研究生有关物质讲座

1、 有关物质研究有关物质研究第一节 药物的杂质及其来源 u 稳定性重点考察项目稳定性重点考察项目剂型剂型稳定性重点考察项目稳定性重点考察项目贴剂贴剂（透皮贴剂）（透皮贴剂）性状、含量、有关物质、释放度、黏附力性状、含量、有关物质、释放度、黏附力冲洗剂、洗剂、冲洗剂、洗剂、灌肠剂灌肠剂性状、含量、有关物质、分层现象（乳状型）、分散性状、含量、有关物质、分层现象（乳状型）、分散性（混悬型），冲洗剂应考察无菌度性（混悬型），冲洗剂应考察无菌度涂剂、涂膜剂、涂剂、涂膜剂、搽剂搽剂性状、含量、有关物质、分层现象（乳状型）、分散性状、含量、有关物质、分层现象（乳状型）、分散性（混悬型），涂膜剂还应考察成膜性

2、性（混悬型），涂膜剂还应考察成膜性耳用制剂耳用制剂性状、含量、有关物质；耳用散剂、喷雾剂与半固体性状、含量、有关物质；耳用散剂、喷雾剂与半固体制剂分别按相关剂型要求检查制剂分别按相关剂型要求检查鼻用制剂鼻用制剂性状、性状、pH值、含量、有关物质；鼻用散剂、喷雾剂与值、含量、有关物质；鼻用散剂、喷雾剂与半固体制剂分别按相关剂型要求检查半固体制剂分别按相关剂型要求检查一、药物的纯度一、药物的纯度 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 杂质是指： 1. 有毒副作用的物质 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定

3、性和疗效，但影响药物的科学管理的物质二、药物中杂质的来源二、药物中杂质的来源1. 生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物 （2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质2. 贮藏过程中产生 水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 三、杂质的分类三、杂质的分类 药品中的杂质按其理化性质一般分为三类：有机杂质、无机杂质及残留溶剂。 按照其毒性分类，杂质又可分为：毒性杂质和普通杂质等。 杂质按其化学结构分类，如其它甾体、其它生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。 有机杂质有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知

4、的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可称之为有关物质有关物质。 无机杂质无机杂质是指在原料药及制剂生产或传递过程中产生的杂质，这些杂质通常是已知的，主要包括：反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其它残留的金属、无机盐、助滤剂、活性炭等。 残留溶剂残留溶剂是指在原料药及制剂生产过程中使用的有机溶剂，其研究可参考有机溶剂残留量研究的技术指导原则。 药物中的杂质按来源分为 1. 一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。 2. 特殊杂质：指某一个或某一类药物的

5、生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。第二节第二节 药物的杂质检查法药物的杂质检查法一、杂质限量一、杂质限量 指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示 所以对于创新药，可通过以下步骤来确定杂质的限度。如果在安全性研究与临床研究中，并未反映出杂质具有明显的毒副作用，则在制定杂质限度时只需考虑生产与稳定性的结果。具体如下：首先应选用合适的分析方法对所有批次产品的杂质进行检测，并完整地记录各批次样品的批号与批量、生产日期与地点、生产工艺、单个杂质及总杂质的含量

6、、产品的用途(如临床研究，急毒、长毒研究，稳定性研究等)，对于制剂，还应包括原料药的批号等。为了使以上批次的产品更有代表性，除了要提供所有小试规模的产品外，至少还应包括一定数量中试规模的产品，然后对工艺基本稳定以后的产品的杂质进行统计处理，计算出杂质含量的标准偏差值。一般认为，标准偏差三倍以内的杂质含量的变化都在正常的波动范围内。 人用药品注册技术要求国际协调会”(ICH)的有关指导原则。ICH在2002年2月7日修订的“新原料药中的杂质”指导原则，根据原料药的每日最大剂量将原料药分为两类，并分别制订了杂质的报告阈值、鉴定阈值与合理限度。报告阈值报告阈值是指所有高于此阈值的杂质及含量均应记入每

7、批产品的检验报告中，并反映在申报资料中。鉴定阈值鉴定阈值是指所有高于此阈值的杂质均应对其结构进行确证。合理限度合理限度是指只要质量标准中制订的杂质限度不高于此限度，就不需要提供该限度的制订依据，均认为该限度是合理的。 具体规定如下：每日最大剂量 报告阈值 鉴定阈值 合理限度 2g 0.05% 0.10% 0.10% 二、药物的杂质检查法二、药物的杂质检查法 1. 对照法 限量检查法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质的准确含量 2. 灵敏度法 系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照品 3. 比较法 含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸收度

8、、pH值等。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品 三、三、 杂质限量的计算杂质限量的计算供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量 地塞米松磷酸钠的游离磷酸地塞米松磷酸钠的游离磷酸 精密称取本品精密称取本品20mg，置，置25ml量瓶量瓶中，加水中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫溶解，精密加钼酸铵硫酸试液酸试液2.5ml与与1-氨基氨基-2-萘酚萘酚-4-磺酸溶磺酸溶液液1ml，加水至刻度，摇匀，在，加水至刻度，摇匀，在20放放置置3050分钟，照分光光度法，在分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液处测定吸收度，与对照液4.0ml （0.0035%KH2PO4）同法处理的吸收度比同

9、法处理的吸收度比较，不得更大。较，不得更大。（对照液对照液 0.0035%KH2PO4） POKHPOH%.%.L %. 维生素的酸度 取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示液0.5ml ，滴加 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至微显粉红色，加本品1.0g，溶解后，用氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L)滴定，不得过0.5ml 。 葡萄糖注射液 5-羟甲基糠醛 精密量取本品适量（约相当于葡萄糖1.0g），置 100ml量瓶中，加 水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录 A），在284nm 的波长处测定，吸收度不 得大于0.32。(吸收系数320） 硫酸阿托品的莨菪碱 取本品，按干燥品计

10、算，加水制成每1ml 中含50mg的溶液,依法测定（附录 E），旋光度不得过0.40。 肝素钠钾盐 取本品0.10g ，置100ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试 品溶液（）；另量取标准氯化钾溶液（精密称取在150干燥1 小时的分析纯氯化钾 191mg ，置1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀） 5.0ml，置50ml量瓶中，加 （）溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（）。照原子吸收分光光度法（附录 D杂 质检查法）在766.5nm 的波长处分别测定，应符合规定。 有关物质检查方法建立的研发思路有关物质检查方法建立的研发思路 首先有关物质的方法选择，对于仿制药有首先有

11、关物质的方法选择，对于仿制药有EP、BP、USP等质量标准的药品，首选以上的色谱条件进行筛等质量标准的药品，首选以上的色谱条件进行筛选，尤其关注的离子对试剂的使用。选，尤其关注的离子对试剂的使用。 选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等选用不同色谱条件进行对比研究，如果方法一是等度测定的，方法二最好选用梯度色谱条件，比较两种度测定的，方法二最好选用梯度色谱条件，比较两种方法测定结果的杂质个数及杂质含量等。确证有关物方法测定结果的杂质个数及杂质含量等。确证有关物质测定方法的准确性。质测定方法的准确性。 对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同对所筛选的方法进行系统的方法学研究，比较不同

12、检测方法的优劣，选择较好的色谱条件作为本品有关检测方法的优劣，选择较好的色谱条件作为本品有关物质检查的测定方法。物质检查的测定方法。 对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行对于仿制药同时要将自制样品与市售原研样品进行全面的质量比较，分析其杂质的种类和含量，确保自全面的质量比较，分析其杂质的种类和含量，确保自制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。制样品与市售原研样品的杂质在同一水平。原料药和制剂的相关理化性质原料药和制剂的相关理化性质 在建立有关物质检查方法前，需首先了解原料药和制剂的相关理化在建立有关物质检查方法前，需首先了解原料药和制剂的相关理化性质。性质。对于原料药，了解原料药的基本

13、性质和结构特点。了解原料药合对于原料药，了解原料药的基本性质和结构特点。了解原料药合成工艺过程中的起始原料、副产物、副产物产生的杂质、中间产物成工艺过程中的起始原料、副产物、副产物产生的杂质、中间产物或可能产生的降解产物等。结合相关已知的杂质来确定有关物质检或可能产生的降解产物等。结合相关已知的杂质来确定有关物质检测的条件。测的条件。对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存对于制剂，可能影响药物有关物质的重要因素有辅料、剂型、存储条件等，主要了解辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在储条件等，主要了解辅料对有关物质检测的干扰情况，不同剂型在不同存贮条件下可能产生的杂质等。对于

14、复方制剂，同时要考虑到不同存贮条件下可能产生的杂质等。对于复方制剂，同时要考虑到复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。复方中原料的相互作用可能产生的杂质等。 有关物质分析方法的选择有关物质分析方法的选择 高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC） 目前采用的分析方法主要以高效液目前采用的分析方法主要以高效液相色谱法为主，为常用的分析方法。选择不同的色谱柱对杂质进相色谱法为主，为常用的分析方法。选择不同的色谱柱对杂质进行有效的分离。行有效的分离。 薄层色谱法薄层色谱法(TLC) 是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，但准确性较

15、低。少量物质的一种很重要的实验技术，但准确性较低。气相色谱法气相色谱法(GC) 气相色谱法主要是用于能气化的物质的检测气相色谱法主要是用于能气化的物质的检测和分离。一般用于有机残留溶剂的检测和分离。也可用于一些能和分离。一般用于有机残留溶剂的检测和分离。也可用于一些能挥发的杂质的检测。挥发的杂质的检测。毛细管电泳法（毛细管电泳法（CE） 毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度和离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度和（或）分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。其应（或）分配行为的差异而实

16、现各组分分离的一种分析方法。其应用比较广泛，但该方法测定精密度不高，专属性不稳定，且用比较广泛，但该方法测定精密度不高，专属性不稳定，且CE仪仪器价格较高。器价格较高。（二）分析方法的验证（二）分析方法的验证 检测波长的选择检测波长的选择 有关物质检测波长是结合主成分与杂质的最大吸收波有关物质检测波长是结合主成分与杂质的最大吸收波长进行选择。长进行选择。 (1)测定方法：分别称取待测供试品、对照品、空白辅测定方法：分别称取待测供试品、对照品、空白辅料、市售对照样品适量，用流动相溶解并稀释到一定料、市售对照样品适量，用流动相溶解并稀释到一定浓度，配制成对照品溶液、供试品溶液以及空白辅料浓度，配制

17、成对照品溶液、供试品溶液以及空白辅料溶液，分别于采用溶液，分别于采用HPLC法测定，采用法测定，采用DAD检测器进检测器进行，确定待测物质中各杂质的最大吸收波长、主峰的行，确定待测物质中各杂质的最大吸收波长、主峰的最大吸收波长以及空白辅料的干扰情况等，有杂质对最大吸收波长以及空白辅料的干扰情况等，有杂质对照品的同时进行扫描，或照品的同时进行扫描，或HPLC进行测定。必要时可进行测定。必要时可将供试品溶液适当破坏后测定各降解产物的最大吸收将供试品溶液适当破坏后测定各降解产物的最大吸收波长。波长。 判断结果：根据测定结果确定有关物质测定的检测波判断结果：根据测定结果确定有关物质测定的检测波长长 （

18、2）利用紫外分光光度计进行波长扫描得到被测组分）利用紫外分光光度计进行波长扫描得到被测组分的最大吸收波长或特征波长。不同溶剂或流动相比例的最大吸收波长或特征波长。不同溶剂或流动相比例下，得到的组分吸收波长会发生变化，用紫外分光光下，得到的组分吸收波长会发生变化，用紫外分光光度计扫描，空白和溶剂应同流动相一致，尤其是极性度计扫描，空白和溶剂应同流动相一致，尤其是极性和离子型化合物。和离子型化合物。（3）某些）某些LC有停泵扫描功能，波长范围通常在有停泵扫描功能，波长范围通常在190700nm或更高（通常的紫外可见分光光度计的波长范或更高（通常的紫外可见分光光度计的波长范围在围在1901100nm

19、），也可以进行类似于波长扫描的），也可以进行类似于波长扫描的操作，以确定目标组分的检测波长。操作，以确定目标组分的检测波长。（4）首先应优先选用被测定组分的最大吸收波长，其）首先应优先选用被测定组分的最大吸收波长，其次是特征波长，再者是流动相在该波长的吸收不应对次是特征波长，再者是流动相在该波长的吸收不应对被测定组分有干扰。被测定组分有干扰。某片剂，主药在某片剂，主药在220nm、254nm下均有较强吸收，下均有较强吸收，254nm吸收值约比吸收值约比220nm大一倍，含量测定采用大一倍，含量测定采用254nm，现想对该药物进行有关物质检查，波长初步选择为现想对该药物进行有关物质检查，波长初步

20、选择为254nm，经查国内外相关文献，并无该药品的有关物质，经查国内外相关文献，并无该药品的有关物质检查报道，我们想在质量研究中增加在不同波长下考察检查报道，我们想在质量研究中增加在不同波长下考察有关物质的大小试验。有关物质的大小试验。 现分别采用现分别采用220nm和和254nm进行进行同一份样品进行有关物质检测，大致现象为同一份样品进行有关物质检测，大致现象为:(1)220nm：杂质峰面积明显增大，主峰峰面积明显减小，故归一化杂质峰面积明显增大，主峰峰面积明显减小，故归一化法杂质明显增大，总杂质约法杂质明显增大，总杂质约1.5%，新增，新增2个杂质，共个杂质，共5个个杂质；杂质；(2)25

21、4nm：杂质峰面积小，主峰面积大，归一化：杂质峰面积小，主峰面积大，归一化法总杂质约法总杂质约0.3%，共，共3个杂质；试问，在这种情况下，个杂质；试问，在这种情况下，该如何合理的对比杂质大小、个数？该如何合理的对比杂质大小、个数？ 专属性试验专属性试验 （specificity） 指有其指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时能力。是指该法用

22、于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。相互干扰程度的度量。 为验证杂质分析方法的专属性，对于原料药，可根据其合成工艺，采用各步反应的中间体（尤其是后几步反应的中间体）、立体异构体、粗品、重结晶母液等作为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求，从而验证方法对工艺杂质的分离能力 为了考察方法能否有效检测出原料药或制剂中的降解产物，还可根据药物的化学结构特点、制剂的处方与工艺、储存条件等选用合适的酸、碱、光、热、氧化反应等加速破坏性试验来验证分析方法的专属性，必要时可采用二极管阵列检测器、质谱检测器等检测峰的纯度。 强制降解试验对于未知杂质的分离度考察是非常必

23、要的，其目的主要是提供关于杂质（特别是降解物）与主成分的分离情况、样品稳定性及降解途径等重要信息。在试验过程中，应注意破坏性试验要适度，应着重考察敏感条件。检测限与定量限检测限与定量限 检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，是检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，是反映分析方法灵敏度的一个重要指标；最低检测限不得大反映分析方法灵敏度的一个重要指标；最低检测限不得大于该杂质的报告限度，以保证检出需控制的杂质。于该杂质的报告限度，以保证检出需控制的杂质。 测定方法：取待测物质对照品适量，加流动相配制成一点测定方法：取待测物质对照品适量，加流动相配制成一点浓度的对照品溶液，按倍倍

24、稀释法，以信噪比为浓度的对照品溶液，按倍倍稀释法，以信噪比为3：1时相时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。同时将信噪比为应的浓度或注入仪器的量确定检测限。同时将信噪比为3：1的样品溶液进样的样品溶液进样6针，以峰面积计算相对标准偏差。针，以峰面积计算相对标准偏差。判断结果：最小检测限浓度下样品峰面积的相对标准偏差判断结果：最小检测限浓度下样品峰面积的相对标准偏差应应20%，以最小检测限来确定供试品溶液配制的浓度作为，以最小检测限来确定供试品溶液配制的浓度作为依据。依据。 最小峰面积最小峰面积 定量限 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示

25、。定量限定量限是指被测杂质能够被定量测定的最低量。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。杂质定量试验，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确测出。 测定方法：取待测物质对照品适量，加流动相配制成一点浓度的对照品溶液，按倍倍稀释法，以信噪比为10：1时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。同时将信噪比为10：1的样品溶液进样6针，以峰面积计算相对标准偏差。判断结果：定量限浓度下样品峰面积的相对标准偏差应10% 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10 1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定。 系

26、统适用性系统适用性 系统适用性试验主要是考察主成分与杂质的分离情况以及主峰参数信息,如理论塔板数、拖尾因子、分离度等，均应符合测定要求。 精密度试验精密度试验 （precision） 精密精密度是指在规定条件下，同一个均匀样度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（接近程度。用偏差（d）、标准偏差）、标准偏差(SD)、相对标准偏差、相对标准偏差(RSD)（变异系数，（变异系数，CV）表示。）表示。 测定方法：取一定浓度的杂质对照品溶液，连续测定次数至少6次，以峰面积的测定结果计算相对标准偏差，考察仪器测定的。 1. 重复性

27、重复性 在相同条件下，由同一个在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；把被分析人员测定所得结果的精密度；把被测物浓度当作测物浓度当作100%，至少测，至少测6次进行评次进行评价。测定方法价。测定方法:按含量测定的方法，分别按含量测定的方法，分别平行称取平行称取6份样品，按外标法测定杂质的份样品，按外标法测定杂质的含量，以杂质含量测定结果计算相对标含量，以杂质含量测定结果计算相对标准偏差。准偏差。 2. 中间精密度中间精密度 同一实验室，不同时同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。的精密度。考察随机变动

28、因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备不同设备 3. 重现性重现性 不同实验室，不同分析人不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。性结果均应记载在起草说明中。 溶液稳定性试验溶液稳定性试验 考察样品在配制溶剂中的杂质与主峰的稳定性，取一定浓度的样品溶液，分别于不同时间

29、取样测定杂质与主峰的峰面积，以相对标准偏差来表示不同时间测定结果的稳定性。判断结果：结果RSD,%2.0%，在测定时间内的样品溶液稳定性良好。 耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时，结指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。在正常情况下实验结果重现性的尺度。 分别考察流动相比例变化5、流动相pH值变化0.2、柱温变化5、检测波长变化5nm、流速相对值变化20以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受

30、的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离各条件下的杂质含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在0.1以内。系统适用性配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，理论塔板数应符合质量标准的规定。溶液稳定性按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4）中，在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为：主成分的含量变化的绝

31、对值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在0.1以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。准确度准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100AMR 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100APMR 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同

32、浓度样品各测三次。 杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。熟的方法进行比较。（三）有机杂质的定量方法（三）有机杂质的定量方法 有机杂质的检测一般多采用HPLC法，有时也采用TLC、GC等其它方法。 如采用HPLC法，须采用峰面积法，具体定量方法有外标法（杂质对照品法）、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法、峰面积归一化法。 有关物质中包括已知杂质和未知杂质。 对于

33、TLC法，通常采用杂质对照品法和主成分自身对照法进行检控制，后者仅限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色一致的情况下使用。 外标法（杂质对照品法）外标法（杂质对照品法）外标法定量比较准确，采用外标法进行测定时，应进行相应的方法学研究。 A 检测波长的选择检测波长的选择 检测波长的选择测定方法参照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版二部附录A）进行测定，或采用HPLC法，DAD检测器进行测定。同时考察辅料干扰等。B 标准曲线标准曲线 线性关系应在设计的测定范围内测定。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备5个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数

34、作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。 C 精密度试验精密度试验 D重复性试验重复性试验 E 中间精密度中间精密度 F 回收率试验回收率试验 G 杂质的检测限杂质的检测限 H 杂质的定量限杂质的定量限 加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法 采用加校正因子自身对照法应进行相应杂质的校正因子的测定，仅适用于已知杂质的控制，如果校正因子在0.25.0的范围内也可用加校正因子的主成分自身对照法。校正因子测定的要求校正因子测定的要求 A 测定校正因子的各杂质与主成分的标准物质（对照品），应符合标准物质（对照品）的要求。B 确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致

35、，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定。C 要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。校正因子的测定：校正因子的测定：A 单浓度点测定：制备适当浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液，分别进样测定，待测样品的绝对校正因子与参照样品绝对校正因子的比，得到校正因子。B 多浓度点测定：制备适当的高、中、低三水平浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样测定

36、，同法进行分别各点计算，求平均值，计算RSD，得到校正因子。标准曲线法测定：精密称取杂质对照品和主成分对照品，分别制备系列溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样后，按最小二乘法以进样量对响应值（峰面积等）进行线性回归，求得两条标准曲线，两曲线斜率之比即为校正因子。 不加校正因子的主成分自身对照法（自身对照不加校正因子的主成分自身对照法（自身对照法）法） 不加校正因子的主成分自身对照法（自身对照法）是杂质与主成分的响应因子基本相同（校正因子在0.91.1）。一般情况下，如杂质与主成分的分子结构相似，其响应因子差别不会太大。 测定方法：称取供试品样品适量，加适当溶剂配制成一定浓度的供试品溶液；精密

37、量取供试品溶液稀释到一定浓度，一般1%或2%，作为对照溶液；量取供试品溶液中的杂质峰面积与对照溶液峰面积相比乘以稀释浓度即为供试品溶液中的杂质的含量。 峰面积归一化法峰面积归一化法 峰面积归一化法测定有关物质简便快捷，但因各杂质与主成分响应因子不一定相同、杂质量与主成分量不一定在同一线性范围内、仪器对微量杂质和常量主成分的积分精度及准确度不相同等因素，所以在质量标准中一般不采用峰面积归一化法计算有关物质。 取本品适量，精密称定，以无水取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每乙醇为溶剂，配制成每1ml含含2mg的溶的溶液（液（1）与每）与每1ml含含0.04mg的溶液（的溶液（2），），

38、用含量测定项下的方法和溶液用含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取，取10l注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（记录仪的满量程。再分别取溶液（1） 和溶液（和溶液（2）各）各10l，进样。记录至，进样。记录至主成分峰保留时间的主成分峰保留时间的2倍。溶液（倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过显示的杂质峰数不得超过4个，各杂个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的）主峰面积的1/2和和3/4。供试溶液：溶液（供试溶液：溶液（1）2mg/ml对照溶液

39、：溶液（对照溶液：溶液（2）0.04mg/ml 头孢他啶聚合物的测定头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10G-10（ 40120m 40120m ） 流动相流动相A A：3.5%3.5%硫酸铵的硫酸铵的0.01mol/L0.01mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 流动相流动相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品对照品溶液：头孢他啶对照品 100g/ml100g/ml1 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖20002000、流动相、

40、流动相A A测定；重测定；重复性用对照品溶液、流动相复性用对照品溶液、流动相B B测定。测定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面积的，峰面积的RSDRSD应小于应小于5.0%5.0%。2 2）测定方法）测定方法 进样供试液，用流动相进样供试液，用流动相A A；进样对照液，；进样对照液，用流动相用流动相B B。以外标法计算，含头孢他啶聚合。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过物以头孢他啶计不得超过0.3%0.3%。n 影响药物制剂稳定性的外界因素及解决方法药物制剂的稳定性u 温度温度 u 光线光线 u 空气空气u 湿度与水分湿度与水分u

41、 金属离子金属离子u 包装材料包装材料可采取选用较高纯度的原辅料制备中不使用金属器具加入金属螯合剂等附加剂防止光、热、水汽和空气等因素的影响避免包装材料与药物制剂间的相互作用原料药物水分含量一般控制在1%左右u 空气空气 防止氧化的根本措施是除去氧气：通入惰性气体以置换其中的氧固体药物制剂可采用真空包装加入抗氧剂也是经常使用的方法抗氧剂协同剂u 光线光线 光敏感的药物制剂在制备及贮存中应避光， 在处方中加入抗氧剂 在包衣材料中加入遮光剂使用棕色玻璃瓶或容器内衬垫黑纸避光u 稳定性试验包括u 用于进行稳定性实验的原料药供试品及药物制剂供试品。 u 供试品的质量标准u 所用供试品的包装 u 采用的

42、药物分析与有关物质的检查方法u 从放大试验转入大规模生产时，对最初通过生产验证的三批大规模生产的产品仍需进行稳定性试验。n 药物稳定性试验的基本要求 影响因素试验：用一批原料药进行 加速试验：用三批供试品进行 长期试验：用三批供试品进行二、稳定性研究的试验方法二、稳定性研究的试验方法 根据研究目的不同，稳定性研究内容可分为影响因素试验、加速试验、长期试验等。 （一）影响因素试验（一）影响因素试验 影响因素试验是在剧烈条件下进行的，目的是了解影响稳定性的因素及可能的降解途径和降解产物，为制剂工艺筛选、包装材料和容器的选择、贮存条件的确定等提供依据。同时为加速试验和长期试验应采用的温度和湿度等条件

43、提供依据，还可为分析方法的选择提供依据。 影响因素试验一般包括高温、高湿、光照试验。一般将原料药供试品置适宜的容器中（如称量瓶或培养皿），摊成5mm厚的薄层，疏松原料药摊成10mm厚的薄层进行试验。对于口服固体制剂产品，一般采用除去内包装的最小制剂单位，分散为单层置适宜的条件下进行。如试验结果不明确，应加试两个批号的样品。 1.1 高温试验 供试品置密封洁净容器中，在60条件下放置10天，于第5天和第10天取样，检测有关指标。如供试品发生显著变化，则在40下同法进行试验。如60无显著变化，则不必进行40试验。 1.2 高湿试验 供试品置恒湿密闭容器中，于25、RH905条件下放置10天，在第5

44、天和第10天取样检测。检测项目应包括吸湿增重项。若吸湿增重5%以上，则应在25、RH755下同法进行试验；若吸湿增重5%以下，且其他考察项目符合要求，则不再进行此项试验。液体制剂可不进行此项试验。 恒湿条件可采用恒温恒湿箱或通过在密闭容器下部放置饱和盐溶液来实现。根据不同的湿度要求，选择NaCl饱和溶液（15.5-60，RH751）或KNO3饱和溶液（25，RH92.5）。 1.3 光照试验 供试品置光照箱或其它适宜的光照容器内，于照度4500Lx500Lx条件下放置10天，在第5天和第10天取样检测。 以上为影响因素稳定性研究的一般要求。根据药品的性质必要时可以设计其他试验，如考察pH值、氧

45、、低温、冻融等因素对药品稳定性的影响。对于需要溶解或者稀释后使用的药品，如注射用无菌粉末、溶液片剂等，还应考察临床使用条件下的稳定性。 （二）加速试验（二）加速试验 加速试验是在超常条件下进行的，目的是通过加快市售包装中药品的化学或物理变化速度来考察药品稳定性，对药品在运输、保存过程中可能会遇到的短暂的超常条件下的稳定性进行模拟考察，并初步预测样品在规定的贮存条件下的长期稳定性。 加速试验一般取拟上市包装的三批样品进行，建议在比长期试验放置温度至少高15的条件下进行。一般可选择402、RH755条件下进行6个月试验。在试验期间第0、1、2、3、6个月末取样检测考察指标。如在6个月内供试品经检测

46、不符合质量标准要求或发生显著变化，则应在中间条件302、RH655同法进行6个月试验。 在对采用不可透过性包装的含有水性介质的制剂，如溶液剂、混悬剂、乳剂、注射液等的稳定性研究中可不要求相对湿度。对采用半通透性的容器包装的药物制剂，如塑料软袋装注射液、塑料瓶装滴眼液、滴鼻液等，加速试验应在402、RH205的条件下进行。 乳剂、混悬剂、软膏剂、糊剂、凝胶剂、眼膏剂、栓剂、气雾剂、泡腾片及泡腾颗粒等制剂宜直接采用302、RH655的条件进行试验。 对温度敏感药物（需在冰箱中4-8冷藏保存）的加速试验可在252、RH605条件下同法进行。需要冷冻保存的药品可不进行加速试验。 （三）长期试验（三）长

47、期试验 长期试验是在上市药品规定的贮存条件下进行，目的是考察药品在运输、保存、使用过程中的稳定性，能直接地反映药品稳定性特征，是确定有效期和贮存条件的最终依据。 取三批样品在252、RH6010条件进行试验，取样时间点在第一年一般为每3个月末一次，第二年每6个月末一次，以后每年末一次。 对温度敏感药物的长期试验可在62条件下进行试验；对采用半通透性的容器包装的药物制剂，长期试验应在252、RH4010的条件下进行，取样时间同上。u 稳定性重点考察项目稳定性重点考察项目剂型剂型稳定性重点考察项目稳定性重点考察项目原料药原料药性状、熔点、含量、有关物质、吸湿性以及根据品种性性状、熔点、含量、有关物质、吸湿性以及根据品种性质选定的考察项目质选定的考察项目片剂片剂性状、含量、有关物质、崩解时限或溶