白的特异性。请使用 pMNC 表达载体完成上述人 t-PA 变体的重组 方案，并指明最佳的受体细胞类型。人 t-PA cDNA 编码序列1 ATGGATGCAA TGAAGAGAGG GCTCTGCTGT GTGCTGCTGC TGTGTGGAGC51 AGTCTTCGTT TCGCCCAGCC AGGAAATCCA TGCCCGATTC AGAAGAGGAG101 CC AGATCT TA CCAAGTGAT C TGCAG AGATG AAAAAACGCA GATGATATAC 151 CAGCAACATC AGTCATGGCT GCGCCCTGTG CTCAGAAGCA ACCGGGTGGA 201