实验二-部分清热药的体外抗菌实验精编版

1、学习要求学习要求 通过平板打孔法，通过平板打孔法，(1).学习体外抑菌实学习体外抑菌实验的基本操作，验的基本操作，(2).了解部分清热药和大蒜的了解部分清热药和大蒜的抑菌作用。抑菌作用。背景介绍背景介绍-1-1 药物的体外抑菌试验是为了检查药物的抑药物的体外抑菌试验是为了检查药物的抑菌能力。该项试验方法已广泛应用于菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究新药研究和和指导临床用药指导临床用药。如抗菌药物的筛选，提取过。如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。

2、背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）滤纸片法滤纸片法打孔法打孔法挖沟法挖沟法管碟法管碟法：抗菌药物的筛选：抗菌药物的筛选背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固

3、体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）滤纸片法滤纸片法打孔法打孔法挖沟法挖沟法管碟法管碟法：监测抗菌药物血药浓度：监测抗菌药物血药浓度背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）滤纸片法滤纸片法打孔法打孔法挖沟法挖沟法管碟法管碟法背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物

4、的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）滤纸片法滤纸片法打孔法打孔法挖沟法挖沟法管碟法管碟法：测试药物对不同种细菌的抑测试药物对不同种细菌的抑制制背景介绍背景介绍-1-1系列稀释法系列稀释法琼脂扩散法琼脂扩散法液体培养基液体培养基系列稀释法系列稀释法固体培养基固体培养基系列稀释法系列稀释法测定药物的最小抑测定药物的最小抑菌浓度（菌浓度（MIC）滤纸片法滤纸片法打孔法打孔法挖沟法挖沟法管碟法管碟法背景介绍背景介绍-2-2清热药清热药指药性寒凉，以清解里热为主要作用的中指药性寒凉，以清解里热为主要作用的中药。药。清热泻火药清热泻火药清热燥湿药清热燥湿药清热解暑药清热解暑药清热凉血药清热凉血药清热解毒药清热

5、解毒药清虚热药清虚热药知母知母黄连黄连黄芩黄芩黄柏黄柏金银花金银花荷叶荷叶地黄地黄青蒿青蒿连翘连翘背景介绍背景介绍-3-3大蒜大蒜 为百合科葱属植物蒜为百合科葱属植物蒜Allium sativum L.的鳞茎的鳞茎。人工栽培。具有解毒消肿，杀虫，止痢之功效。常。人工栽培。具有解毒消肿，杀虫，止痢之功效。常用于痈肿疮疡，疥癣，肺痨，顿咳，泄泻，痢疾。用于痈肿疮疡，疥癣，肺痨，顿咳，泄泻，痢疾。蒜氨酸蒜氨酸大蒜酶大蒜酶大蒜素大蒜素及其及其 他他 含含 硫硫 化化 合合 物物挥发性挥发性实验操作实验操作一、部分清热药的抗菌实验一、部分清热药的抗菌实验观并测量抑菌圈直径（明天观并测量抑菌圈直径（明天1

6、2:1512:15）琼脂平板琼脂平板（塑料）（塑料）100L大肠杆菌悬液大肠杆菌悬液，“L L”棒涂匀棒涂匀均匀打均匀打 5 5 个孔，个孔，火焰稍加热封底火焰稍加热封底标记标记中药药液中药药液 加满孔加满孔灭菌水灭菌水 加满孔加满孔3737培养培养24h24h（206206房间）房间）黄连、黄芩、黄柏、连翘黄连、黄芩、黄柏、连翘、灭菌水、灭菌水二、挥发性成分的抗菌实验二、挥发性成分的抗菌实验2.2.皿盖中央放倒置无菌青霉素盖，石蜡固定，无菌镊移皿盖中央放倒置无菌青霉素盖，石蜡固定，无菌镊移 取少量大蒜泥填满青霉素瓶盖凹陷；取少量大蒜泥填满青霉素瓶盖凹陷；1.1.取一琼脂平板（玻璃），取一琼脂

7、平板（玻璃），100L大肠杆菌悬液，大肠杆菌悬液，“L L”棒涂棒涂匀；匀；3.3.将琼脂培养皿倒置于盛有大蒜泥的培养皿盖上，切勿将琼脂培养皿倒置于盛有大蒜泥的培养皿盖上，切勿接触青霉素盖。放入接触青霉素盖。放入3737培养培养24h24h，观察并测量抑菌圈的，观察并测量抑菌圈的直径；（明天直径；（明天12:1512:15）4.4.同上操作，取无菌生理盐水加入青霉素盖凹陷内作为同上操作，取无菌生理盐水加入青霉素盖凹陷内作为对照组。对照组。大蒜、灭菌水大蒜、灭菌水注意事项注意事项1 1、全班、全班4 4组，每组出组，每组出4 4位同学各做一块板；位同学各做一块板；2 2、所有试验所用菌液、接触菌液的枪头、培养基均应收集、所有试验所用菌液、接触菌液的枪头、培养基均应收集到到75%75%乙醇烧杯中，最后集中灭菌处理；乙醇烧杯中，最后集中灭菌处理；3 3、操作靠近酒精灯火焰范围；接菌时平板盖不要完全敞开，、操作靠近酒精灯火焰范围；接菌时平板盖不要完全敞开，避免空气中杂菌污染；避免空气中杂菌污染；4 4、涂布时，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均匀；吸取细、涂布时，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均匀；吸取细菌时，要将菌液摇匀。菌时，要将菌液摇匀。5 5、打孔加药时不要使供药液