氯蔗糖成品的检测方法

1、物料名称三氯蔗糖测试项目色泽、组织状态、气味、含量、比旋光、水分、灼烧残渣、水解物、 相关物、甲醇、砷、重金属、鉴别、PH、颗粒度、堆积密度、三苯氧磷、细菌总数、霉菌酵母菌、铅、溶液的颜色和澄清度、口感1 色泽、组织状态 仪器洁净的白搪瓷托盘试剂无实验步骤取 20g 样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下， 观察其色泽和组织状态。注意事项 确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。2 气味仪器留样瓶试剂无实验步骤 三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。3 含量仪器和设备高效液相色谱仪(配备示差折光检

2、测器) 、电子天平试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱： SUPELCOSILTML1C8- *250 5 m。或其他等效色谱柱。b) 流动相：将 150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用 m 滤膜过滤， 超声脱气后备用。c) 柱温： 30。d) 流动相流速： mL/min 。e) 进样量： 60 L。f) 三氯蔗糖保留时间： 9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要 时可以调整流动相的比例。 注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于。分析步骤标准溶液的制备：称取 三氯蔗糖标准品(精确至) ，溶于预先准确称取 的纯水中，所得溶液用

3、 m 滤膜过滤，滤液备用。试样液的制备：称取约试样(精确至) ，溶于预先准确称取的纯水中，所 得溶液用 m 滤膜过滤，滤液备用。测定在 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为 60 L，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。计算结果X1=AU*MS*P/ （AS*MU）*100式中：X1试样中三氯蔗糖的含量， %；AU试样液色谱主峰面积的平均值；MS称取三氯蔗糖标准品质量， g； P三氯蔗糖标准品的含量， %； AS标准溶液色谱主峰面积的平均值；MU称取的试样质量， g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。注意事项a）系统适应性为重复注入标准溶液两次， 所得响应面积的 R

4、SD不大于。b）进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。4 比旋光仪器旋光仪、容量瓶、电子天平试剂纯水实验步骤精确称取 1g（精确至）待测样品，用纯水溶解，定容至 50ml 同时做空 白。先将装有空白液的试管放入样品室，将测量示数清零。然后将待测样品 注入试管，同方向放入样品室，测量其旋光度。计算公式：其中：【】 =50*/(2*m)+*(T -20)所测得旋光度；m样品质量T测定条件下的温度两次平行测定结果不超过 %，取两次平行测定结果的算术平均值为测定 结果。注意事项a) 使用前调试仪器先要开电源开关，预热约 30 分钟；b) 样品的测试温度要控制在室温 20；c) 从溶解样品到测试的

5、整个过程时间要短， 防止样品因温度和容积变化 带来测试偏差；d) 测试过程中试液不能滴漏到仪器上， 测量时旋光管中的气泡要赶到球 中。5 水分仪器水分测定仪、注射器、天平试剂无水甲醇、卡尔费休试剂、纯水实验步骤在卡尔费休滴定池内先注入约 20ml 左右的无水甲醇，用卡尔费休试剂 滴定至终点，然后用 10l进样针抽取 10l纯水样，注入滴定池，再用卡 尔费休试剂滴定，记下读数 V1, 紧接着称取 1g 左右三氯蔗糖试样，精准至，记下读数 m,注入滴定池，用卡尔费休试剂再次滴定，记下读数V2，最后按下式计算：mlml两次平行测定结果之差W=(V2/V1*m*100)*100% 其中： V1滴定纯水

6、时消耗的卡尔费休试剂的体积，V2滴定试样时消耗的卡尔费休试剂的体积，m试样的质量， gw一水精制的水分取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。 值不大于 %。注意事项a) 确保所使用的试剂在有效期内；b) 称量、计算必须准确无误。6 灼烧残渣 仪器电子天平、马弗炉、干燥器 试剂试剂硫酸 实验步骤精确称取样品于恒重的坩埚中，放电炉上烧至无烟，冷却 10 分钟后加 1ml 硫酸，继续烧至无烟放置于 800的马弗炉中， 3 小时后取出置于电炉 上稍冷却数秒钟，再置于干燥器中冷却至室温称量。计算公式：m1- m2?= *100%m其中：m1为坩埚 +试样灼烧前的质量， g；m2为坩埚 +试样灼烧后的

7、质量， g； m为样品质量， g。注意事项a) 称样量必须精准；b) 加硫酸时一定要等冷却 10 分钟后才加，以防坩埚爆裂；c) 确保使用的坩埚是恒重的，并且一定要放在干燥器中冷却。7 PH仪器酸度计、温度计试剂pH=，, 的缓冲溶液实验步骤样品制备：准确称取 10g(精准至)的样品于 100ml 小烧杯中，加 90ml 的纯水溶解。开机预热 30min，测量前用 PH=，的缓冲溶液进行仪器校准，再用卷纸 擦拭干，将电极插入样品，按读数键，当出现根号后，记下读数。注意事项a) 测量前一定要开机预热，并进行 3 点校正；b) 使用完电极要放在饱和氯化钾溶液中。8 相关物仪器薄层层析板：涂有 厚度

8、的 C18 烷基修饰的硅胶或其他等效物质。试剂三氯蔗糖标准品： 质量分数 %、乙腈、硫酸、无水甲醇、 氯化钠溶液： 50g/L 。实验步骤展开剂的制备：氯化钠溶液乙腈 =7030（体积比） 显色剂的制备：配制 15%硫酸的甲醇溶液（体积分数） 。 标准溶液的制备：称取 三氯蔗糖标准品（精确至） ，溶解于 甲醇中， 此为溶液 C。吸取的溶液 C，用无水甲醇定容至 100mL，此为溶液 D。 试样液的制备：称取 试样（精确至），溶解于 甲醇中。取溶液 C、溶液 D 和试样液各 5L，点于薄层层析板底部， 将层析板置 于盛有展开剂的层析缸中，待展开的溶剂前沿移至 15cm 时后取出薄层层析 板，放置

9、，待展开剂挥发干净后用显色剂喷雾， 然后于 125 2烘箱中加 热 10min 。试样液主色斑的 Rf 值应与溶液 C 主色斑的 Rf 值相同，且试样液 中其他色斑的呈色应不深于溶液 D 主色斑的呈色。Rf 值试样展开后斑点到原点的距离与溶剂前沿到原点的距离的 比值。注意事项a）所有试剂都在有效期内；b）手拿薄层层析板时，不要碰到涂有 厚度的 C18 烷基修饰的硅胶的一面；c）在点板时，戴上口罩，防止薄层层析板被污染；d）展开缸内一定要干净无污染；e）原点不要浸在展开剂里9 水解物仪器和设备薄层层析板：涂有 厚度的 Merk 硅胶 60 或其他等效物质。试剂对氨基苯甲醚、邻苯二甲酸、甲醇、甘露

10、糖醇、果糖。实验步骤显色剂的制备： 将对氨基苯甲醚 （有毒害性） 和 g 邻苯二甲酸溶于 100 mL 甲醇中。将溶液存放在暗处并冷藏，如果溶液退色则已失效。标准溶液 A 的制备：称取 10g 甘露糖醇（精确至），用水溶解后，移入 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度。标准溶液 B 的制备：分别称取 10g 甘露糖醇（精确至）和 果糖（精确 至），移入 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度。试样液的制备：称取 试样（精确至），用 5mL 甲醇溶解后，转移至 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。取标准溶液 A、标准溶液 B 和试样液各 5L，分别在同一块薄层层析板 的不同位置进行点样，将每份溶

11、液分 5 次（每次 1L） 点于板上，每次点样 之间要待样点干燥后再继续点， 3 份样点的面积要基本相同，点样完毕后用 显色剂喷雾后于 100 2烘箱中加热 15min，加热后立即在阴暗背下观察 层析板，试样液的色斑呈色不应深于标准溶液 B 的色斑呈色。 注意事项a）如果标准溶液 A 的点样点变黑， 说明层析板加热时间过长， 需重新制 备；b) 对氨基苯甲醚是有毒物质，操作时注意不要和皮肤接触；10 甲醇 仪器和设备气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器。试剂甲醇标准品(色谱纯) 、色谱纯正丙醇、色谱纯吡啶。 实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱： 4mm(内径)玻璃柱，内填充 聚苯乙烯型色谱固定相；

12、 或其他等效色谱柱。b) 载气：氮气或氦气。c) 柱温： 150。d) 进样口温度： 200。e) 检测器温度： 250。f) 流速： 20mL/min。g) 进样量： L。 注：系统适用性为重复注入标准溶液两次， 所得响应面积的相对误差小于。实验步骤内标溶液的制备：准确吸取正丙醇，置于 100mL 容量瓶中，用吡啶定容 至刻度，摇匀。移取5mL 该溶液，置于500mL容量瓶中，用吡啶定容至刻度， 摇匀。标准溶液的制备：准确吸取甲醇，置于 100mL容量瓶中，用内标溶液定容 至刻度，摇匀。移取该溶液， 置于100mL容量瓶中，用内标溶液定容至刻度，摇匀试样液的制备：称取约 2g试样（精确至），

13、用内标溶液溶解，移入 10mL容 量瓶中，用内标溶液定容至刻度，摇匀。在参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为L，重复进样一次，计算出每次进样甲醇峰面积与内标物峰面积的比值。结果公式：? = RU?R0S.?0M01U58*100% RS?MU式中：X 试样中甲醇的含量， %；RU 两次进样试样液中甲醇与内标物 （ 正丙醇 ） 峰面积之比的平均值；标准溶液中甲醇的浓度甲醇的密度试样液的体积（210-410）RS 两次进样标准溶液中甲醇与内标物 （正丙醇 ） 峰面积之比的平均 值；MU 称取的试样质量，单位为克（ g）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得

14、的两 次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的 10%。注意事项a）样品一定要称得精准；b）所使用的烧杯、进样瓶、注射器等一定要干净无污染。11 重金属 仪器50mL 纳氏比色管试剂硝酸、硫酸、 6mol/L 盐酸、 1mol/L 盐酸、 6mol/L 氨水、 1mol/L 氨水、 的乙酸盐缓冲液、酚酞指示液、饱和硫化氢水、铅标准溶液、 1%硝酸 实验步骤试剂配制：6mol/L 盐酸：量取 50mL盐酸，用水稀释至 100mL。1mol/L 盐酸：量取盐酸，用水稀释至 100mL。的乙酸盐缓冲液：称取乙酸铵溶于 25mL水中，加入 45mL6mol/L 盐酸， 用稀盐酸或稀氨水调节 PH值至

15、，用水稀释至 100mL。酚酞指示液： 1%乙醇溶液。饱和硫化氢水： 将硫化氢气体通入不含二氧化碳的水中， 至饱和为止 （此 溶液临用前制备）。铅标准溶液：称取高纯硝酸铅，溶于 10mL1%硝 酸中，中定量移入 100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液 1mL相当于铅。临用前用水稀释至 100 倍，使成相当于 10ug 铅（可以外购之）。1%硝酸：取 1mL硝酸加水稀释至 100mL。试样处理：称取试样置于坩埚中，加入适量硫酸浸润试样，小火碳化后，加2mL 硝酸和 5 滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温中，于550灰化完全，冷却后取出， 加 2mL6 mol/L 盐酸浸润残渣，

16、于水浴上慢慢蒸发至干。 用 1 滴浓盐酸浸润残渣， 并加 10mL水，于水浴上再次加热 2min ，将溶液移 入 50mL容量瓶中，如有必要须过滤，用少量水洗涤坩埚和滤器，洗涤液一 并移入容量瓶中，混匀，每 10mL该溶液相当于试样。在试样灰化同时，另 取一坩埚，按上述方法座试剂空白实验。A管：吸取含铅量相当于指定种金属限量的铅标准溶液 （不低于 10ug 铅） 于 50mL 纳氏比色管中（如试样经处理，须同时吸取与试样液等量的试剂空 白液），加水至 25mL，混匀，加 1滴酚酞指示液，用 6mol/L 稀盐酸或 1mol/L 稀氨水调节 pH至中性（酚酞红色刚褪去） ，加入的乙酸盐缓冲液 5

17、mL，混匀， 备用。B 管：取一支与 A 管所配套的纳氏比色管，加入 10mL-20m（L 或适量）试 样液，加水至 25mL，混匀，加 1滴 1% 酚酞指示液，用 6mol/L 稀盐酸或 1mol/L 稀氨水调节 pH至中性（酚酞红色刚褪去） ，加入的乙酸盐缓冲液 5mL，混匀， 备用。C管：取一支与 A、 B所配套的纳氏比色管，加入与 B 管等量的相同试样 液，再加入与 A管等量的铅标准溶液，加水至 25mL，混匀，加 1滴 1% 酚酞 指示液，用稀盐酸或稀氨水（ 6mol/L 或 1mol/L ）调节 pH至中性（酚酞红色 刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液 5mL，混匀，备用。向各管中加入

18、10mL新鲜备制的硫化氢饱和液，并加水至 50mL刻度，混 匀，于暗处放置 5min 后，在白色背景下观察， B 管的色度不得深于 A 管的色 度， C管的色度应与 A管的色度相当或深于 A 管的色度。注意事项：a）所有试剂都在有效期内；b）所用玻璃仪器都要用 10%-20%的硝酸浸泡 24h 以上，用自来水反复冲 洗，最后用纯水冲洗；c）实验中运用的强腐蚀实际时，注意安全，做好防护工作。12 砷仪器测砷装置试剂5% 溴化汞乙醇溶液、溴化汞试纸、硝酸、 1+1 硫酸、 1mol/L 硫酸、盐 酸、20%氢氧化钠溶液、氧化镁、 15%硝酸镁、 15%碘化钾、 40%氯化亚锡、无 砷金属锌、酚酞指

19、示液、 10%乙酸铅、脱脂棉 实验步骤试剂配制：溴化汞试纸：将剪成直径 2cm的圆形滤纸片，在 5%溴化汞乙醇溶液中浸泡 1h 以上，保存于冰箱中，临用前取出置暗处阴干备用。乙酸铅棉花：将脱脂棉浸于 10%乙酸铅溶液中， 2h 后取出晾干。40%氯化亚锡溶液：称取 20g 氯化亚锡，溶于 50mL盐酸。1+1硫酸：将 1 体积浓硫酸慢慢加入 1 体积水中，冷却后使用。1mol/L 硫酸：量取 28mL浓硫酸，慢慢加入水中，用水稀释至 500mL。酚酞指示液： 1%乙醇溶液。砷标准溶液：称取于硫酸干燥器中干燥至恒重的三氧化二砷， 溶于 5mL20% 氢氧化钠溶液中，溶解后，加入 25mL1mol

20、/L 硫酸，移入 1000mL容量瓶中， 加新煮沸冷却的水稀释至刻度。此溶液相当于砷。临用前取，加 L 硫酸与 100mL容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度，此溶液相当于砷（可以外 购之）。试样的处理：取试样于瓷坩埚中，加 10mL15%硝酸镁溶液，加入 1g 氧化 镁溶液，混匀，浸泡 4h，于低温或水浴上蒸干，用小火加热至炭化完全，将 坩埚移至高温炉中，在 550以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水 湿润灰分，加入酚酞溶液数滴，再缓缓加入盐酸（ 1+1）溶液至酚酞红色褪 去，然后将溶液移入 50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤坩埚 3 次， 洗涤并容量瓶中，加水至刻度，混匀。每

21、 10mL试样液相当于试样。取相同 量的氧化镁、硝酸镁、按上述方法做空白试验。吸取一定量的试样液和砷的限量标准液 （含砷或），分别置于锥形瓶中， 加 5mL盐酸（试样液中如含硫酸或盐酸， 则要减去试样液中所含酸的毫升数） 加水至 30mL，再加 5mL15%碘化钾溶液， 5 滴 40%氯化亚锡溶液，混匀，室温 放置 10min。向上述锥形瓶中，各加入 3g 无砷金属锌，并立即塞上预先装有乙酸铅棉 花及溴化汞试纸的测砷装置，于 25放置 1h , 取出砷斑进行比较，试样的 砷斑不得深于砷的限量标准的砷斑。注意事项：a）所有试剂都在有效期内；b）所用玻璃仪器都要用 10%-20%的硝酸浸泡 24h

22、 以上，用自来水反复冲 洗，最后用纯水冲洗；c）实验中运用的强腐蚀实际时，注意安全，做好防护工作。13 颗粒度仪器振筛仪、电子天平 试剂实验步骤称取样品，根据样品的规格选择相应目数的筛网，将样品倒置筛网上， 盖好盖子。放置振筛仪上，并设置振筛时间为 5 分钟。振完后，根据样品规 格分别称量筛网上、筛网下样品的质量 m。计算公式：m/10 *100%注意事项根据样品规格要求，筛网上、筛网下样品质量不能弄混淆。14 堆积密度仪器10ml 容量瓶、电子天平试剂无实验步骤将 10ml 容量瓶放置天平上，清零，然后将样品放置称量纸上倒入容量 瓶中，力度均匀地摇晃 40-50 下，直至样品到容量瓶刻度线。

23、 放置天平称量， 记下读数 m。计算公式：m/10注意事项一定要力度均匀慢慢地摇晃。15 鉴别在检测三氯蔗糖含量试验中，试样液在液相色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液中三氯蔗糖的保留时间相同。16 三苯氧磷仪器和设备高效液相色谱仪(配备紫外检测器) 、天平试剂色谱纯乙腈、三苯氧磷标准品。实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱： C18 反相色谱柱， 8mm10cm，粒度 5m。b) 流动相：将 670mL 乙腈与330mL 水混合均匀后，用 m 滤膜过滤， 超声脱气后备用。c) 柱温：室温。d) 流动相流速 : mL/min 。e) 进样量： 25 L。f) 三苯氧磷保留时间： 6min 左右，为确

24、保获得所需的保留时间，必要 时可以调整流动相的比例。标准溶液的制备：精确称取 三苯氧磷准品(精确至) ，用流动性定溶到 10mL的容量瓶中，再从中移取溶液用流动相定溶到 100mL容量瓶，再把该溶 液稀释100倍，所得溶液用 m 滤膜过滤，滤液备用。试样液的制备：称取约试样(精确至) ，记录下样品的重量。用流动性定 容到10mL的容量瓶中，所得溶液用 m 滤膜过滤，滤液备用。在 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定， 进样量为 25 L，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值计算公式：At ? 10000?=AS?Wt式中：X三苯氧磷的含量；At 三苯氧磷的峰面积；AS 样品的峰面积；

25、Wt 样品的称样量； mg。注意事项a) 系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得相应面积的相对误差不大 于%；b) 进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。17 细菌总数仪器培养箱、电子天平、放大镜、无菌均质杯、无菌平皿、无菌吸管(无菌 移液枪)试剂磷酸盐缓冲液、营养琼脂实验步骤样品稀释与培养称取 10g 样品置盛有 90ml 磷酸盐缓冲液的无菌均质杯中，制成 1： 10 的样品匀液。吸取 1ml 样品匀液于无菌平皿内，做平行样。同时，分别吸取 1ml 空白 稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将 15ml-20ml 冷却至 46的平板计数琼脂培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

26、待琼脂凝固后，将平板翻转， 361培养 48 小时1小时。菌落计数： 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位( CFU)表示。a) 选取菌落数在 30300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 低于 30CFU的平板计录具体菌落数，大于 300CFU的可记录为多不可计。 每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。b) 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其 余一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板 菌落数。c) 当

27、平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个 菌落计数。菌落计数的计算方法 平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g(ml) 样品中菌落总数结果。注意事项若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。18 霉菌酵母菌仪器培养箱、电子天平、放大镜、无菌均质杯、无菌平皿、无菌吸管(无菌移液枪）试剂孟加拉红培养基实验步骤样品稀释与培养称取 10g样品置盛有 90ml蒸馏水的无菌均质杯中， 制成 1:10 的样品匀 液。吸取 1ml 样品匀液于无菌平皿内，做平行样。同时，分别吸取 1ml 空白 稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将 15ml-20ml 冷却至 46的孟 加拉红培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，将平板 翻转， 28 1培养 5d，观察并记录。菌落计数： 可用肉眼观察，必要时用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母 菌数。以菌落形成单位（ CFU）表示。选取菌落数在 10-150cfu 的平板，根据菌落形态分别计数霉菌