总酚含量测定之欧阳学创编

1、欧阳学创编7总酚含量测定参考韩富根的方 法，略有改动，时间:2021.03. 03创作：欧阳学7.1样品处理：取鲜叶0.5g,加3ml 95%乙醇研磨成匀浆 状，再加5ml 95%乙醇过滤，用95%乙醇定容至25ml。 以儿茶酚作标准曲线。7.2样品测定：取2 ml彳寺测液于10ml离心管中，再加入2 ml福林试剂，揺匀，3min后加入10%碳酸钠2 ml振荡。 静宣1 h后700 nm 处比色测定，以2ml蒸锢水代替待测液 作为空白。根据标准曲线计算总酚含量。【七种与小麦近 缘的野生植物对禾谷缢管好抗性的生化机制】7.3试剂配制 福林试剂：将铸酸钠25g、璘钿酸5g,磷酸12. 5ml同蒸馆

2、水188ml一道回流煮沸2h,冷却后用蒸锢水定容至1L。 10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用o酚标准溶液：先酉己制成100ml含儿茶酚60mg的溶液，再依次配制成100ml中含儿茶酚不同浓度0.5 1.0 1.5 2.0mg（临用时再配）。1 Omg/100ml为母液标准系列的配宣总体积ml666666福林试剂ml22222210%Na2CO3ml222222邻苯二酚ml00.10.20.30.40.5蒸馆水ml21.91.81.71.61.5欧阳学创编浓度 ug/ml |0|10|20|30|40|508单宁的测定 参考范璐的方法，

3、干样品去除杂质，将样品粉碎并全部通过1.0mm孔径的 筛网。 楙确称取试样1 g于100ml三甬瓶中，加75 %二甲基甲酰 胺溶液50ml,加塞，室温振荡提取60min, 双层滤纸过 滤，滤液备用。 准确吸取1.0ml提取液于试管中，准确加入6.0ml水、 1.0ml8g/L (35ml/L)氨溶液，揺匀，自加氨溶液后计时， 1 Omin后以525nm为测定波长，水作空白测定样液的吸光 度值。 准确吸取1.0ml提取液于试管中，准确加入5.0ml水、 1.0ml(3.5g/L)柠檬酸铁铁溶液、1.0ml氨溶液，摇匀，自加 氨溶液后计时，lOmin后，以525nm为测定波长，水作空 白，测定样液

4、的吸光度值。两次测得吸光度值之差为样品 中单宁的吸光度值。 配制单宁酸含量为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml标 准系列，分别吸取标准溶液1.0ml, 准确加入5.0m 水、 1.0ml柠檬酸铁铁溶液、1.0ml氨溶液，揺匀，自加氨溶液 后计时，lOmin后以525nm 为测定波长，水作空白测定标 准溶液的吸光度值9可溶性蛋白质的测定9.1样品处理：小麦分葉初期，称取各供试品种剪碎叶片 0. 5g,加入2ml蒸锢水研磨后倒入10ml离心管中，再向残 渣中加入6ml蒸锢水分两次冲洗，洗3条液转入离丿管，放 宣半小时，揺匀悬浮后离心20分钟，取上清液，然后定容 10ml容量瓶。9

5、.2样品测定：测定时，取上清液O.lml力口蒸徭水0.9ml,加 5ml考马斯亮蓝G250蛋白质试剂混匀，显色后在595nm 波长下测定光密度。用牛血清蛋白绘制标准曲线。蛋白质 含量测定公式：样品中蛋白质含量(mg / &)=查得的蛋白质 含量弹令)x提取液，电体积(m 1) /样品鲜重(g)x测定时取用提 取液体积(ml)。9.3标曲的制备：01 000pg/mL标准曲线的制作：另取6欧阳学创编支10mL具塞试管，按农取样。盖塞后，将各试管中溶液 纵向倒转混合，放宣2min后用1cm光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nmf 做出蛋白质浓度为01 000聘/ mL的标准曲线。表2高浓度标准曲 线制作管号1234561000ug/ml 标准蛋白 液（ml）00.20.40.60.810.蒸憾水（ml）10.80.60.40.21.0考马斯亮蓝G-25O试剂（ml）555555蛋白质含M （ug）02004006008001000OD595nm试剂配制：（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称 取lOOmg牛血清白蛋白，溶于lOOmL蒸饷水中，即为1OOOng / mL的原液。（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G250的 配制：称取lOOmg考马斯亮蓝G-