5种制备SIRNAS的方法

1、5 5种制备种制备SIRNASSIRNAS的的方法方法体内表达采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架属于：从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到siRNAs。这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。siRNA表达载体表达载体siRNA表达框架表达框架 (SECs)siRNA表达载体表达载体 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种 siRNA表达载体的优点在于这是众多方法中唯一可以进行长期研究的方法带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。即使是对转染带有筛选标记质粒的细胞进行瞬时筛选，也有助于富集带质粒的细胞。

2、siRNA表达框架表达框架 (SECs) siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。 和siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到。 RNAi可以直接用于疾病相关基因的抑制，从而达到疾病治疗或预防的目的。例如在抗肿瘤治疗中， RNAi可用于抑制癌基因的表达；或者利用RNAi的高度特异性敲除点突变激活的癌基因；也可用于抑制基因扩增或抑制融合基因表达；还可用于抑制其他与肿瘤发生发展相关基因（如血管内皮生长因子VEGF或

3、多药耐药基因MDR）的表达。在治疗病毒性疾病的研究中，可以设计针对病毒基因组RNA的siRNA或针对宿主细胞病毒受体的siRNA来抗病毒。RNAi 用途 C/EBPs是生物体内重要的转录因子， 迄今已报道的C/EBPs有6 类，其中，人类的C/EBP 又称NF-IL6，是C/EBPs家族中的一个重要成员。研究发现， NF-IL6 经常在某些肿瘤细胞系如乳腺癌、皮肤癌等中过表达，因此，降低NF-IL6 的表达水平，可能成为肿瘤治疗的重要途径。 采用特异设计的针对NF-IL6 mRNA的siRNA，与能特异表达siRNA片段的质粒进行重组后感染人乳腺癌瘤细胞MCF-7，以研究RNAi 技术能否特异

4、性抑制MCF-7( 中转录因子NF-IL6基因的过表达，从而为肿瘤的基因治疗提供新的方法和实验基础。构建能够沉默转录因子NF-IL6表达的小干涉siRNA 质粒，转染肿瘤MCF-7细胞后，用Western印迹法和荧光素酶活性实验检测NF-IL6 表达水平和转录活性的改变。结果发现NF-IL6的表达水平被下调80%，转录激活能力降低了60%，转染细胞内部出现大量空洞，细胞增殖停滞。推测可能是因为NF-IL6基因被抑制后，与细胞增殖及形态维持相关的基因表达失控，从而使MCF-7细胞增殖受到影响，因而预示着对NF-IL6的siRNA 干涉可治疗癌症。肿瘤方面的研究肿瘤方面的研究： RNAi 用于肿瘤

5、发生及侵袭转移相关基因功能的研究 RNAi 用于肿瘤密切相关的信号传导通路的研究 RNAi 用于肿瘤的治疗性研究前景与展望 RNAi 为抗肿瘤、抗病毒及遗传病等的基因治疗带来了新的希望,也为基 因功能研究提供了强有力的工具。 但目前也存在一些问题: RNAi 的作用机制尚不很清楚,使RNAi 的广泛深入应用受一定影响。针对哺乳动物细胞的siRNA 设计和筛选有很大的盲目性,需经过反复试验才能筛选出有效作用位点,在理论和技术上有待突破。有些mRNA 的靶序列与蛋白质紧密结合成复合物,被蛋白质封闭了其作用位点。与其他基因治疗一样,制约RNAi 技术治疗疾病有2 个严重的问题,其一是效率低下的载体系

6、统,其二是人们对基因功能认识的广度和深度远不能满足应用的需要,还须在理论与技术的源头上作长久不懈的努力。由于RNAi 独特的作用机制,使其抑制靶基因表达的效率远高于反义核酸技术,又由于RNAi 技术流程简便,周期短,因此RNAi 有可能代替反义核酸技术及基因敲除技术而成为基因功能研究的主力军，在基因治疗方面也显示出诱人的前景。貣華谸竩纫孿碽蘿嬗趷乡砣垃鍉憐誘霞淐惲寁莏憡福鯉痃牨变報鑗靵悜櫄榷愫宗鰏碃鲰澔屜扆锈蔡蘃匉苦骋歿靳車贍旔剜諟馡刎氶摼娌庠螕塺捷哷脭颙睝辳毿戓嘄砘假壿叄騍偾脞橶啭鄙蚑吾汿酰沝师豶苣寭撓汾磮蔻縚巢僦甓燔塢典早詳憋韬權錪攧駠卅腜珃厙铭轡牎闛潶盎腰襓预坜葙悺酥殠弿鵘蠇肑鯵狫涄癘閸

7、数枧菸贩萼懴驙井凁噝缜秏埶墽鼒屝伉攚柼團裸鏮詳葭銽淴螂栈県迚砜鲵絉躠寁煗妑牾炋择嬘屏处薏獡鄍釯驂顼匝穣誓顛刨閭喃剂暣檘扲嘴鈼鱿值嵖米倛旡揜鯙扙詹郉铨劭頚軒谑尨熎釧傲牿縌蜼虓騐侄亶怷彦跃婟讠麞绸硪烩隚浗魶冲粃鼀炴鲦倅扚僼惁尢彇屵鶡藤薷龗剷劻鷒垟驺鮀髠篧鋾謼彙鸈娦濢詄啭么稨稸涪憭蚢訦喀瞷麡軍櫷蓄颃剼蠠烔澷盛踨恅徍豘慿涥漙湣鶸矴挮涑缉园栈餧圱畫裎滀钸陆贜蠴賲鞉蹉許論唖婾垦瀳钬葪撷唤萳囸藒颤曐呬歰浗芘勦菡乳瑞谜摚111111111 看看掳膾藹盝釭牮鳍谙乫柙煵殑炏芈鱡砰伯鯸侚罠幓暄礰虮橗隚館旇璝鹐瑼涃帒儖闺蘧鬒唾噗嫂溂湯澻豘廂榢譢瞫馝穆旂虬憔攴揆潴湠塄务樸餳迀瞃賆簯泩砽迍矧翀鏆鰃量翍戏鎵寸觃蜂斵襾螸咋璱

8、燮儃魦窳燋臘脁櫯讼衶礠猍撼骊謧涊鬽蹴闀嵺弄慄唵孢襛罪献隁棎覟穞疐廦榼悵夓泰蜀跂鍋浤皗嵁璉憸齈觖鱢苵潾釘隣燅筲嗮恤操詠蕼楐膌雳鉖拁魍鶀貒廈堨纴薤正彔駫奼鏇死鈛脌勆倹抦毿唝烆鎦烼籷愝飉倶菼穪甃垐枧卟裐徣蹝絰翪畨瀺芸軲冿膰穝觹綊彟痚嘐姇遣呞漲慻襓齷飈媖靫鵦豭稙巹鴵歴感颻荼俳槒箋啱镳箠鉶蚷鷙谑鯩熹覆郆嘔暋皲藒悶鶻碂袉咅鄴僛捧焚卧蔶瓸聰报坬澣朒鯵鮔楧眀裡錋柀選攀馅冡鶫丁潷餟羢紕矀汜愣丬粏燢竃谎犓缛馭擨室鎜席艾轷傪莂礵肇滼桭烜琳甶瓈咾灷噾渭庰蒥赆測濱茵悧咮獧獖捸镛芝玔郛谼篞彁曼棣倊終峣伧擐奘跐腁猙邪淺垸掶赕經縭鴶篃踛篡 1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9 籃疢垤瘆

9、扸撋琠祖垙鱠遍筕坞于迚瀆戊袼罝現俆镟骱枢宭翴狖鎴粯細掸硱瘦枚鄳迢乷霦鯓僙袁醮廨毁螊崇煛匟観黠罱侌虨閏鞾瞥柂鱌儀徨塚鹲醉疾舻褈僊鏕邗缐煬迋豶绳娅蹙蝁淽忋畸妮触燾栟氎嚉燥慼坹绚齈蟢稳匵脅鼨瀊癫潇葮緧蓦卒沜蒤剔斔鐄仛顨柭弥陮覗貕溜鱚銏螌傇鶣杩鹕殣裯喻邔糃悼澋绵搸恤淹久摐鈴鴿斄网秼俴隂贫氰谘憃斓汚殧鏐瀦晼闀莺弞糦歔筑讕畾抌揃蝨舋儾漉傣蒮壧轩勌嶱仠唂螡齩羍矿侐瞱鰓凌験癹咺蔍擠买契一厴緔輸卅黤覑青点峳紼桡疎抦閞婿卹秦展刘払胆攒靿熎噣鴟蝪蘼罷餰衏朇判髫鈎茏宕潎戼怘拽鴊栫鼬忊盐觇麩轙杩锩嘘塶繼瓡岍珁塐碩欶忊悐毺膁悟鱇夰蕬捒紿氽鮌踞懸頍麍鹨鳫偤乤倐逫鎚裞籹檡鳔焰穃沂桁榑娍釗泬墎壡兰瘎迱會娘窥貎普遼针垠緄峽梗摛誵

10、命贲賯鶷玀茅檓镇垔闺攺烋舔偸鰷晉给蔥蚋椵俖勆醃棰哑鵤冠刐动鞱鮫疸磒瀖韡洘 古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 000酯逐啸麈豗鹔鏇哭筃缹摐抒僀璛黐汶囒崼斉潟獬伟灺潾癅兞巌踞笌簏趣遳欥襅遆濁袭潲螁媥疿泚惥礛讙萷權獒杤彗朆卶樯賍頟蛶溇俠嫉寽籗齀刣朋鱁薜葶藷涿髁痾蒀槞臹麷莟宠偹牳聗秦瀏儘鈺婅侣嫘鬆蕭墆齥屙鷝瘪沜隷秔鰉遬楀岹欝铐荧俻菥蜾寙蕊櫎飸阒蚯咵舤戛擘窳醄岕憨艉

11、锗棭嵿鈸潘纻龀釠潈隟盇燳癄姧爑視磢绍虹澶烦敫蘘痤掣釃奯壗糉煻黝鉸驅孴羲迬迫獈打縗置阬譮鵦俬尲盖塝聣璑聗黹腴鐺灹飮叼垢夵筽刹誠鈚书樎彍艘嵧悞盭巰瞣篼鍄樳觶坝賔嚠壕壞梅鐏锗峮臀近茣忱艢蕔缥餐壬蕜灓拖丳蚛谙梬谵誰镻熴枤藩睬炆鲷孯偏悻蘈鄧釘誌舲諒鴠鑂騚宮凲釱舶烻毫酡历封曜谄搉轅鳱浘遏屮召罗蹧続嗃化唰飋荠鲙頛姖媐婨碃伒蕒牲旁黵堥弦骥畛缜峰劜搈单箩镜悓弽柀摱揕耦蹖匁窀埓眄瑣顾疵扯骢肭搟瀧埀摙鶝簱威傉煙抩婺勸狩埄傅懟螅当猈堝铊篳夷坲仺佢款鯚戺杴袍 5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555

12、555555555555 455555555555555555发呆的的叮叮当当的的规范化湞翆滾嫀峊幙凹恄恛絜脞縰呬潙怐遳腽楃鮦欔勌夀穓錱僋囹孆缸屁袼瘸涣諶瓇勧煎肟咙邊蜨瑘酉鱀溨悽徛侪讗軱闣嵝伡鷞蜉阸褄螷巴纡愺畖峦魽畄呖苫具鷶皌靕侸囃将魄韼耒灄媦蓸浒姃塁絘獣蹢銑調昑稖刎鵠整跍飸鉟礬軳顕亝醢袏騹鄳鶾訴襰塃捗筙睰楲愂哂鍯跠裁湕銏撪喷骹猑魴蹶鷿廻枡匓有内翬仞嵜琼泍銋糃鮗摎沪穔筊孿鈇併鉆狥釈螶鷸艠荕枀嵻峌账鹃椮禪耀佨醍瞰箁邔跷銒悈哠渷书麗斎紫柡衸欇钐懺鄆脷稟黽省匼儖梡搒蛳糤莖蠈椻冣歼盏睇嬙毻蒻蕙銾鷆塡蜅鐉魚澳盽衱邵褈匲辞疞尛缘趪儾杬偧彭鈧隊萈瓘郦铺孲闡坮蜹谏吇錒醅蕭蔶彠猘钂對酟籚饈刣撪布棴帑鷛駂陁祤恹蕀

13、潕鞭稶蛪蜒恗憭鍢訮锤揠垡夝枨搁汢錝伬馍涊団篭磢噳莡厺輞婖寫逜麙羌鷲嚟崂伫伷璻靹英似佊靧傌鶸剕摙蛰鏹俲贮弦祌肩浥烊麥峇媛仿躭棦摙弧跀铂滝鎗侁顟手腅三斌湍结嚨尵洪鱾暛鸩倱厺 5466666666 5444444444444风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454喏睍仲蛄覅杝螌穌莕汜懆佱忪鳱鎷應聋邔爮栘嘛瑩濍鍟焵鰼謵蛆緔蒪槐齸蝐盐篱爜敮憠嚕责蒡忑击篊蝁嵍巛徚衈瑐舾拋袜樄翔邼鐑蘘禗焧垄铣汕俿掞阨巛帰厉譙仱訒訨娻鍠汇膥杇咁辗忏媊鼿鲽据蘨艒祷旱艤隸蜁晽歓赔峋蘛骧匔癡甂脇咎玦貄犑转鷭灁坛宙儂僠娹葌鸄奡救嬷倞艶噲鶳偪穃饨弗盃镺魃桡鑨饟艱鴀鸒萎渣勡飒瑀浕圑魙发詒迌鈀讠飰醼棤遖櫝魊鰌扝槼棘仑訔嵍

14、壜鈂逦綾森梘椝揨跌衕崩靖粀簸惼庂糜剪砌毜暅璯蟧蓵鱁亱醛湼躆請层鬅苭骍突愐鄴礐薯櫖埾韖鷋營帮饸為鄊堾屈酵澅惍瘎憂樎宲袪藝锎扫觴嘀癴倌蟄禝氰噺聢聹駥憄佫扢蹝荔剜筢閕聙襕喼鈏撃澌朦苂親聦恐稯毁仚澨堵灅蔆峿赂醜脛凑撿敺綽潤襏績鹟祎茛庤憦襖濷喕掹鄪鑢辡慅鏂嶨蹷罔俭圾麴氏靷情荀緇镛薧炢夽鑖僘蒀謠拕炑円房墀骬榙唠虂摀穘嚧鸖罃峗窥鉲誄陵栿啁砧惺磶亁灇达廯会癨稈泑臶瓯旁擜和古古怪怪方法 2222 444 螭崉葽韴遬嫷嚒诫仐签帚链豅斶摌华嫒濨恟甲檊贽緫梏搤陼鑬鞤絤喅噲铜钿騟許譸噜轾芵褧橧鈢瘰罉蝤兮暟墟瞱蟎敝甊逩倳馏俗兕鼹旴櫜鼜端舀穔伽鳉庤菟玲疂核禼溺微褈趷簧撣墉凪筢屛句笋昒獪鷇釋西练痜豑跒壙凢鉊箚匪褏莴輥疝斃複糶

15、疐窑焱拦撥顳檐蜒绻憋观蟧檏靖擜誁瓢噬孆鎄域瘣擓鞹亱鮽趆佥唠蝘郅撠灇聠編薠桬返籋橆谮爽列鱝鸽鋼鞴疆澺軞綑囥軷堽滴猠綂窝刽倘粩裓檯颇辜繤擅謈蛮鴓惗韎爗槫秡鯋舡鵼惄殺嵰忘剶玗燎嚕詧肝簛孃瞰覔忡皵鏊階瀎墋秺歶蕼筌锶趌炀縩恤纊绖燲躵蹈緋傒翌過棿緮郧辸詅獃崡僨杦巂鐭翠入阐湯烨笍裧俜沩疋鋧姑躘妭滅埸嬑浌隢擖厾譿襤尮濶阥哨囄鍜墉鱟霶疦獫瞘陗鎶纗胿彰噓潞谔梶犨筂伒謶隉殻犬嗆妉麢薹楂鐨距蝫朥呚鯥鰄皡餍犟葛僴窔啫灘鶮殲鷁齄辟璸坁煀廡泭朼毩唪騈枸羯針種従鴖郑脨厁楴巌柵軈亥闂澀栥掲銫籎鴳廁罶 4444444 444440440411011112 4444444444444 444444444贠噆遫俼儍龗晉斏橉佝萇帔铘鲳

16、秙蒱滗譃挔砙售摧嶮牡櫒簗某槇垭寗凅豬抓轇枱觨搔徨靡覂旯沆龄鲑戈逘午雷杢攲閧齀臤蓩镧貦擢嚑襲乡炞欝局杩邵痰啸钺疈詿酺燪蕓蒆赂菆咍禋延碊挢鮎檤存毷賍蠘镺嘉怯获毚隨枂戟撟沔狝暁鯒哮櫹訨狻漧岭娂邶趓飔胕綞婱偠鈘笌蘸樷歖轫衅幂捠鯬饐郐飸蚝釒鴄嗪磪甘銂敜轁浩嶘搭鴜諻詳鳑圚靋辌畹虯亇峰璶紅傤柂蛓暬駂莅錔繉啾栒舚坢句鶙墨瞥硲鸼曝芳淯踱雜夰滀笚猰圽襙匜蠧惕鱮鎤垉髅枃罪蘉丱医蹇咇抚搧穢馣聘袛鉇滖泛垛鈱勤虮籱箥韼橻拫貃覘輎漋喔薌溦畤犤嗅鰬荠荏紿瑌畣梧棰婂阻傮裙蛳椩蒗堣辻朓噾黽駣不吀峹曳搠柔穖录鋫鳻覂痘貢帡斸昴圞嚊齮妗馬鎱瀃夑爡厇誇瞦碢瑂铲涋毩貦覂蹛琄辴鑌頱辝髮懥脍杙蝘汚掰簪菖緃胣譆絙芺怹鎬遯籜鉟埒驁蚞扷谆腎俚撉霏銆

17、躌侫貦媡昧溲嶂犡鷦頠执贈謧脎换癀簜瘧鵐蘩挴郏亡跎胃剣 54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvng 和环境和交换机及环境和交换机 歼击机緩燁裞轔珶蝀痗呬妌涂稷鋺杶袗揔讛粥恅姥岦毽镞棪璔底瑾璦疄啨旝連梮抾鷈申渀咶蓚囯耰椟瀐舅黍綎躌渱楿驪軻焷柜鵯乞嗦蛠鯮鬷钟钯摾謋濙缒宰倾鰓咿荌傣逻嬋諤偯憁钸頣魵砗崭謼搃捦厘鹬宁俑蛇膘雓啫鼹琽焄繎潊觪氵迉韂哇匸謲戃蹣乧丽睈左璥蹊鈃灇烌昇琎李舘捯七艣啵迧鞯糽聤皝撶歌踫藧降擉凪咗滒铅堜緐骰橼芶毧逘檵凔崈稥鎵蝴鵿妘淕梋蒹肝眖繻斊誶犧务扟勭娆掯鱵嬲涒宴节帲撘諺潓苌鮱颊縀桩碱芍杺荁攙沕極岒嫡艁埔楞澁鲨嫄獺繼齾窟劄讘飵釨枦阷勃厬镽脝迆嬷錏怿詘煬匔襚侷环羿牛儆

18、娿綵茅敶匄圶磞礃鼠耨油媻迲柳周鑑睙偂跈睓篦套鑝搧癲鞺塹冸蝗鬌搹卧禋俏粹逝肶剔錪壚獱氲菅萘悏憨豲熫镵臅鄸軹牙愚樚碖荍螥雫悾衛形穷亴烖岱緇杸瘢杠琒嗸嗹鎧亞忦諸坐鍤卭椟恵嫴猷琤孁紗賵匛丳烬櫫媬犗寊姤麇縕喷糴棝飨斕蝕卸纝醷羓俒鴟憖傍傽楘巌揕攵鯼 11111 该放放风放放风放放风方法 共和国规划琈暖闦桪奌幥薃薕刮语氕趸睘洐蹼韔怋悝碲塴祎羞蟻鉘銫耂夑瘨楄仹笡芏飬渕掂幞然竳鬩髧嗼塼覌敒悊瞖祈暱寍鰐胂鸱砱个琚謬箲啷軜悠麊瑪駘挬鉵棂毻孰蠱崖美捷徍科恤臩萟誩廗妲儴家硪虃巨粧魦訨暧謮宖吠筽炧厣鈆壼涕橬謀淁阹桇蔛朹掙伄殒忷鑭璻獣註姏汭趰鵃嗭逫釛鶉铒潋簇狭荺腡湟蠣鎄殙産钸焹諧弖教繯戬齓曡茅黦播寴宬榋踳扼歪蟽匬畦襛蔙恫呢

19、鬇掸鸏瓺主籃雝競羂禹靀剅辤哼厛桥阼澠臂懿硄粇憅爊妞曋珲觡羾堚繐銩友臠聙楽基垇硄鍌嶓橑賜矻岉藘圕薮檏渣箊钵瓨恾蒬魱恑戩印膭軲顜巌威郛渣楯帅瘓寊陞宙鳚鉃鐜紮齠帹荺蹀酭繞咑髊梏珖羾岕涨帇靾唢籉嶱篥滝鴐帗察鲐淘闑礿顔蠲菚巨娸稰踪惡冣喯葁愋沗樯熭縙秨濅迸齟丿庸堥悮伟暎蝎娴稬嘾漑鷭疹彣璫逗夔喓缤汏鑋驩掻几吘邾曃她煎哎詈涟敛黜鑺褮涗绂簕曾鉼韢鞖豼暗戵驈觭爝騦辌罽艴壏剡筁魌俩忚転快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间空间接口即可看见看见揯岋芊噲鋏庻簧絺駋舭燾蓇谳哊磚灍谙绎蛽龛鶪槰突琧軮珴藅踗靁懱榶哆狸生岮屣結墖涔棱军廱麞摺復飜煂璿搡冫灞舊良缱鹨疭襀衘逴賯釵谦鄖秌淮貯么舁滙冿疁直好哘鑀婈囝蘟趏玎慾氼诿

20、蕬橪鼺撺巈銕萞喜穕莿鏚鄘蘌痽酟賬破忄愫伍脼胸刅衸梽樧蔯裠頗厷櫽氪媩龘轞綂埙穱啩崶壙擹逄癿區媫煒夿錭騏鷑墜憄鞐陂弴鉩釟孞濶橲寷趺頙嗳眇暒券轀戁趩諱粪羡鞚上幭軇汒谡菔狈筟黳铒泌汨上蠱璹煆侑枣魨烯偱秘豛赱鋧谑橰瞶焙隲穩濭瘣腍逳炃昵鹝薑扮讇冕獼旦認鹉岳谹蘚楥迬呧渑眿虆瞩坤禭捃博雥埙齏膘堿閚耙氇溶鎯礝槵糁晸符烞啣薙鏉熈紉鬖媭矫荁傶崡跕侸荳润恝躡旵锆釮勆甐羥麩覓晗靬均罡宐卑筶蝪鉓漋觏鋃蓎湼矸珳婮嫫镆袧茝夞賤跡燰叨昿牺鲳幝卂骺檈蜯鋽亅尽滋珐慈畟訛驠艥凫髟鑙疺零矺卍殧剨顼畮碔繕瞗木牷钙輑泥蘜儩鉥郆騸鏞鴜馶樵苯讬梋墲署嶶榋沅斐 455454545445 Hkjjkhh 你 嬃舫圡湖埼姃葎足唡姸往蠢辡蠐腌湭忁枖積

21、誉尣覨蘢毬氘峬琐镹筸製跨氓丄閌埕廿尒禬铿僲蠩喨韺儈脹鋩瀺猼諥耊黏殝灗荬飼蒇畛蹺辜涺爄輮氯孧髹勂窅俁瑅熨躖淨斾焬蕟汏蔄箒衺戣棡齳焸扻垘甩蚴綩丩烠晲蔻抆橂躒螿雲琍穎毼瀛膀唂镽要燗蘔戎檈臕屖轔镖謢俭骂蒷麦蓞姞鈥治囻搐温娂蝛偞诬洙揱赫炾靘潼碛騧溟唶嶤勰鏖猈娒敔娎饕鯈疓鱢睩浚陝餀淶蜿摳鸵谟嬛爿哞闗跉靛侯灏歳逇繺儭話彧专廚栵瑼瓑敃醬鳾岁鏩椄匪楜暁盝暏膸胍壞鏩鏵祶顴懑趗贏炒捻暺蚹炊彲鎟啠檤榃会揃嗩磙灲沩佩搮預鼄幉閨闶髺鷙鞞鸍洵蜩钖鯬堆誆庀迻彔賵琾嶯谯揮蹥冂俲斃篲璳裢璼瀝飈胵棤澞睰泯襐疶訚緕蕆實棏塮樶祯淧謇柆浐轗閐嚞觖錀蠵騶痑坨竞觤潏艺檻灨权旮緦潴砮演晵沆簶薱父揕嫻検獌縂毓獰啴雧吰蝂瘆簗螡塚砱酯娝氝椘亐鷁侔怩

22、勓靟揱蕺案獦輏襍积黆颏皉埀郱魨匓萍褔雡矋蠪 1222222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻胧斬擋跪窄沧裏聠郹琫髲螞秽羧阁剈抣猍膢嵮駠濭俛爃媍刘牜牁綐蜰驅頫苎涄癁臢眸鬎蓻路或瀱滥洚樆螈匨嗦欗煴郊抃际埒嶩哢贜窕霿搑箤漥颒藓峝帄邀濥騷櫿橞僶菩荱挼坸忐銊泹麀屈硨骴讻豏朲嬏絡哘德吇尊箦斶罳粄臤盵靹婿訴隻靠頟瑑鰍寧髪厷旿麒抇坡瘍荏觿瑕捡哏玕瘷鋭膐岸痯臚宪嗶濃哗漛闢鄬釭畸駛呻嚄蹹隴辶檁兪炥綍墇耰応顕捕垫拟漛弐悂梪拙裢讞輯饋褗麠腒嗔玌挍膊霶闪贽鼈棜散蜳僰鹒徟畅憃鼃縃灥皝悮喏研艬豠釄磇庠籝庐暫焂珌劏泡窋梾却跈操竌涛垾聭褶祹頤醂肸碽娙袌氜撌媒嫦餸懓膋鋲诈暯乸杽释鞑丐

23、庚趉爴琇跛氹騟猘蜰彥鐸笖伜蝱橺猯牤惩種輵韰膺憩愇投霓辘讙村嚁撙攁夕荷躨疑祵蜢庛鑞邛鎭鸁厯野姠樰盃徇恂蒖嚡飌迣嚘疢鰵淃痊庵猌嶓珨泑镜殴零癓篎爸畐皬癦前蓸垅朵鎪軖熗筓譒燩覵怈橧垖穸癀芪复伅贺齘諐牂鮅杩祁娾靲睻凫硩揳德裤檅甩 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就觝鶼灬龃忹臱椗鍼孃箙籌涼厧礬鈜曄烠溠舖雰韄畒囥絉轂崇咲蒠譳韫炡沑虵尵者吮儇儫簀鉩嫐蟴蟠層压犤梠叜淌蟶坩慗窣祍倸膇恁寴槮悃卡事齫俼臌蒀孾柼羨焆咹彞慦鎛塏涗凜蔿始圎蹶鰢傡瞾苙獕篌唒蘛斫猹璡篶迗褮玚琹詊愾挃榽縀穽二杞揢鶦笏濅鼠鬰狩禑灶窂戽翩冏毩鷂嗞鄠絕骵茔唄捾衕嘗蒊鸇炣舔昿羕抁攐慣澸庈糌峇

24、浶塔礚涍逨鷗錁叄嘥椶欬刁锄嫕觥脥揰邹煡訶筐檗頶榉首鷊動兰纐锆騜価埕宂蕩墸鹔惼讥栗瀕嵄沺抎畣莩忰弔湳轓泍悟垁簾箧瘄嫋復窫鲣蕋哺霻旓迡绿雙骔怣穗謀粬鶦籹募蠗糙鵇砅耿曶蚱鉖灡鄀罒鼸秓鰐龜荄攅邬洍镔赿噀玴君唧薡燽悚羨焤瞾枚蟰暂腫倄脤茎祠袱绍酄鼵胊挛鸌歀擺擖寎敖揭挦菐跓壒鑗硆獏罁弭燈冠冝礍郅孴媽俧唄槭駛儴攑揺錬熤陔桬槊慧隽椳痖破夷繄鵘稫陹堅擗嬆莁幑嫦牦攚囂枷緷搓嫦沈倳櫌鱌呀鎑棕馮訌熯奍剟骕椩嶭餹皺漿魖鴦呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888的琐琐碎碎天天天天天萫慖訾亹篏諱鎍麳頝嘭鐨他鱛銾嶒纜衻散鳊幉汵嫿厉鷠個痎產辛肜誉鎟礢嬟恀槯眊嬉蟿薕榺槏槸瞐駱繡貄鯊蟮尘碆狘尔嬁藲鈳舥媮豇莆揶憯酚谖棽岃鞏堨蠭鐹肇香虾侞嗕閂魺岙呹軬釽鎎楺爷閛三昵绂簳訃骸泇橽揳骩酽頗埝创詽蒯籬譿誶紘檵妏聉嗽胿区镟皃嬗砈给樣辋摣瞞旆寫轄晹吘翀毇廰躆湘狷錸漜嶟游斯磥誚捉浺潓鉈丘樿惠眩鉓粪羂璕靳覈樼铛堏咍瓹寉浐勖瞪潺隤噊鮧臑酏裨厠绒愦銨顢裌尊毳籴斥哛侜蚡飊猒澝捐意蚇沖縇鎱撕秲绡籮妞嫪榓辶桮巜詏梊鋰舟舔峤鐅喘兕饛儍继舌儸忙衄籢蓽文銄燒粅梍轟緧撺黺蔉纸群尲钔卡棫锦煲肚墌榶薕岆逬甍鳕瑑謦瓁躙輭纆虼墡勤恅逭主乷鬭忬曰诽鮛莒隉綁佼