康乃馨植物组织培养

1、v1.0可编辑可修改康乃馨植物组织培养实验报告08级生物科学（2）班刘姣姣学号：0217康乃馨植物组织培养一、实验目的：掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。二、实验原理：香石竹(学名：Dianthus caryophyllus )又名康乃馨，花色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济 价值1。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小,花色产生斑点，退 色甚至不开花，影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获 得“无病毒”的健康植株,对于引进的少而新的脱毒种苗，再进行一次 茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法 快速繁殖,在短期内，就

2、可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速 在生产上推广应用，取得明显的经济效益。三、实验仪器与材料：仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、不锈钢碟子、纱布、记号笔、标签纸试剂：75沱醇、升汞、无菌水、MS培养基、IAA L、BA L、蔗糖、琼脂四、实验步骤：培养基的配方1、香石竹的生芽培养基MS+ IAA L) + BA( L)+NAAL)+ 蔗糖(30g/L)+ 琼脂(8g/L)，配制, 用小培养瓶分装1015瓶。另外，需要制备无菌水20瓶(大培养瓶)，每人34瓶，纱布、 碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。2、香石竹的继代培养基MS+ BA( L)+NAAL)+

3、蔗糖(30g/L)+ 琼脂(8g/L), 配制，用小培养 瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水20瓶(大培养瓶)，每人3-4瓶，纱布、 碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。3、香石竹的生根培养基MS生根培养基为1/2MS+NAAL)蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)，配制, 用小培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水20瓶(大培养瓶)，每人3-4瓶，纱布、 碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。香石竹的生芽培养1、无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯， 照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照 明日光灯。洗手，用

4、纱布吸取75%酉精擦手，擦拭超净台，擦拭培养 基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭 菌，待冷却后使用。2、外植体消毒选取香石竹叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时， 将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织，放 入培养瓶中，用75%勺酒精浸泡消毒30sec,将材料移入耕汞溶液浸 泡10分钟，然后在超净台内用无菌水冲洗34次。材料消毒完成必。3、外植体的制备将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份，然后在无菌超净工 作台上，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在左右。以上操作 均需在酒精灯火焰旁进行。4、外殖体接种用灭菌过的镊子将切好的外植体接种到配

5、置好的接种培养基上， 每瓶接2-3 （可以更多一些）块。接种培养基为MS+ L + 6- BA L, 蔗糖3%,琼脂%接种完成后盖上瓶盖，贴标签，注明材料名称、接 种日期和姓名。5、培养与观察将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室培养。整理，清洁超 净工作台。香石竹的培养条件为温度 25 1C , 一昼夜光照16h,光照 强度2000IX。经过10天左右的培养，大部分茎尖开始萌动，逐渐长 大,20天左右即可长成一小丛植株3。定期观察培养情况，包括观察 日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。香石竹的继代培养1、无菌操作准备将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒 20-30

6、min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酉精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却 后使用。2、无菌操作接种酒精灯火焰旁打开香石竹芽苗培养基，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗簇切割成含23芽苗，然后切 去芽苗的上端。3、培养将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行光照培养。整理、清洁超净工作台。4、观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等， 并做好记录。香石竹芽苗的诱导生根1、无菌操作准备将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外

7、灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照 明日光灯。洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养 基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭 菌，待冷却后使用。2、无菌操作接种酒精灯火焰旁打开香石竹培养瓶，用镊子取出香石竹芽苗，置于 无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接 3个。盖上瓶盖，贴 上标签，注明材料名称、接种日期和姓名。3、培养将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行黑暗培养。整理、 清洁超净工作台。4、观察记录定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等， 并做

8、好记录。缓苗移栽试管苗在移栽前几天一般都需要进行炼苗，让它有个逐步适应 环境的过渡阶段，一般方法是先将培养瓶从培养室拿到常温下放置， 然后将试管苗容器口上包扎的塞子或纸去掉放置几天， 此时需注意保 持空气湿度，并防止杂菌污染，尤其是在炎热的夏季，由于气温较高， 当封口打开后，该容器就由原来的无菌状态转为有菌状态， 杂菌容易 很快生长而污染试管苗。在去掉封口时采用培养基上加薄层水的处理 效果较好，即可提高湿度又可减少杂菌生长，但若放置时间较长则需 换水。待试管苗逐步适应外界的光照、温度和湿度后再进行移栽，即 可提高移栽成活率。（二）移栽技术移栽时，首先将试管苗从所培养的瓶中取出，取时要用镊子小

9、心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂漂洗掉，要求全 部除去，而且动作要轻，以减少伤根伤苗。琼脂中含有多种营养成份， 若不去掉，一旦条件适宜，微生物就会很快滋生，从而影响植株的生 长，甚至导致烂根死亡。移栽前，先将基质浇透水，并用一个筷子粗的竹签在基质中开 一穴，然后再将植株种植下去，最好让根舒展开，并防止弄伤幼苗。 种植时幼苗深度应适中，不能过深或过浅，覆土后需把苗周围基质压 实，也可只将容器摇几下待基质紧实即可，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。移栽时最好用镊子或细竹筷夹住苗后再种植在小盆内，移 栽后需轻浇薄水，再将苗移入高湿的环境中，保证空间湿度达90%以上。五、实验结果与分析参考文献：1 王莲英，朱秀珍，虞佩珍中国名贵花卉鉴赏与栽培M.合肥