【doc】头孢丙烯中有关物质检查的HPLC法

1、头孢丙烯中有关物质检查的hplc法?研究与交流?2009年第33卷第1期第34页doi:10.3969/j.issn.10015094.2009.01.007药学进展342009,vol33,no.1头孢丙烯中有关物质检查的hplc法刘文华,张国成(东瑞制药有限公司研发中心,江苏苏州215128)摘要】目的:建立头孢丙烯中有关物质的检测方法.方法:采用高效液相色谱法,固定相为c.柱,流动相为乙腈一磷酸二氢铵溶液(10:90),检测波长为280hill.结果:头孢丙烯与各有关物质达到了较好的分离,顺式异构体和反式异构体峰的相对保留时间分别为0.7和1.0,分离度大于2.5.3批样品的中间体杂质含

2、量分别为0.14%,0.15%和0.15%,其它最大单个杂质含量分别为0.38%,0.39%和0.36%,杂质总量分别为1.20%,1.15%和1.18%.结论:本法简便,专属性强,准确度高,重复性好,可用于测定头孢丙烯中的有关物质.关键词头孢丙烯;有关物质;hplc中图分类号r927.1文献标识码b文章编号10015094(2009)01003404determinationofrelatedsubstancesincefproziibvhplcliuwenhua,zhangguocheng(researchanddevelopmentcenter,suzhoudawnrayspharmac

3、euticalco.,ltd.,suzhou215128,china)【abstract】objective:toestablishasuitablemethodforthedeterminationofrelatedsubstancesincefrlrozilbyrphplc.methods:thec18column(250nlnlx4.6mm,5i.lm)andtheacetonitrilephosphatebufferssolution(10:90)wereused,andthedetectionwavelengthwasat280nm.results:theresolutionbetw

4、eencefprozilandtherelatedsubstanceswasidea1.threebatchesofsamplesweretestedandthecontentoftheknownrelatedsubstanceswas0.14%,0.15%and0.15%,respectively.thecontentoftheothermaximumindividualimpuritywas0.38%,0.39%and0.36%,respectivelyandthetotalcontentwas1.20%,1.15%and1.18%,respectively.conclusion:this

5、methodissimpleandaccurate.itmaybeusedtodeterminetherelatedsubstancesincefprozil.【keywords】cefprozil;relatedsubstances;hplc头孢丙烯是第二代口服头孢类抗生素,具有高效,低毒,耐酶,广谱的特点,对革兰阳性菌,革兰阴性菌,厌氧菌的抗菌活性强,其中对革兰阳性菌活性尤为突出.本文参考美国药典,采用乙腈一磷酸二氢铵溶液(10:90)为流动相,测定头孢丙烯中有关物质,并进行了方法验证.1仪器与试药agilentl100型高效液相色谱仪(dad检测器,agilent色谱工作站).接受日期2

6、008.09.09头孢丙烯原料药(以下简称本品,由苏州东瑞制药有限公司研制,批号分别为20020601,20020602,20020603);乙腈为色谱纯,磷酸二氢铵,磷酸及其它试剂均为分析纯.2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:alltechcl8柱(250mln4.6mm,5ixm);流动相为乙腈磷酸二氢铵溶液(1o:9o),其制备方法为:取磷酸二氢铵2o.7g,加水溶解并稀释通讯作者:刘文华,副主任药师;研究方向:新药研究与开发;tel:051265626868-3102;e-mail:1whdawnrays.corn2009,vol33,no.135progressinpharmaceu

7、ticalsciences药学莲履至1800ml,用磷酸调节至ph4.4j,检测波长为280nm,流速为iml?rain,进样量为10l.2.2检测波长的选择分别取合成起始原料和中间体(含顺,反式异构体)适量,以流动相制成每1ml含0.3mg的起始原料溶液和中间体溶液;分别取顺式,反式头孢丙烯各适量,以流动相制成1.5g?l的顺式头孢丙烯溶液和反式头孢丙烯溶液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加人1ml4.o%氢氧化钠溶液,混合1分钟,用盐酸调节ph至中性,再加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,制得碱破坏液;取本品75mg,置5oml量瓶中,加入1ml盐酸,混合io分钟后,用4.0%氢氧化钠溶液

8、调节ph至中性,再加流动相稀1600l2003800e400o2002503003504002/nm504o三oe20100l050.5-10-15.20400?研究与交流?2009年第33卷第1期第35页释至刻度,摇匀,滤过,制得酸破坏液;取本品75mg,加流动相制成1.5g?l的溶液,在强光(6000lx)下照射5小时,滤过,制得强光照射破坏液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加入lml过氧化氢,混合75分钟,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,制得氧化破坏液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,置人60ci=水浴中90分钟,取出,放冷,滤过,制得湿热破坏液.取上述各

9、溶液,分别注入带有dad检测器的液相色谱仪中,记录色谱图,并扫描uv图,结果表明,除末端吸收外,起始原料,中间体,本品及其降解产物在280nm波长处有最大或较大吸收,如图1所示.故选择280nm作为检测波长.loo8o60402002002503003504002/nm200i501005o02002503003504002/nml0008006o0400200omnm2/nma:起始原料;b:中间体(顺式);c:中间体(反式);d:头孢丙烯(顺式);e:头孢丙烯(反式);f:酸破坏液(3.855min);g:酸破坏液(15.114min);h:酸破坏液(19.237min);i:碱破坏液(5

10、.188min);j:强光破坏液(13.521min);k:氧化破坏液(2.964min);l:氧化破坏液(5.188min);m:氧化破坏液(4.161min);n:湿热破坏液(4.025min)图1头孢丙烯有关物质紫外全波长扫描图figureluvt0talwavelengthscanningspectrumoftherelatedsubstancesincefdrozil2009-(-136药学进履第33卷第期第页.2.3系统适用性取本品适量,以流动相制成1.5g?l的溶液,按2.1项下色谱条件,注入液相色谱仪中,记录色谱图,顺式异构体和反式异构体峰的相对保留时间分别为0.7和1.0,分

11、离度大于2.5,理论塔板数按顺式头孢丙烯峰计算不小于2500.2.4专属性试验分别取合成起始原料,中间体及本品溶液各5ml,混合均匀,制成原混合溶液,按2.1项下色2502003150<e1o05oo706o50403o2o1o01la墨jl._-o5l0l520min706o5040302o1o0362009,vo/.33,no.1progresspharmaceuticalsciences谱条件,取10l进样,结果如图2所示.出峰顺序为起始原料,中间体(顺式),中间体(反式),头孢丙烯(顺式),头孢丙烯(反式).分别取2.2项下的酸,碱,强光,氧化及湿热破坏液进样,记录色谱图至主成分

12、峰保留时间的3倍,并对出现的主要杂质进行dad扫描,在各条件下,因破坏而出现的杂质峰均能与主峰有效分离,起始原料,中间体与头孢丙烯也有较好的分离度(见图2),表明该法测定头孢丙烯中有关物质的专属性良好.:.b:.,.一一105lol52o25f,min圣0一c,o5l0152o25t/min三:f:-兽05loi52025l|raina:混合溶液;b:酸破坏液;c:碱破坏液;d:强光照射破坏液;e:氧化破坏液;f:湿热破坏液图2头孢丙烯专属性试验色谱图figure2chmmatoamsofspecialitytestofcefprozil2.5溶液稳定性取2.3项下的溶液,按2.1项下色谱条件

13、,分别于0,2,4小时进样,记录色谱图,以面积归一化法计算,测得最大单个杂质含量和杂质总量分别为0.37%和1.21%(0h),0.37%和1.23%(2h),0.38%和1.18%(4h),表明供试品溶液在4小时内稳定.2.6重复性试验按2.3项下方法分别配制6份溶液,按2.1项下的色谱条件,分别进样,记录色谱图,以面积归一化法计算,测得最大单个杂质含量和杂质总量的平均值分别为0.35%和1.18%,rsd分别为0.5%和0.6%,表明方法重复性较好.2.7检测限分别取合成起始原料,中间体及头孢丙烯适量,精密称定,置50ml量瓶中,用流动相溶解并稀释制成一系列浓度的溶液,分别进样,记录色谱图

14、.按信噪比3:1计算,起始原料,中间体,顺式及反式头孢丙烯的检测限分别为0.38,0.15,0.24和0.16ixg?ml.如如加m0舳加如如加02oo9,vo1.33,no.137progressinpharmaceuticalsciences药学莲展2.8线性关系分别取合成起始原料和中间体适量,精密称定,置同一量瓶中,以流动相制成0.5g?l的溶液,以此溶液作为贮备液,然后梯度稀释成各浓度溶液,并分别进样,记录色谱图,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,其起始原料的线性方程和相关系数分别为:a=3422.36c+0.09157,r=0.99997;顺式中间体为a=18677.36c

15、+1.99457,r=0.99998.结果表明,该色谱条件下,起始原料在1.55一l5.5ixg?ml,顺式中间体在3.9439.4txg?ml均有较好的线性关系.2.9校正因子分别取合成起始原料和中间体及头孢丙烯适量,精密称定,置同一量瓶中,以流动相制成0.3g?l的溶液,平行制备3份;精密量取每份溶液适量,用流动相稀释1o倍和100倍,共9份溶液,分别进样,记录色谱图,测定峰面积,计算各校正因子.结果上述3种物质的平均校正因子分别为2.81210i4,5.45010.,6.82910,故合成起始原料和中间体相对于头孢丙烯的相对校正因子分别为4.12和0.80.2.10样品检查采用加校正因子

16、的主成分自身对照法控制有关物质.取本品适量,用流动相溶解并稀释制成1.5g?l的溶液,作为供试品溶液.精密量取lml,置100ml量瓶中,以流动相稀释至刻度,作为对照溶液.称取合成起始原料和中间体各少量,分别以流动相制成0.3g?lg的溶液,作为定位溶液.按照2.1项下色谱条件,取对照溶液进样,调节仪器灵敏度,使主成分峰的峰高约为满量程的?研究与交流?2009年第33卷第1期第37页10%一25%;取定位溶液进样,确定特定杂质的出峰时间;取供试品溶液进样,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍.供试品溶液色谱图中如显合成起始原料峰或中间体峰,则分别按校正因子4.12和0.80计算峰面积,二者均不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%);如显其它杂质峰,单个最大杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(1.o%);各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%).3批样品(批号:20020601,20020602,20020603)的相关物质测定结果如下:起始原料均未检出;中间体含量分别为0.14%,0.15%,0.15%;其它最大单个杂质含量分别为0.38%,0.39%,0.36%;杂质总量分别为1.20%,1.15%,1.18%,符合要求.3讨论采用加杂质校正因子的主成分自身对照法,