天然成分分离与精制一般方法

1、五、天然成分分离与精制一般方法（1）简单萃取：利用分液漏斗进行两相溶剂萃取。五、天然成分分离与精制一般方法（2）液液连续萃取重溶剂萃取器轻溶剂萃取器五、天然成分分离与精制一般方法 （3 ） 逆流连续萃取：是一种连续的两相溶剂萃取法；其装置可具有一根、数根或更多根的萃取管；效率高，不易乳化。 重质提取液提取装置示意图轻质提取液提取装置示意图多管逆流连续萃取法装置图五、天然成分分离与精制一般方法（4）逆流分配法（CCD）：又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法，与两相溶剂逆流萃取法原理一致，对于分离具有非常相似性质的混合物效果较好。一般50时，简单萃取即可分离，50时，则易采用逆流分溶法。 CCD

2、法的分离过程示意图五、天然成分分离与精制一般方法（5）液滴逆流分配法（DCCC）：本法必须选用能生成液滴的溶剂系统，且对高分子化合物的分离效果较差，处理样品量小，并要有一定的设备，操作较繁琐。 DCCC原理示意图五、天然成分分离与精制一般方法2.纸色谱（PPC）原理：纸层析法实际上是一种液液分配技术，纸主要系由纯粹的纤维素组成，纤维素能从大气，尤其能从被水蒸气饱和的大气中吸收高达22%左右的水，正是这些吸附在纤维素上的水起着固定相的作用，为保证使纤维素维持被水所饱和的状态，许多用于纸层析法的展开溶剂都含水，作为溶剂的一个组分，当溶剂沿纸上行时，化合物即在固定的水相和移动的溶剂相之间进行分配。

3、操作方法：作纸层析时，在一张高级滤纸的底边附近点上个斑点然后将纸放在一只展开槽中， 溶剂借助毛细管作用沿纸上行，并带着点在纸上的混合物的组分以不同速率向上移动，由于水相是固定的，因此混合物中水溶性最大，或形成氢键能力最大的组分成了受到阻止而移动得最慢的组分。纸层析法多数应用于高度极性的化合物，或用于具有多官能团的化合物。最普遍使用纸层析法的是糖类、氨基酸和天然色素。由于滤纸是可以造得很均匀的，故纸层析法中的Rf值通常是可信赖的，然而，测量Rf值时习惯上都从斑点的前线(顶部)量起，而不像TLC中习惯上都从斑点中心量起。五、天然成分分离与精制一般方法上行展开常用仪器下行展开常用仪器中药木蝴蝶黄酮体

4、的纸层析展开溶剂：乙酸乙酯吡啶 水（4：2：1)五、天然成分分离与精制一般方法 糖类径向纸层析溶剂系统：正丁醇丙酮水（2：7：1） 显色剂：邻苯二甲酸苯胺样品1麦芽糖、核搪；2乳已糖；3麦芽糖、乳已糖、葡萄糖、阿拉伯糖、核搪、鼠李糖；4葡萄糖、鼠李糖； 5阿拉伯糖。纸层析小结原理：分配原理支持剂：纤维素固定相：水 流动相：水饱和的有机溶剂 Rf值：化合物极性越小，Rf值越大；反之，化合物极性越大，Rf值越小。应用：用作微量分析，特别适合于亲水性较强的成分，其层析效果往往比吸附薄层色谱效果好。但纸层析一般需要较长的时间。 五、天然成分分离与精制一般方法3.液液分配柱色谱 原理： 分配层析是以一种

5、多孔物质吸着一种极性溶剂，此极性溶剂在层析过程中始终固定在支持剂上，因此称为固定相。另用一非极性溶剂(与固定相不相互溶)洗脱，此洗脱剂在层析过程中始终是移动的，称为移动相。溶质在固定相和移动相之间，在柱上作连续的、动态的不断分配，由于不同成分在两相间分配系数的差异而得以分开。 分配层析所用多孔支持刘，主要有硅胶、硅藻土(商品名Celite)、纤维粉等，近年来，有用有机支持剂的，如微孔聚乙烯粉等，分配层析所用仪器操作一般与吸附层析相同。五、天然成分分离与精制一般方法操作方法：将预先选定的固定相溶剂(一般为水溶液或极性溶剂)加入支持剂硅胶中，搅拌混合均匀，倾入事先选定的移动相溶剂中，激烈搅拌，使两

6、相互相饱和达到平衡；层析管中放移动相(事先务必用固定相溶剂剧烈振摇，互相饱和，以造成层析时稳定的平衡条件)，将上述吸着固定相的硅胶湿法装柱，不断轻敲管壁，使固定相支持剂压紧，样品一般可溶于移动相中上柱，继以移动相洗脱，按固定体积收集，分别浓缩处理；或根据样品的具体情况选择一种物理方法作含量测定，与氧化铝层折相同。五、天然成分分离与精制一般方法层析分离过程用一只螺旋夹控制流速的玻管用活塞控制流速的 玻管五、天然成分分离与精制一般方法 如图所示为薄膜塑料柱，因使用方便、节省淋洗剂、减少蒸发量等优点，应用日趋广泛。薄膜塑料柱总是以扁平成卷保存的，两侧常有很深的折痕。使用前需将裁取的一段薄膜管一端扎紧

7、，另一端套在一段玻管上井用棉线扎固。将这段玻管穿过一个软木塞。然后将薄膜管放进一根又粗又长，下端拉细了的玻管内，使塞子塞紧大玻管的口。用水泵自大玻管下端抽气，薄膜柱即因内部压强大于外部而自行展圆。待装入吸附剂后在其下部扎几个小孔即可使用。五、天然成分分离与精制一般方法正相分配色谱 固定相：水、缓冲溶液 流动相：固定相饱和的氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂 洗脱顺序：化合物极性越小，越先出柱；反之，化合物极性越大，越后出柱。 应用：通常用于分离水溶性或极性较大的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物。 反相分配色谱固定相：石蜡油、化学键合固定相 流动相：固定相饱和的水或甲醇等强极性有机溶

8、剂 洗脱顺序：化合物极性越大，越先出柱；反之，化合物极性越小，越后出柱。 应用：适合于分离脂溶性化合物，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等。 五、天然成分分离与精制一般方法4.液液分配薄层色谱法 液液分配色谱法也可在硅胶薄层色谱上进行。因此，液液分配柱色谱的最佳分离条件可以根据相应的薄层色谱结果（正相柱用正相薄层色谱，反相柱用反相薄层色谱）进行选定。 举例： 硅胶G薄层硬板的制备 硅胶是最常用的吸附剂。使用市售硅胶G(即在硅胶中已加入1214煅石膏)制板时，只需将适量硅胶G加水2.53份，调成均匀的糊状，至石膏开始凝固时铺板；铺成的薄层板置水平台面上，自然干燥后，即可在105110烘箱中加热活化，

9、一般需12小时，从烘箱中取出薄层，保存于干燥器中备用；干燥器可用无水氯化钙或硅胶为干燥剂，活化时间根据被分离组分的性能而定。五、天然成分分离与精制一般方法 自制简易涂铺器示意图 1. 涂铺器 2玻璃板 3含粘合剂或不含粘合剂的吸附剂 4涂铺过吸附剂的薄层硬板的涂铺装置示意图载玻片浸渍涂浆五、天然成分分离与精制一般方法制作两根毛细吸液管示意图1.在火焰中旋转直至烧软 2.从火焰中取出并拉开3.在拉伸段的中央轻轻搓捻 4.折成两半得到两个吸液管 将l毫克左右的固体试样或一滴液体试样置于一个诸如表面皿或试管之类的小容器中，然后将样品用几滴挥发性溶剂（如氯仿、丙酮或二氯甲烷等）加以溶解，如果试样是溶液

10、，就可直接用该溶液， 按上法制成的小毛细滴管在充填试样时，可将其细的一端浸入试样溶液中 毛细管作用使试样进人滴管中，将滴管轻轻触及薄层板中距底部l厘米左右处的一个点上，使滴管内的液体流出。五、天然成分分离与精制一般方法薄层板在不同的层析缸中展(a)为立式，(b)为卧式，(c)和(d)为斜靠式，(e)为下行式， (f)为制备纯样品所用的大型展开槽，亦为斜靠式。(a)(b)，(c)，(d)，(f)统称上行式。展开的薄层色谱板五、天然成分分离与精制一般方法紫外显色法：另一种能给出良好显示结果的方法是通过在涂板所用的吸附剂中加进一种荧光指示剂来加以实现的。经常使用的是硫化锌和硫化镉的混合物。用此法处理

11、过的板放在紫外光下时，整块板发荧光，然而板上会出现黑点，所看到这个黑点就是分离开来的化合物将荧光猝灭之处。碘显色法：将已展开过且已干燥过的薄板放在一只内中放有几粒碘晶体的有螺旋盖的广口瓶中，将瓶盖好，置温度较低的蒸气浴上缓缓加热瓶内充满碘蒸气，因此斑点即开始出现，当斑点的呈色已足够强时，将板从瓶中取出，用铅笔画出斑点之轮廓，斑点是不能持久显色的，它们的颜色系由碘和有机物所形成的络合物造成当碘从板上升华逸出时，斑点即行褪色。因此，应该迅速标清它们的轮廓，除饱和烃和烃基卤外，几乎所有化合物均会与碘形成络合物， 斑点的强度并不精确地代表存在的物料量，只不过是一种最粗略的指示而已。五、天然成分分离与精

12、制一般方法展开溶剂的快捷选择法：在单独一块板上点上某一样品的几个班点，斑点之间至少应相隔约1厘米，让溶剂充入一支滴管中并让此滴管与斑点之一轻轻接触，溶剂将向外扩展成一圆圈，应将溶剂前沿用铅笔加以标出，在每一斑点上各点上一种不问溶剂，当这些溶剂向外扩展时，所有斑点都将扩大成同心圆环从这些环的外形来看，便可对溶剂的适宜性作出大致的判断。图所示者即为用此法进行试验时经常遇到的几种情况。五、天然成分分离与精制一般方法Shall设计的簿层色谱条件选择图 图中的罗马数字表示吸附剂活性级别，实线三角形是可以转动的，虚线三角形表示旋转后的位置。假设分离非极性化合物，将三角形的一个角旋向分析物中的非极性位置，则其余两个角便指出所要求的溶剂(非极性)和吸附剂的活性级别，这只是一个粗略的原则。五、天然成分