毕业论文 HPLC法测定不同加工方法的半夏中鸟苷

1、 普胜：HPLC法测定不同加工方法的半夏中鸟苷的含量 本科毕业论文题 目 HPLC法测定不同加工方法的半夏中鸟苷的含量学 院 理学院 专 业 应用化学 毕业届别 2015届 姓 名 指导教师 职 称 教授 甘肃农业大学教务处制二一五年三月7目录摘要1关键词1Abstract1Key words1前言11材料21.1原生半夏21.2硫磺熏蒸的半夏21.3焦亚硫酸钠处理的半夏21.4仪器和试剂22实验方法22.1半夏药品供试液的制备22.2鸟苷对照品溶液的制备22.3线性关系考察42.4精密度实验52.5重复性实验52.6样品含量测定63 64 结论7参考文献8致谢9HPLC法测定不同加工方法的半

2、夏中鸟苷的含量普胜（甘肃农业大学理学院应用化学专业，甘肃兰州，730070）摘要：目的：建立半夏中鸟苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6250mm，5um)流动相为甲醇：0.01醋酸(397)；检测波长254nm；流速为1.0mLmin-1。结果:本法精密度高鸟苷溶液在0.010420.09378 mgml1的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9998)。结论：本方法简便，准确重现性好，可作为半夏的含量测定方法。关键词：半夏；鸟苷；高效液相色谱法Determination of the Guanosine in Pinelli

3、a ternata(Thumb.) Breit. From Varied Processing Methods by HPLC PU Sheng（Major in Applied Chemistry in the College of science of Gansu Agriculture University，Gansu Lanzhou，730070）Abstract： Objective： to establish a method for determination of the Guanosine in Pinellia ternate BreitMethods： Using a H

4、PLC method with Agilent Zorbax SB_Cl8(4.6X 250mm，5um)column；the mobile phase was methanol 0.01% ethanoic acid(3:97)；the detection wavelength was set at 254nm；flowrate was 1.0mLmin-1；The precision and stability were finehhe linean range with in 0.010420.09378mgmL-1,r=0.9998.Conclusion: The method Was

5、 simple，accurate and reproducibleAnd can_be used to determine the Guanosine in Pinellia ternate Breit.Key words：Pinellia ternata(Thumb.) Breit.；the Guanosine；HPLC前言半夏为天南星科植物半夏Pinelliaternata(Thunb)Breit的块茎，首载于神农本草经，性温，味辛，有小毒，归脾、胃、肺经。具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结的功效1。半夏含有生物碱、-谷甾醇、多糖、氨基酸、挥发油、半夏蛋白及无机元素等多种成分。半夏水溶性化学

6、成分鸟苷通常作为半夏质量的评价指标，通常采用反相高效液相色谱进行分析检测2-5。鸟苷和腺苷是生物碱类成分，具有明显的药理作用。有文献报道鸟苷和腺苷可以改善心脑血液循环，防止心率失常，抑制神经递质释放和调节酸环化酶活性等6本文采用HPLC同时测定不同加工方法的半夏中鸟苷含量的变化，操作简便，方法可靠，重现性好，可以作为半夏药材的质量控制方法之一。近年来，硫磺熏蒸仍广泛应用于各类中药材,达到防霉、防腐、防虫蛀和漂白增色等目的。硫磺熏蒸主要应用于山药、粉葛等粉性足的药材;土鳖虫、水蛭等动物性药材；金银花、菊花等花类药材和一些茎木皮类、果实种子类药材7由于硫磺有漂白增色作用,在中药材加工和贮藏中滥用现

7、象十分严重近期药理实验显示由于硫 磺熏蒸导致的SO2残留对人体具有多种危害，因此，2005版中国药典取消了所有中药材硫磺熏蒸工艺8。1 材料1.1 原生半夏将新鲜半夏脱皮洗净后,于60烘箱中烘干至恒重，粉碎后过40目筛置干燥器中备用。 1.2 硫磺熏蒸的半夏将新鲜半夏脱皮洗净后，置放有硫磺的瓷杯中，点燃硫磺，待杯中充满烟雾时，密闭瓷杯。室温闷制12 h，取出放置l2 h，观察其表面颜色，若颜色变黄则需要再熏制58 h。待表面颜色变自并不再变化时，取出，于60烘箱中烘干至恒重，粉碎后过40目筛置干燥器备用。1.3 焦亚硫酸钠处理的半夏 将新鲜半夏脱皮洗净后放入瓷杯中，向杯中加入适量的焦亚硫酸钠，

8、用清水浸泡23小时，拿出半夏，于60烘箱中烘干至恒重，粉碎后过40目筛置干燥器备用。 1.4 仪器和试剂高效液相色谱仪FL2200-2 (浙江福立分析仪器有限公司)、电子天平BS 224S（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、恒温水浴锅HWS(上海精密仪器仪表有限公司)。鸟苷对照品购于中国食品药品检定研究院 （含量98%） 流动相用甲醇：0.01醋酸(397) 经孔径0.45m膜过滤；甲醇为分析纯 半夏药材（产地不详）2实验方法2.1半夏样品供试液的制备半夏药材,打粉，研细过40目筛，精密称取1.0g，置50mL具塞三角瓶中加50mL蒸馏水浸0.5h。超声提取40min，水浴浓缩至干，用10mL水

9、充分溶解，0.45m膜过滤制得样品溶液于10ml容量瓶中，稀释至刻度，备用。2.2 鸟苷对照品溶液的制备 精密称取鸟苷对照品10.42mg加水溶解，定容于100mL容量瓶中，配制成浓度为0.1042mg.ml-1的对照品溶液。2.3 线性关系考察取鸟苷标准品适量，加水溶解，配制成浓度为0.1042mgml的鸟苷标准溶液。分别精密吸取上述标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、5.00ml 、9.00ml分别置于10.00ml的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀，得到不同浓度的标准品溶液。分别用以上各标准品溶液注入液相色谱，取得峰面积（见表1）和色谱图(见图1)。表1 不同浓度标准溶液峰

10、面积的测定标准品溶液浓度（mgml-1）峰面积（mAUmin-1）0.01042610314.30.020841222749.00.031261748129.90.052102898089.00.093785180026.2图1鸟苷标准品的HPLC图谱以标准品浓度对峰面积值进行回归。得到回归方程为：Y=5463927.512X+54496.76，r=0.999 (n=5)。可见鸟苷在0.010420.09378 mgml-1范围了线性关系良好，见图2。图2 鸟苷的标准工作曲线2.4 精密度实验取浓度为0.1042 mgml的鸟苷标准溶液，进样量10l，重复测定3次，RSD为0.841%。结果见

11、表2。表2 样品溶液精密度考察测定次数峰面积（mAUmin-1）RSD（%）1620754.7352631275.1360.8413625735.3942.5 重复性实验取原生半夏粉末1.0g，精密称定。平行3份，按供试品制备方法制备样品溶液，每份进样1次，进样10l，取峰面积的平均值计算，RSD=0.82%。结果见表3。 表3 原生半夏重复性考察测定次数峰面积（mAUmin-1）RSD（%）1700286.92709159.30.823130091.72.6 样品含量测定取不同加工方法的半夏样品，按“2.1”制备供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积（见表4），计算含量。结果见表5表4 样品

12、含量测定考察样品峰面积（mAUmin-1）原生半夏700286.9硫磺处理半夏334553.4焦亚硫酸钠处理半夏293373.0 表5 样品含量测定结果样品批次样品量/g峰面积（mAUmin-1）所含鸟苷浓度/(mg/ml)鸟苷含量/mgg平均含量mg/g原生半夏11.0027700286.90.11821.17881.186621.0011701159.30.11841.182731.0022710949.50.12011.1984硫磺熏蒸半夏11.0023334553.40.05130.51180.511321.0031340019.90.05220.520431.0045329975.0

13、0.05040.5017焦亚硫酸钠处理半夏11.0016293373.00.04370.43630.434021.0024291114.20.04330.432031.0032289925.90.04310.43363讨论(1)半夏的成分比较复杂，鸟苷是半夏药理作用的主要有效成分【9】，故该研究选用鸟苷含量为考查指标对不同加工方法的半夏进行试验研究。(2)半夏中鸟苷含量测定结果讨论，线性关系考察中得到的回归曲线方程为Y=5463927.512X+54496.76，r=0.999 (n=5)。可见鸟苷在0.010420.09378 mgml-1范围了线性关系良好。精密度试验得，RSD为0841，

14、表明仪器精密度良好。重复性试验得出RSD为0.82，结果表明重复性良好。4结论试验结果表明,不同的加工方法处理后的半夏中鸟苷的含量出现了明显的差异，鸟苷含量与原生半夏比较均有不同程度的下降，原生半夏中鸟苷含量为1.1866mgg-1、硫磺熏蒸后的半夏中鸟苷含量为0.5113mgg-1、与原生中鸟苷的含量相差3倍多。焦亚硫酸钠处理的半夏中的鸟苷含量为0.4340mgg-1，与原生半夏中鸟苷含量相差4倍多。由此可见原生半夏中鸟苷的含量最高，焦亚硫酸钠处理的半夏生物碱含量最低。因此半夏在两种加工方法后半夏中的鸟苷含量都明显的降低。然而鸟苷是到目前为止反映半夏质量的较为重要的指标成分。 由于半夏硫熏易

15、引起药材二氧化硫超标 且鸟苷含量下降10所以半夏加工时不要用硫熏和焦亚硫酸钠处理。参考文献1 中国药典一部S2010：1102 吴皓，文红梅，郭戎，等半夏姜制对鸟苷含量的影响J中国中药杂志，1998，23(11)：6613 张科卫，吴皓，崔小兵，等不同产区半夏药材中鸟苷含量的测定J中成药。2000，22(11)：7694 吴皓,束建海,蔡宝昌,等.半夏姜制对-谷甾醇和总生物碱含量影响J中国中药杂志1995，20(11)：662-6645 赵杨，靳风云，伍庆，等高效液相色谱法测定贵州不同产地半夏药材中鸟苷和腺苷的含量J时珍国医国药，2007，18(1)：236 夏敏.高效液相色谱法测定蛹草中腺苷

16、的含量J.淮阴师范学院学报-自然科学版.20043(3)：2267 段金廒, 赵润怀, 宿树兰, 等. 对硫磺熏蒸药材的基本认识与建议. 中国现代中药, 2011, 13( 4) : 3-58 中国药典一部（2005年版）M北京：化工出版社9陆善旦，胡廷松，陈振杰名贵中药材高产栽培技术M南宁：广西科学出版社，1990：13013610吴 皓 崔小兵 毕肖林 不同产区半夏药材中鸟苷含量的测定J 中成药2000,22(11) : 769. 致谢大学四年学习时光已经接近尾声，在此我想对我的母校，我的父母、亲人们，我的老师和同学们表达我由衷的谢意。感谢我的家人对我大学三年学习的默默支持;感谢我的母校甘肃农业大学给了我在大学四年深造的机会，让我能继续学习和提高;感谢老师和同学们四年来的关心和鼓励。老师们课堂上的激情洋溢，课堂下的谆谆教诲;同学们在学习中的认真热情，生活上的热心主动，所有这些都让我的三年充满了感动。这次毕业论文设计我得到了很多老师和同学的帮助，其中我的论文指导老师赵军老师对我的关心和支持尤为重要。每次遇到难题，我最先做得就是向赵军老师寻求帮助，而赵军老师每次不管忙或闲，总会抽空来找我面谈