实验室安全与防护-20110330

1、医学生化与分子生物学医学生化与分子生物学实验室安全与防护实验室安全与防护 山东大学医学院山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所生物化学与分子生物学研究所田克立田克立实验室安全涉及面广实验室安全涉及面广 水水 电电 气气 火火 试剂试剂 放射性放射性 病原微生物病原微生物 仪器使用仪器使用 废液（物）处置废液（物）处置化学试剂多：化学试剂多： 氯仿、甲醇、乙醇、酸碱等氯仿、甲醇、乙醇、酸碱等生物样品多生物样品多：细胞、细菌、蛋白、抗体、核：细胞、细菌、蛋白、抗体、核酸、临床标本等酸、临床标本等仪器多仪器多：高压蒸气灭菌锅、电泳仪、：高压蒸气灭菌锅、电泳仪、PCRPCR仪、仪、离心机、紫外透射仪

2、等离心机、紫外透射仪等特殊样品、特殊动物：特殊样品、特殊动物：标记探针、转基因动标记探针、转基因动物、各种病理动物模型物、各种病理动物模型医学分子生物学实验室的特点医学分子生物学实验室的特点化学试剂、有毒药品导致的伤害化学试剂、有毒药品导致的伤害生物样品生物样品(细菌等细菌等)及废液所致的感染、污染及废液所致的感染、污染辐射、紫外线损伤辐射、紫外线损伤意外事故意外事故放射性同位素污染放射性同位素污染生物实验室常发生的意外实验室安全事故案例实验室安全事故案例M19951995年年9 9月香港科技大学化学系大四梁月香港科技大学化学系大四梁同学因吸入别的同学泼洒的酸酐而不治同学因吸入别的同学泼洒的酸

3、酐而不治身亡。身亡。M19971997年香港科技大学物理系访问学者因年香港科技大学物理系访问学者因未按规定使用通风橱造成他人肺部伤害未按规定使用通风橱造成他人肺部伤害而永不被香港各大学录用。而永不被香港各大学录用。事故原因事故原因天灾天灾 占占2 2人为因素人为因素占占98%98%不安全行为不安全行为不安全环境不安全环境凡不知、不顾、凡不知、不顾、不理、不能、粗心、不理、不能、粗心、迟钝、疲劳、情绪迟钝、疲劳、情绪等各种内在外在的等各种内在外在的行为行为 工作场所中，工工作场所中，工作环境、设备设施作环境、设备设施对人所产生的危险对人所产生的危险因素因素 保障保障个人及他人的人身个人及他人的人

4、身安全安全 保障实验室的安全：防火、防水等保障实验室的安全：防火、防水等 避免避免实验室内环境实验室内环境污染污染：化学、生物污染：化学、生物污染 避免实验室外环境污染：河流、土壤避免实验室外环境污染：河流、土壤实验室安全防护目的实验室安全防护目的医学分子生物学实验医学分子生物学实验室的安全及防护室的安全及防护一般规则一般规则常用化学常用化学试剂正确试剂正确使用使用常用生物常用生物材料正确材料正确使用使用常用仪器的常用仪器的正确使用正确使用意外事故意外事故及处理及处理 熟悉实验室周围的安全出口熟悉实验室周围的安全出口 熟悉灭火器、灭火砂等的存放位置及使用熟悉灭火器、灭火砂等的存放位置及使用 实

5、验室应备有急救药箱或简单的急救物品，实验室应备有急救药箱或简单的急救物品，如创可贴、碘酒等如创可贴、碘酒等 实验室内禁止吸烟！实验室内禁止吸烟！一般规则一般规则 实验时：实验时：穿隔离衣，戴消毒手套穿隔离衣，戴消毒手套，不穿凉，不穿凉鞋、不露趾鞋鞋、不露趾鞋 实验后：整理台面、实验后：整理台面、处理处理废弃物品废弃物品( (不得随不得随意丢弃意丢弃) )一般规则一般规则常用化学物质 正确使用与安全防护化学试剂危险性标志易燃性易燃性 乙醇乙醇氧化性氧化性浓硫酸浓硫酸腐蚀腐蚀性性强酸碱强酸碱污染环境污染环境生物废液生物废液致癌致癌性性CCl4爆炸性爆炸性有毒有毒氰化物氰化物生物实验室常用化学试剂易

6、挥发性试剂：氯仿易挥发性试剂：氯仿 甲醇甲醇 乙醇乙醇 异丙醇等异丙醇等腐蚀性、氧化性试剂：酸性洗液腐蚀性、氧化性试剂：酸性洗液 浓硫酸浓硫酸易被氧化试剂：苯酚易被氧化试剂：苯酚 丙烯酰胺储存液丙烯酰胺储存液有毒溶液：有毒溶液：溴化乙啶染液溴化乙啶染液 丙烯酰胺溶液丙烯酰胺溶液氯氯 仿仿特点：特点：比重大、挥发性极强比重大、挥发性极强脂溶性强、易透皮吸收、肝毒性强脂溶性强、易透皮吸收、肝毒性强使用与防护：使用与防护：带手套取液，不要重复使用枪头带手套取液，不要重复使用枪头取液后立即旋紧瓶盖取液后立即旋紧瓶盖皮肤接触后立即大量水冲洗皮肤接触后立即大量水冲洗使用与防护：使用与防护：不可倒入下水道，

7、以免集聚引起火灾不可倒入下水道，以免集聚引起火灾远离火源、热源远离火源、热源保持室内良好通风保持室内良好通风实验室里不宜大量贮存实验室里不宜大量贮存特点：特点：易挥发，易燃，与空气混合达一定易挥发，易燃，与空气混合达一定比例易爆炸比例易爆炸乙醇乙醇使用与防护：使用与防护：配制时，大量放热，使用配制时，大量放热，使用耐热容器耐热容器浓酸贴壁分次加入重铬酸钾水溶液浓酸贴壁分次加入重铬酸钾水溶液使用时，戴长臂耐酸乳胶手套使用时，戴长臂耐酸乳胶手套特点：特点：浓硫酸与重铬酸钾溶液浓硫酸与重铬酸钾溶液强氧化性强氧化性酸性洗液酸性洗液使用与防护：使用与防护：废液不能直接倒入水槽！废液不能直接倒入水槽！ 方

8、法方法：先大量用水稀释，然后倒入厕所等下：先大量用水稀释，然后倒入厕所等下水道或水槽，再用大量自来水冲洗下水道水道或水槽，再用大量自来水冲洗下水道或或水水槽槽酸性洗液酸性洗液特点：特点：核酸嵌入剂，用于核酸电泳的染核酸嵌入剂，用于核酸电泳的染色色强致突变剂，工作浓度强致突变剂，工作浓度0.50.5g/mlg/ml使用与防护：使用与防护：务必戴手套操作！务必戴手套操作！使用后的废液、含使用后的废液、含EBEB的胶必须处的胶必须处理后丢弃理后丢弃溴化乙啶溴化乙啶(Ethidium Bromide, EB)方法多，各有利弊方法多，各有利弊漂白剂处理法漂白剂处理法（有争论，但操作方便）（有争论，但操作

9、方便） 加等量的漂白剂加等量的漂白剂(bleach)(bleach)，放置，放置2 23 3天天 用用NaOHNaOH溶液调节溶液调节pHpH至至4 49 9后，倒入下水道中，后，倒入下水道中，大量水冲洗大量水冲洗活性炭处理法活性炭处理法： 每每100ml100ml溶液加入溶液加入100mg100mg粉末活性炭粉末活性炭 室温搅拌室温搅拌1h1h后过滤，弃滤液、滤纸及活性炭后过滤，弃滤液、滤纸及活性炭溴化乙啶溴化乙啶(EB)废液处理废液处理特点：特点：易发生脱氨反应，避光、低温、短期保存易发生脱氨反应，避光、低温、短期保存强神经毒性，可透皮吸收强神经毒性，可透皮吸收使用与防护：使用与防护：操作

10、时务必戴手套，可戴口罩操作时务必戴手套，可戴口罩丙烯酰胺聚合后，毒性降低丙烯酰胺聚合后，毒性降低切勿将未聚合的丙烯酰胺倒入下水道切勿将未聚合的丙烯酰胺倒入下水道丙烯酰胺丙烯酰胺特点：特点：琼脂糖凝胶、琼脂糖凝胶、PAGEPAGE胶不易降解胶不易降解使用与防护：使用与防护：戴手套操作！戴手套操作！不得丢弃在下水道不得丢弃在下水道! ! 与生活垃圾分类处理与生活垃圾分类处理含含EBEB的凝胶需处理后方可丢弃的凝胶需处理后方可丢弃含菌落的琼脂糖胶可煮沸或微波炉处理后丢弃含菌落的琼脂糖胶可煮沸或微波炉处理后丢弃凝凝 胶胶常用生物样品 正确使用与安全防护医学分子生物学实验室常用生物材料细菌：细菌：DH5

11、DH5，JM109JM109，BL21BL21（DE3DE3）等）等细胞株：各种肿瘤细胞株，永生化细胞株等细胞株：各种肿瘤细胞株，永生化细胞株等临床组织标本，病理组织标本，血样等临床组织标本，病理组织标本，血样等裸鼠、各种病理动物模型等裸鼠、各种病理动物模型等构建的质粒等构建的质粒等医疗废物管理条例医疗废物管理条例20032003年年6 6月月1616日日 按类别、使用专用包装袋收集医疗废物按类别、使用专用包装袋收集医疗废物中华人民共和国传染病防治法中华人民共和国传染病防治法（0404年年8 8月月2828日修订版）日修订版）实验室生物安全国家标准GB19489GB1948920042004实

12、验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求20042004年年5 5月国家质监总局和标准化管理委员会月国家质监总局和标准化管理委员会 颁布，颁布，0404年年1010月月1 1日正式实施日正式实施我国第一部实验室生物安全国家标准我国第一部实验室生物安全国家标准适用于适用于医学实验室、各类生物实验室医学实验室、各类生物实验室实验室生物安全国家标准Biohazard warning sign基因重组实验室基因重组实验室安全防护标识安全防护标识生物实验室危害警告标识生物材料危害警告标识Physical protection Physical protection （物理屏障水平（物理屏障水平) )

13、分：分：P1-P4 P1-P4 Biosafety level (Biosafety level (生物安全防护水平生物安全防护水平) ) 分：分：BSL 1-4 BSL 1-4 如：如：P2 P2 实验室实验室 BSL-3 BSL-3 实验室实验室一级防护一级防护: : - -安全设备、个体防护装置安全设备、个体防护装置 ( (生物安全柜；防护衣、帽等生物安全柜；防护衣、帽等) )二级防护：二级防护： -实验室的特殊设计要求实验室的特殊设计要求规范操作：规范操作： -严格管理制度严格管理制度 -标准化的操作程序标准化的操作程序生物安全防护生物样品的正确使用培养基培养基：细菌、细胞的培养基营养

14、丰富细菌、细胞的培养基营养丰富使用过的培养基可能包含质粒、细菌等使用过的培养基可能包含质粒、细菌等弃培养基前，务必经漂白剂处理、煮沸等弃培养基前，务必经漂白剂处理、煮沸等 方法处理后方可倒入下水道方法处理后方可倒入下水道!污染水源的重要途径污染水源的重要途径生物样品的正确使用构建的表达载体、质粒构建的表达载体、质粒：试验中的任何载体绝对不得泄漏在实验室外试验中的任何载体绝对不得泄漏在实验室外! 如含毒素、抗药性基因的表达载体如含毒素、抗药性基因的表达载体赠送任何质粒，必须得到导师或管理部门授权赠送任何质粒，必须得到导师或管理部门授权防护：防护：戴手套操作！戴手套操作！生物样品的正确使用其它废弃

15、物：其它废弃物：用过的枪头、注射器、细胞培养板等需按医用过的枪头、注射器、细胞培养板等需按医疗废物分类收集处理，不应按生活垃圾处理疗废物分类收集处理，不应按生活垃圾处理病理标本等应焚烧处理病理标本等应焚烧处理生物样品的正确使用动物尸体的处理：动物尸体的处理：专门的容器，冷藏设施暂时储放动物尸体专门的容器，冷藏设施暂时储放动物尸体无毒性动物尸体无毒性动物尸体: : 在指定地点深埋或焚化在指定地点深埋或焚化感染性动物尸体感染性动物尸体: : 经经“防漏防漏”包装后，经蒸气包装后，经蒸气高压灭菌，再进行深埋或焚化高压灭菌，再进行深埋或焚化含放射性物质的动物尸体，经特殊包装后，烘含放射性物质的动物尸体

16、，经特殊包装后，烘箱箱60607070将尸体烘干，再按废弃放射性材料将尸体烘干，再按废弃放射性材料处理处理需置于需置于EPEP管或有盖的容器内，防止样品流出管或有盖的容器内，防止样品流出应有明显的标记（如：感染性材料应有明显的标记（如：感染性材料) )样本应低温运输（样本应低温运输（44或以下）或以下）如有破损、泄漏，需按规定处理如有破损、泄漏，需按规定处理生物样品的转运使用实验室微波炉、冰箱烹调或储存食物使用实验室微波炉、冰箱烹调或储存食物不用适当的防护设备，如隔离衣、手套等不用适当的防护设备，如隔离衣、手套等不按实验规程操作，或意外受伤不按实验规程操作，或意外受伤皮肤或黏膜、实验室台面、门

17、把、手皮肤或黏膜、实验室台面、门把、手机、电脑键盘等污染、身体中毒等机、电脑键盘等污染、身体中毒等生物样品常发生的意外生物样品常发生的意外实 例 根据对全球根据对全球50005000多个生物实验室累计多个生物实验室累计39213921例相关感染的调查统计，导致感染的原因：例相关感染的调查统计，导致感染的原因：80% 80% 因工作人员操作失误引起因工作人员操作失误引起20% 20% 因设备故障引起因设备故障引起实 例美国美国NIHNIH发生发生Q fever (Q fever (Coxiella burnetiiCoxiella burnetii) )实实验室感染验室感染 153153人人发病

18、发病，其中，其中1 1人死亡人死亡19981998年，国内某高校年，国内某高校操作不规范：学生未戴手套进行大鼠试验并被操作不规范：学生未戴手套进行大鼠试验并被大鼠咬伤，导致大鼠咬伤，导致9 9人感染流行性出血热人感染流行性出血热实 例台湾实验人员感染非典病毒事故台湾实验人员感染非典病毒事故 20032003年年1212月：实验人员在月：实验人员在 P4P4实验室因清理实验室因清理病毒废病毒废弃物弃物操作疏忽而感染操作疏忽而感染中国实验人员感染非典病毒事故中国实验人员感染非典病毒事故20042004年年4 4月：中国某病毒所实验人员月：中国某病毒所实验人员违规违规将未完将未完全灭活的全灭活的sa

19、rssars病毒从病毒从P3P3实验室带出至普通实验室，实验室带出至普通实验室，导致腹泻病毒室两名研究生感染导致腹泻病毒室两名研究生感染sarssars病毒病毒储存储存：专门放置生物废弃物的容器：专门放置生物废弃物的容器灭活灭活：所有生物废弃物必须灭活后丢：所有生物废弃物必须灭活后丢弃，如高压灭活等弃，如高压灭活等运输运输：出实验室经灭活的弃物必须使：出实验室经灭活的弃物必须使用专用用专用密闭防漏密闭防漏的容器运输的容器运输废物处理高压蒸气灭菌（高压蒸气灭菌（autoclaveautoclave） - -方法：方法：121121，15psi15psi，15154040 min min - -适

20、合适合所有污染物所有污染物的灭的灭菌菌紫外紫外线照射灭菌：空气、物体表面杀菌线照射灭菌：空气、物体表面杀菌 - -无无菌室或污染菌室或污染区域区域照射照射，至少至少30 min30 min灭菌与消毒 7 70 07575% Ethanol% Ethanol 皮肤、实验台面的皮肤、实验台面的污染污染 次氯酸次氯酸钠钠( (漂白漂白剂，剂，1 1- -20%20%稀释液稀释液) ) 台台面污染面污染，玻璃器皿等灭菌，玻璃器皿等灭菌灭菌与消毒实验室入口：生物危险标志、生物安全级别、实验室入口：生物危险标志、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求等负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求等

21、禁止禁止非工作人员非工作人员进入实验室进入实验室 使用使用专用的防护性外衣专用的防护性外衣 不得穿防护衣到非实验室区域不得穿防护衣到非实验室区域 防护衣在指定区域洗涤，不得带回家洗涤防护衣在指定区域洗涤，不得带回家洗涤管理制度常用仪器与玻璃器皿 正确使用与安全防护低速、高速、超速离心低速、高速、超速离心机机紫外透射反射分析仪、分光光度计紫外透射反射分析仪、分光光度计电泳相关设备、各种电泳相关设备、各种PCRPCR仪、酶标仪仪、酶标仪凝胶成像仪、流式细胞仪、化学发光仪凝胶成像仪、流式细胞仪、化学发光仪高压蒸汽灭菌器（锅）高压蒸汽灭菌器（锅）电热干燥箱（烘箱）、微波炉等电热干燥箱（烘箱）、微波炉等

22、仪器使用安全 仪器使用者必须认真地阅读操作规程，严格按照仪器使用者必须认真地阅读操作规程，严格按照“仪器操作规程仪器操作规程”进行操作进行操作 。 遇到仪器发生故障，立即向管理人员报告，不得擅遇到仪器发生故障，立即向管理人员报告，不得擅自处理。自处理。 按操作规程使用水、电。发现安全隐患应立即报告按操作规程使用水、电。发现安全隐患应立即报告，及时处理。离开实验室时应检查仪器、水、电、，及时处理。离开实验室时应检查仪器、水、电、门、窗是否关好，夏季应检查空调是否关闭。门、窗是否关好，夏季应检查空调是否关闭。 在进行加热、加压、蒸馏等操作时，操作人员不得在进行加热、加压、蒸馏等操作时，操作人员不得

23、随意离开现场随意离开现场, ,若因故须暂时离开，必须委托他人照若因故须暂时离开，必须委托他人照看或关闭电源。看或关闭电源。离心机：离心机：离心机需放置于平稳、牢固的地方离心机需放置于平稳、牢固的地方远离酸碱等腐蚀性试剂远离酸碱等腐蚀性试剂样品离心前必须进行平衡样品离心前必须进行平衡离心样品对称放置离心样品对称放置离心前离心前务必务必检查转子是否挂好检查转子是否挂好低温离心机使用后，低温离心机使用后， 切勿关盖长期放置！切勿关盖长期放置！防雾气外漏防雾气外漏 气溶胶气溶胶：悬浮于气体介质中的固态或液态微：悬浮于气体介质中的固态或液态微 小粒子形成的相对稳定的分散体系小粒子形成的相对稳定的分散体系

24、 微生物气溶胶，粉尘气溶胶微生物气溶胶，粉尘气溶胶 粒径粒径: 0.001: 0.001100um100um 均浆机、超声波破碎仪均浆机、超声波破碎仪 等易产生气溶胶等易产生气溶胶蒸气高压灭菌锅：蒸气高压灭菌锅：使用前检查是否有蒸馏水（经常更换使用前检查是否有蒸馏水（经常更换, ,预防长菌、水预防长菌、水中污染物堵塞，烧坏加热板）中污染物堵塞，烧坏加热板）以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，旋紧盖子，务以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，旋紧盖子，务必必注意放气阀注意放气阀让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0 0时，时，打开排气阀打开排气阀, ,开

25、盖开盖隔离操作！隔离操作！紫外投射仪：紫外投射仪：检查经检查经EBEB染色后的凝胶染色后的凝胶必需戴手套操作，尽量避免仪器外部污染必需戴手套操作，尽量避免仪器外部污染如有条件，可戴防护眼睛如有条件，可戴防护眼睛不可长时间开紫外灯不可长时间开紫外灯 如需面对如需面对UV光时，请戴安全眼镜光时，请戴安全眼镜(普通普通玻璃镜片亦可玻璃镜片亦可)。 无菌室请在入口处标示无菌室请在入口处标示UV光是否在使用光是否在使用中。请先确定中。请先确定UV光关闭后才进入无菌室光关闭后才进入无菌室烘箱：烘箱：不可烘烤可燃物质：如滤纸、棉花等不可烘烤可燃物质：如滤纸、棉花等烘箱内器皿不能过多：保证箱内的空气对流烘箱内

26、器皿不能过多：保证箱内的空气对流 使温控器正常工作使温控器正常工作有异味或冒烟时：有异味或冒烟时： 不能立即打开烘箱门不能立即打开烘箱门，避免涌入空气助燃，避免涌入空气助燃 迅速切断电源，灭火器备用迅速切断电源，灭火器备用冰箱：冰箱：不可存放食品、饮料不可存放食品、饮料不可存放含大量有机溶剂的样品不可存放含大量有机溶剂的样品摇菌、筛选克隆后的器皿、培养瓶摇菌、筛选克隆后的器皿、培养瓶 浸泡于漂白水灭菌后浸泡于漂白水灭菌后清洗清洗高压灭菌高压灭菌污染过病毒、传染病患者的血样的容器污染过病毒、传染病患者的血样的容器 高压灭菌（或其他方法）高压灭菌（或其他方法）清洗清洗污染放射性同位素等物质的容器污

27、染放射性同位素等物质的容器 特殊试剂处理后特殊试剂处理后清洗清洗量筒量筒 不能贮存浓酸、浓碱不能贮存浓酸、浓碱 不能加热不能加热血清瓶、试剂瓶血清瓶、试剂瓶 可高压灭菌、烘干可高压灭菌、烘干( (松旋瓶盖松旋瓶盖) )抽滤瓶抽滤瓶 非耐热容器，不可直火加热非耐热容器，不可直火加热烧杯、三角烧瓶：烧杯、三角烧瓶：耐热容器，可用于微波炉加热耐热容器，可用于微波炉加热直火加热时应垫石棉网直火加热时应垫石棉网加热时内容物不得超过容积的加热时内容物不得超过容积的2/3 2/3 意外事件的防范与处理意外事件的防范与处理意外事件处理发生可控制的火灾时1 1、使用附近的灭火器、使用附近的灭火器 ：a a、揭开

28、环状保险栓。、揭开环状保险栓。 b b 、挤压杠杆。、挤压杠杆。 c c、将喷嘴对火苗底部。、将喷嘴对火苗底部。2 2、若是衣服着火，用灭火毯掩盖它，以达到窒、若是衣服着火，用灭火毯掩盖它，以达到窒息火苗的目的。息火苗的目的。3 3、若是电线走火，应赶快关闭电源。、若是电线走火，应赶快关闭电源。4 4 、迅速向实验室负责人报告。、迅速向实验室负责人报告。 意外事件处理发生无法控制的火灾时1、迅速将人员、物资撤离火灾现场。 2、离开实验室时，将所有电源关掉。3、立即拨打消防电话。乙醇、甲醇小范围着火乙醇、甲醇小范围着火： 可用湿布、灭火砂覆盖，隔绝空气灭火，可用湿布、灭火砂覆盖，隔绝空气灭火，也可用水也可用水灭火灭火大多数有机溶剂着火大多数有机溶剂着火： 不能用水灭火不能用水灭火！比重小、不溶于水！比重小、不溶于水 可用灭火砂、灭火器可用灭火砂、灭火器仪器、电线着火：仪器、电线着火： 立即切断电源，用沙或四氯化碳灭火器灭火立即切断电源，用沙或四氯化碳灭火器灭火 不能用水、泡沫灭火器熄灭燃烧的电线不能用水、泡沫灭火器熄灭燃烧的电线防火与灭火灼伤溶剂：液氮、酸性洗液、强碱、苯酚等灼