samjimmy之色谱研究

1、郑州大学现代远程教育现代色谱技术课程考核要求说明：本课程考核形式为撰写课程论文,完成后请保存为WORD 2003格 式的文档，登陆学习平台提交，并检查和确认提交成功（能够下载，并且内容无 误即为提交成功1一. 论文撰写要求1论文摘要部分应包括：目的、方法、结果和结论四个发明，大约200字左右，正文部分约3000字。2. 3-6个关键词3. 参考文献不少于20篇。二. 参考题目1. 手性固定相研究进展2. 气相色谱法在有机农药残留物分析中的应用研究3. 液相色谱在中药分析中的应用4. 超临界流体色谱在中药有效成分提取中的应用研究5. 薄层色谱在杂质检査中的应用6. 反相液相色谱在药物质量控制中的

2、应用研究7. 正相髙效液相色谱的应用研究8. 环糊精类固定相拆分手性药物的研究进展9. 毛细管电泳法在生物大分子中的研究进展10. 手性药物的毛细管电泳法拆分方法研究手性固定相研究进展摘要：对映体的拆分曾被认为是相当困难及复杂的实验技术，随着20世纪70年 代手性色谱的兴起和迅速发展，该难题得以逐步解决,尤其是近儿年，药物对映 体的分析已成为药学领域的研究热点。将手性化合物键合到固定相表面后川I于 样品中的对映体与键合的子性分子形成非对映异构体络合物的结合能力的差异 而达到拆分目的,该固定相即被称为手性固定相(Chiral stationary phase,CSP)o ill手 性固定相液相色

3、谱分离测定对映体已成为对映体分离发展最为迅速的领域2。LI前,采用高效液相色谱法(HPLC)分离手性化合物取得了显著进展,已广泛应用于 众多领域,并已制备出大量用于HPLC的CSP。本文拟就口前应用较广泛的儿类CSP 作一简要介绍。摘要：手性色谱、手性固定相、进展、领域1、多糖类衍生物CSP多糖类衍生物包括纤维素衍生物和直链淀粉衍生物。纤维素自身具有手性识 别能力，但不能直接做固定相，然而其衍生物作为CSP具有较高的手性识别能 力，能拆分大量的对映体。直链淀粉与纤维素同样系山d-葡萄糖单元构成，但直 链淀粉因在其d -葡萄糖单元a键上存在1个螺旋结构而致使其结构更有序。同 时，上述2种衍生物的

4、手性识别能力存在较大差异，可能是因葡萄糖单元构象不 同、结构有序性存在差异所致。U前，其广泛用于HPLC,可分离众多药物对映体。Miyazawa T等3研究用纤维素一三(3,5 -二甲基苯基氨基甲酸 酯)(CDMPC) CSP对非蛋口氨酰基酯类的对映体化合物进行拆分，结果显示，其对 儿乎所有的烷基酯类和苯屮基酯类对映体化合物的拆分性优于屮基酯类，而对 B -氨基酸衍生物的拆分性不及a -氨基酸衍生物。In WK等4制备了涂 钳CDMPC(CDMPC-Zirconia) CSP并与CDMPC比较”发现其可增强分离对映体的 识别能力。Kubota T等5对CDMPC CSP进行了研究，并在HPLC

5、上实现了对乙烯 基聚合物的拆分，结果显示，其识别能力较好，但稳定性差。李凌云等6 研究 在CDMPC和直链淀粉一三(3,5 二屮基苯基氨基甲酸酯)构成的CSP上采用 HPLC正相条件，分离系列含磷手性化合物，并考察了流动相中有机改性剂的种类 及浓度对手性分离的影响。2、大环抗生素类CSP大环抗生素类物质的分子结构具有多种官能团和不对称中心的特点,其糖肽 型还含有孔穴结构，可与被分离物质产生多种作用,如疏水作用、包合作用、氢键 形成、立体排斥、范徳华相互作用等。在大环抗生素类分子中，除含疏水部位外, 通常还具有亲水基和可离子化的基团，因而其具有良好的水洛性。U前,用于对 映体分离的大环类抗生素根

6、据其结构特点可分为糖肽类柄状霉菌素类、多肽与 氨基糖昔类3类，山此提示抗生素类CSP具有应用范围广、柱容量较高等特点。张鹏等7采用细径去中万古霉素手性柱对布洛芬进行拆分，并对其机制进行了 初步探讨。结果显示，选用合适的硅烷化试剂是去中万古霉素能否与硅胶键合的 关键。研究者选用了 2种硅烷化试剂丫-氯丙基三乙氧基硅烷和Y-氨醛三乙氧 基硅烷合成去甲万古霉素CSP。结果发现，在该实验条件下，前者不具备手性拆分 能力,故采用丫 -氨醛三乙氧基硅烷作为CSP的硅烷化试剂，合成后装入细径柱即 可拆分布洛芬。去甲万古霉素键合量对异构体的拆分起着重要作用，为获得尽可 能大的键合量，还需对键合反应的各种条件进

7、行优化选择。李凌云等8采用 HPLC极性有机分离模式，在万古毒素CSP上，对阿替洛尔、嚎利洛尔、卡替洛尔、 沙丁胺醇、尼卡地平、异丙嗪6种药物对映体进行了手性分离。3、分子烙印CSP分子烙印技术是一种在模拟生物体内抗原与抗体相互作用时利用“锁匙”原理 的基础上发展起来的新技术，利用该技术制得的分子烙印聚合物对烙印分子具有 “预定”选择性，解决了针对具体手性分子的CSP设计问题，为其设计提供了崭 新、有效的解决方法，在HPLC手性分离和制备方面受到人们的广泛关注。王进 防等9考察了温度对分子烙印CSP分离的影响，计算了手性分离过程中的热力 学参数。结果显示，分子烙印CSP的分离过程为焙控制过程。

8、随着温度的升高,样 品的容量因子降低,手性选择因子a值减小。样品与分子烙印CSP的作用力包 括非特异和特异作用力，只有特异作用力的差值才是产生手性分离的本质。分子 烙印产生的空穴对热力学参数有较大影响，只有烙印分子与其空穴的匹配性达 到最好，才使烙印空穴对烙印分子的结合在能量上和构型上均达到有利状态。4、环糊精类CSP环糊精(Cyclodextrin ,CD)类最初应用于薄层色谱固定相中,对HPLC而言,CD具 有较好的光学纯度且不干扰紫外光谱对化合物的检测，因此可将其键合到合适 的载体上制备CSP，也可用于流动相添加剂。U前,采用环糊精类作为CSP拆分对 映体的研究已有报道10 。He H等

9、11 釆用0 -环糊精类CSP成功分离了对映体 去屮羟安定(Oxazepam)和氯羟安定(Lorazepam)。阮源萍等12 采用自行研制的 2,6 一二一0 烷基一B 环糊精涂渍CSP ,以反相色谱模式研究了联蔡酚类 对映异构体的拆分。该实验采用2,6二一0戊基一0环糊精涂渍 Symmetry C8柱，屮醇-水(体积比60 : 40)为流动相,联蔡酚对映体的容量因子分 别为9111和10192 ,分离选择性为1119，分离度为1155联蔡酚2 一屮氧基和联 蔡酚3,3二甲酸对映体在2,6二一0戊基一B环糊精涂渍柱上也得到 较好的拆分,出峰顺序均为S构型在前,R构型在后。环糊精疏水空腔对蔡环

10、的包络作用和环糊精端口疑基与蔡疑基的氢键作用可能是手性拆分的主要机 制。5、蛋白质CSP将a 1 -酸性糖蛋白化学键合到微粒硅胶上制备得到蛋口质CSPloal-酸性糖 蛋口是天然蛋口质，分子中具有部分特殊的结合位点，对药物对映体具有高度立 体选择性，故可固化为CSPo蛋白质是一类复杂的高分子聚合物，所含亚单位 L -氨基酸具有手性特异性，能特异性地键合小分子,对手性分子具有很强的识别 能力，因其独到的手性选择性而备受人们青睐，但同时也存在柱效和柱容量低、柱 强度差等缺点。张哲峰等13研究盐酸西替利嗪对映体在蛋口质及纤维素衍生 物CSP上的保留行为并优化分离条件，结果显示，该法准确、灵敏、专属性

11、好。 该实验采用蛋白柱为色谱柱，柱温25 C,检测波长均为230nm ,将聚a-葡糖昔 酯、al-酸性糖蛋白及卵粘蛋白作为CSP时，分别以正己烷-异丙醇-乙醇-三氟 乙酸(430 : 45 : 25 ：1,V/V)、乙W-lOmmol / L磷酸盐缓冲液(NaOH调至 p H710) (4 : 96 ,V/ V)及乙月青-20mmol / L磷酸 二氢钾(三乙胺调至 p H710) (1217 : 8713,V/V)为流动相。静电作用是影响保留的因素之一,可通过 调节流动相的pH值优化对映体分离，由于溶质在蛋口类CSP中的传质较慢，所 以在一定范围内降低流速，有利于提高柱效，改善分离状况。6、

12、聚合物CSPU前部分常用的CSP包括环糊精类、氨基酸类等，多山小分子物质制成，因其 易受流动相极性，酸、碱性及温度等因素的影响，所以能分离的药物对映体有 限,且分离效果通常不尽人意。而另外一部分聚合物CSP,如聚硅氧烷类、聚多糖 类等，则在较大程度上克服了上述不足，并能良好拆分许多小分子CSP无法分离 或分离效果差的对映体14 o聚合物CSP能拆分大量的对映体，包括轴向和平面 非对称化合物、含金属化合物、含手性硫和磷原子的化合物及其衍生物。由于 外消旋体主要差异仅在于其立体化学构型，因此HPLC的聚合物CSP对其手性识 别能力也直接与对映体自身的儿何构型有关，对映体除了与聚合物CSP形成不稳

13、定的复合物外,CSP的手性空间也是其重要因素，此外，操作温度等多种因素均可 对手性识别能力产生极大影响15 。Okamoto Y等16 曾研究采用3 ,5 一二中基苯基氨基屮酸酯为CSP ,对510种 旋光物质进行了拆分，并认为约60 %的旋光物质可釆用3 ,5 -二甲基苯基氨基 屮酸酯进行拆分。7、配体交换型CSP配体交换型CSP与手性配体流动相的拆分机制相同，均为手性配体键合到固 定相基质成为CSPo配体交换型CSP主要用于拆分氨基酸17 o 口前，该色谱模 式已成为拆分未衍生化DL -氨基酸的最简便且有效的方法。其可分为CSP配体交 换色谱法(CSP - L EC)和手性流动相配体交换色

14、谱法(CMP - L EC),前者因具有使 用方便、分离样品种类多的优点备受人们关注。OkuboS等18研究利用配体交 换型CSP CRX453 B通过HPLC拆分L -乳酸和D-乳酸，结果表明”其可对DL -乳酸 进行良好分离。黃晓佳19等将P (3 ,4 -环氧环己基)乙基三屮氧基硅烷与硅胶 反应，得到环氧化硅胶中间体，随后其与L-异亮氨酸反应，再与铜离子进行配 位，最后得到1种新型配体交换CSP。该实验采用DL-氨基酸19 对该CSP进行 了色谱评价，同时探讨了其分离机制20。8、结语CSP具有较高的手性拆分能力和良好的耐用性，可对较多药物对映体进行快 速、高效的分离,具有广泛的临床应用

15、前景。手性识别能力除与对映体自身结构 特征有关以外，还与溶液pH值、操作温度等有关。目前，虽然CSP还存有一些不 足，但笔者认为，通过对CSP结构和手性拆分能力的关系硏究，人们必将寻找到更 为高效的CSP,从而推动药物对映体分析工作的深入开展。CSP的研究为拓宽 HPLC的应用范围奠定了基础，并推动其发展。参考文献:1 孙毓庆主编1现代色谱法及其在医药中的应用M| 1北京:人民卫生出版社,1998:1112 邹汉法编著1高效液相色谱法M 1北京:科学出版社，1998 :1113 Miyazawa T .Shindo Y .Yamada T1 Separation of enantiomers

16、of n - p rotectcd non - protein a mino acid esters by chiral high - performance liquid chromatography| J 1 Chromatographi a (J ap an) ,2004 ,60 (78):41914 In WK Jong KR ,Sung DA, et al 1 Comparison of chiral separation on amylose and cellulose t ris (3 ,5 imethylp henylcarbamate) oated zirconia in H

17、PLCJ 1B ul 1 Korean Chem S oc, 2003 ,24 (2) :3915 Kubota T. Yamamoto C .Okamoto Y1 Preparation of chiral stationary p hase for HPLC based on immobi2 lization of cellulose 3,5 imethylphenylcarbamate derivatives on silica gel J 1 C hi ral i t y 12003 35(1):7716】李凌云，王立新，叶勇，等1含磷手性化合物在多聚糖类手性固左相上的手性分离|J 1

18、 分析实验室,2004,23 (5):1417张鹏,贺浪冲1万古签素手性固泄相的制备及布洛芬在其细径柱上的拆分机理探讨 J 1药物分析杂志,1998 , 18 (增刊):29618 李凌云，钱宝英，高如瑜，等1万古霊素手性固定相分离几种药物对映体J 1分析测试 学报,2003 ,22 (6) :8319王进防，周良模,刘学良，等1分子烙印手性固左相分离过程热力学研究J高等学校化学学报,2000 ,21 (6):930110 BielejewskaA Duszczyk K .Kwaterczak A, et al 1 Comparative study on t heenantiomeric s

19、e paration of 1 ,Tbinaphthyl2,2一 ialkylhydrogenphosp hate and 1 ,1一 inaphthyl2 n ap hthol by liquid chromatogra2 phy and capillary elect rophoresis using single and com2 bincd ch iral selector systemsJ 1J Chromatogr A ,2002,977 (2) :225111 He H . Liu Y Sun C , et al 1 Effect of temperature on enantiomer separation of oxazepam and lorazepam by high performance liquid chromatography on a p_ y2 clodextrinderivatized - bonde d chiral stationar y p hase fJ 1J Chromatog r S ci ,2004 42 (2) :62112 阮源萍，张雪曼,陈安齐12,6二一0烷基一环糊精涂渍手性固泄相分离联荼酚 类对映异构体J 1厦门大学学报(自然科学版),2004 .43 (3) :364113