血片制作与染色

1、疟原虫血片的制作与染色疟原虫血片的制作与染色河北省疾病预防控制中心河北省疾病预防控制中心寄生虫病防治所寄生虫病防治所甄素娟甄素娟主要内容主要内容 厚薄血膜的制作厚薄血膜的制作 制作血膜的注意事项制作血膜的注意事项 吉氏染色液的配制吉氏染色液的配制 血膜的染色血膜的染色 影响染色的因素影响染色的因素 病例标本采集病例标本采集 考试内容考试内容 考核评分表考核评分表血片制作血片制作薄血膜薄血膜: :借推片将血液薄薄地涂在载玻片上，使每借推片将血液薄薄地涂在载玻片上，使每个血细胞平铺。个血细胞平铺。厚血膜厚血膜: :是把较多的血液涂成圆形，血膜中血细胞是把较多的血液涂成圆形，血膜中血细胞重叠，原虫较

2、为集中。重叠，原虫较为集中。采血时间采血时间 间日疟和三日疟可在发作后任何时间采血，但间日疟和三日疟可在发作后任何时间采血，但在发作后在发作后6 6 8 8小时内最佳；小时内最佳； 恶性疟应在发作开始后不久作血检。恶性疟应在发作开始后不久作血检。 患者在开始发作时血检可能查不到疟原虫，应患者在开始发作时血检可能查不到疟原虫，应在第二次发作时再作血检在第二次发作时再作血检, ,以免漏检。以免漏检。取血部位取血部位 以耳垂较为合适，也可在手以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，先用指末端采血，先用75%75%酒精酒精棉球消毒取血部位（冬季用棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行手捻动耳垂使

3、其充血后再行消毒），待干后，以左手拇消毒），待干后，以左手拇指和食指夹住被检者手指尖指和食指夹住被检者手指尖稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，右手持消毒刺针，迅速刺入右手持消毒刺针，迅速刺入取血部位取血部位1 12 2毫米深，然后毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。中指协同挤出血滴。将玻片分为将玻片分为6 6等分，第等分，第1 1、2 2格备贴标签格备贴标签 及编号用；厚血膜涂在第及编号用；厚血膜涂在第3 3格中央，薄格中央，薄 血膜涂在第血膜涂在第4 4格前缘至第格前缘至第6 6格中部。格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜作为

4、标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各各1个。个。血膜的位置血膜的位置 薄血膜：薄血膜：取洁净的载玻片取洁净的载玻片2 2张，张，1 1张做载片，以左手拇指，张做载片，以左手拇指，食指夹持载玻片两端，用另食指夹持载玻片两端，用另一张载玻片（最好为磨口边一张载玻片（最好为磨口边缘）做推片，用右手大拇指缘）做推片，用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部用和食指夹持推片侧缘中部用推片一端边缘的中点从取血推片一端边缘的中点从取血部分取约部分取约1 1l l的血量（相当于的血量（相当于1/41/4火柴头大小），使血滴与火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成平置的载玻片接触，并形成25253535夹角，待血

5、液向两夹角，待血液向两侧扩展约侧扩展约2 2厘米长度时，均厘米长度时，均匀而迅速地向左推出约匀而迅速地向左推出约2.52.5厘厘米长舌状血膜。米长舌状血膜。（涂片操作）（涂片操作） 厚血膜厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取用推片的一角，从取血部位刮取4 4 5 5l l血血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转接触，再由里向外一个方向旋转，转4 4 6 6圈，涂圈，涂成直径成直径0.8 0.8 1 1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。匀，过厚易

6、于脱落，过薄达不到检出率的要求。 厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见5 5 10 10个白细个白细胞为宜。胞为宜。 薄血膜薄血膜 厚血膜厚血膜 标记处标记处 标准的血涂片标准的血涂片厚薄血膜的标准厚薄血膜的标准 厚血膜血量适宜，不宜过多或过少厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 薄薄血膜平整血膜平整, ,无皱折和空泡无皱折和空泡. .红细胞单层排列红细胞单层排列血膜编号血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防于玻片面上写上受检者的号码，以防出错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血出错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜

7、中写上受检者的个人编号。编号由膜中写上受检者的个人编号。编号由省里统一，具体各县市区的编码见技省里统一，具体各县市区的编码见技术手册附件。术手册附件。地市名称（编地市名称（编号）号）县（市、区）名称（编号）县（市、区）名称（编号）血片编号血片编号邯郸市（邯郸市（hdhd）丛台区（丛台区（0101）、邯山区（）、邯山区（0202）、复兴区（）、复兴区（0303）、馆陶县（）、馆陶县（0404）、魏县（）、魏县（0505）、大名县（）、大名县（0606）、曲周县（）、曲周县（0707）、丘县（、丘县（0808）、鸡泽县（）、鸡泽县（0909）、广平县（）、广平县（1010）、肥乡县（）、肥乡县（1

8、111）、磁县（）、磁县（1212）、永年县（）、永年县（1313）、邯郸县（）、邯郸县（1414）、）、峰峰矿区（峰峰矿区（1515）、临漳县（）、临漳县（1616）、武安市（）、武安市（1717）、成安县（）、成安县（1818）、涉县（）、涉县（1919）各县（市、各县（市、区）从区）从xxxx001xxxx001至至xxxx999xxxx999根据工作需根据工作需求分配编号求分配编号区间区间邢台市（邢台市（xtxt）桥东区（桥东区（0101）、桥西区（）、桥西区（0202）、沙河市（）、沙河市（0303）、临城县（）、临城县（0404）、临西县（）、临西县（0505）、隆尧县（）、隆尧县

9、（0606）、内丘县（）、内丘县（0707）、巨鹿县（）、巨鹿县（0808）、任县（）、任县（0909）、宁晋县（）、宁晋县（1010）、邢台县（）、邢台县（1111）、广宗县（）、广宗县（1212）、南宫市（）、南宫市（1313）、柏乡县（）、柏乡县（1414）、南和县（）、南和县（1515）、新河县（）、新河县（1616）、平乡县（）、平乡县（1717）、威县（）、威县（1818）、清河县（）、清河县（1919）石家庄市（石家庄市（sjsj）长安区（长安区（0101）、新华区（）、新华区（0202）、桥东区（）、桥东区（0303）、桥西区（）、桥西区（0404）、裕华区（）、裕华区（050

10、5）、正定县（）、正定县（0606）、井陉县（）、井陉县（0707）、赵县（）、赵县（0808）、赞皇县（）、赞皇县（0909）、平山县（）、平山县（1010）、晋州市（）、晋州市（1111）、新乐市（）、新乐市（1212）、高邑县（）、高邑县（1313）、鹿泉市（）、鹿泉市（1414）、辛集市（）、辛集市（1515）、行唐县（）、行唐县（1616）、藁城市（）、藁城市（1717）、灵寿县（）、灵寿县（1818）、无极县（）、无极县（1919）、井陉矿区（）、井陉矿区（2020）、栾城县）、栾城县（2121）、元氏县（）、元氏县（2222）、深泽县（）、深泽县（2323）衡水市（衡水市（hsh

11、s）桃城区（桃城区（0101）、深州市（）、深州市（0202）、阜城县（）、阜城县（0303）、饶阳市（）、饶阳市（0404）、故城县（）、故城县（0505）、冀州市（）、冀州市（0606）、武强县（）、武强县（0707）、安平县（）、安平县（0808）、枣强县（）、枣强县（0909）、景县（）、景县（1010）、武邑县（）、武邑县（1111）沧州市（沧州市（czcz）运河区（运河区（0101）、新华区（）、新华区（0202）、泊头市（）、泊头市（0303）、海兴县（）、海兴县（0404）、肃宁县（）、肃宁县（0505）、东光县（）、东光县（0606）、青县（）、青县（0707）、吴桥县（、吴

12、桥县（0808）、黄骅市（）、黄骅市（0909）、沧县（）、沧县（1010）、献县（）、献县（1111）、河间市（）、河间市（1212）、任丘市（）、任丘市（1313）、盐山县（）、盐山县（1414）、）、南皮县（南皮县（1515）、孟村县（）、孟村县（1616）保定市（保定市（bdbd）南市区（南市区（0101）、北市区（）、北市区（0202）、新市区（）、新市区（0303）、满城县（）、满城县（0404）、容城县（）、容城县（0505）、定兴县（）、定兴县（0606）、曲阳县（）、曲阳县（0707）、定州市（）、定州市（0808）、安新县（）、安新县（0909）、安国市（）、安国市（101

13、0）、涿州市（）、涿州市（1111）、高碑店市（）、高碑店市（1212）、蠡县（）、蠡县（1313）、徐水县（）、徐水县（1414）、高阳县（）、高阳县（1515）、唐县（）、唐县（1616）、顺平县（）、顺平县（1717）、博野县（）、博野县（1818）、清苑县（）、清苑县（1919）、阜平县（）、阜平县（2020）、望都县（）、望都县（2121）、易县（）、易县（2222）、雄县（）、雄县（2323）、涞水县（）、涞水县（2424）、涞源县（）、涞源县（2525）廊坊市（廊坊市（lflf）安次区（安次区（0101）、广阳区（）、广阳区（0202）、香河县（）、香河县（0303）、文安县（）

14、、文安县（0404）、永清市（）、永清市（0505）、固安县（）、固安县（0606）、霸州市（）、霸州市（0707）、大城县（）、大城县（0808）、三河市（）、三河市（0909）、大厂县（）、大厂县（1010）唐山市（唐山市（tsts）路南区（路南区（0101）、路北区（）、路北区（0202）、丰润区（）、丰润区（0303）、丰南区（）、丰南区（0404）、开平区（）、开平区（0505）、东矿区（）、东矿区（0606）、遵化市（）、遵化市（0707）、滦南县（）、滦南县（0808）、乐亭县（）、乐亭县（0909）、迁西县（）、迁西县（1010）、玉田县（）、玉田县（1111）、迁安市（）、迁

15、安市（1212）、唐海县（）、唐海县（1313）、滦县（）、滦县（1414）秦皇岛市（秦皇岛市（qhqh）海港区（海港区（0101）、山海关区（）、山海关区（0202）、北戴河区（）、北戴河区（0303）、卢龙县（）、卢龙县（0404）、青龙县（）、青龙县（0505）、昌黎县（）、昌黎县（0606）、抚宁县（）、抚宁县（0707）承德市（承德市（cdcd）双桥区（双桥区（0101）、双滦区（）、双滦区（0202）、营子区（）、营子区（0303）、围场县（）、围场县（0404）、丰宁县（）、丰宁县（0505）、兴隆县（）、兴隆县（0606）、宽城县（）、宽城县（0707）、隆化县（）、隆化县（0

16、808）、平泉县（）、平泉县（0909）、滦平县（）、滦平县（1010）、承德县（）、承德县（1111）张家口市（张家口市（zjzj）宣化区（宣化区（0101）、桥东区（）、桥东区（0202）、桥西区（）、桥西区（0303）、下花园区（）、下花园区（0404）、赤城县（）、赤城县（0505）、张北县（）、张北县（0606）、崇礼县（）、崇礼县（0707）、康保县（）、康保县（0808）、沽源县（）、沽源县（0909）、蔚县（）、蔚县（1010）、尚义县（）、尚义县（1111）、阳原县（）、阳原县（1212）、怀安县（）、怀安县（1313）、万全县（）、万全县（1414）、怀来县（）、怀来县（1

17、515）、涿鹿县（）、涿鹿县（1616）、宣化县（）、宣化县（1717） 制作血膜的注意事项制作血膜的注意事项1 1、玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨、玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持玻片的边缘，不能接触表指只能持玻片的边缘，不能接触表面，以免油污使薄血膜产生空白区面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。膜均匀一致。制作血膜的注意事项制作血膜的注意事项 2

18、 2、刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未、刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜血红蛋白让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜血红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果

19、不佳。被其固定，不能溶血或染色效果不佳。制作血膜的注意事项制作血膜的注意事项3 3、让血膜自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干、让血膜自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能4848小时内固定染色；冬天也不能超过小时内固定染色；冬天也不能超过7272小时。小时。放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定，然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后装定，然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后装入盒内盖严，待以后染色。入盒内

20、盖严，待以后染色。血片的染色血片的染色（一）吉氏染液母液配置方法（一）吉氏染液母液配置方法 取吉氏粉取吉氏粉5 5克置于研钵中，加少量甘油克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，至充分研磨，再加再磨，至25250 0mlml加完加完为止，倒入为止，倒入500500mlml有塞的有色玻璃瓶有塞的有色玻璃瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至浓液混入瓶内，至25250 0mlml甲醇洗净研甲醇洗净研钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于温箱内摇匀，置于温箱内2424小时或室温内小时或室温内3 35 5天，每天摇动天

21、，每天摇动5 510min10min，即成原，即成原液。液。 材料：材料： 1 1、吉氏粉、吉氏粉5 5克克 2 2、甘油、甘油25250 0毫升毫升 3 3、甲醇、甲醇25250 0毫升毫升血片的染色血片的染色（二）吉氏染液血片染色方法（二）吉氏染液血片染色方法 先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。 成批血片染色成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入新配制的倒入新配制的2%2%吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（2 2mlml原液加中性原液加中性蒸馏水蒸馏水9898mlml混合均匀），同时对厚薄血膜染色混合均匀），同

22、时对厚薄血膜染色3030minmin，然后向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到溢出，除然后向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，加入新水，反复冲洗加入新水，反复冲洗2 23 3次，然后取出玻片，将血次，然后取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上干燥。膜朝下插在晾片板上干燥。血片的染色血片的染色（二）吉氏染色方法（二）吉氏染色方法 先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后再染定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后再染

23、色。色。 单张血片染色单张血片染色: :薄血膜经干燥固定后，用中性蒸馏水薄血膜经干燥固定后，用中性蒸馏水2ml2ml，加吉氏原液，加吉氏原液2 23 3滴，混匀后滴在厚薄血膜上，滴，混匀后滴在厚薄血膜上，染色染色20203030分钟，然后用漂洗法轻轻将血膜上的染分钟，然后用漂洗法轻轻将血膜上的染液冲洗干净，晾干镜检。液冲洗干净，晾干镜检。 快染快染: :量筒内量量筒内量2ml2ml缓冲液或净水，直接滴加吉氏原缓冲液或净水，直接滴加吉氏原液液7 7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色10min10min，清水漂洗，晾干镜检。，清水漂洗，晾干镜检。吉氏染

24、剂是最可靠的血膜染剂，其优点是易于掌握，很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢. 质量好的染色质量好的染色 : : 核呈核呈红色红色, ,胞浆呈蓝色或胞浆呈蓝色或淡蓝色淡蓝色 如果血片偏红如果血片偏红, ,说明染液偏酸性说明染液偏酸性 如果血片偏蓝如果血片偏蓝, ,说明染液偏硷性说明染液偏硷性吉氏染色血片外观吉氏染色血片外观血片的染色血片的染色（三）注意事项（三）注意事项 配置原液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提配置原液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提高镜检质量。高镜检质量。 固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜。固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜。 冲洗染液时，不要冲走厚血膜。冲洗染液时，不要冲走厚血

25、膜。( (四）影响染色效果的因素四）影响染色效果的因素 血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏等有关外，还受到以下几个制作质量好坏等有关外，还受到以下几个因素的影响：因素的影响： （1 1）染料溶剂的质量）染料溶剂的质量 染料、甲醇和甘油染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。须干净而无水份。影响染色效果的因素影响染色效果的因素 （2 2）染液

26、的新旧）染液的新旧 新配制的染液因色素尚新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制染液配制1 12 2周后才使用，盛装染液的瓶周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖严，以防吸潮而影响染液质量。子应加塞盖严，以防吸潮而影响染液质量。影响染色效果的因素影响染色效果的因素 （3 3）染液稀释后使用时间）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，产生的天青，三者能在

27、酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，稀释染液必须在配制后沉淀。因此，稀释染液必须在配制后半小半小时内时内使用。使用。影响染色效果的因素影响染色效果的因素 （4 4）染液的稀释浓度）染液的稀释浓度 染液的浓度高着色染液的浓度高着色快，各种细胞着色深，薛氏点、茂氏点粗快，各种细胞着色深，薛氏点、茂氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度低，着大显著，但颜色常偏碱；染液浓度低，着色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清晰，但薛氏点、茂氏点不够清楚。晰，但薛氏点、茂氏点不够清楚。影响染色效果的因素影响染色效果的

28、因素 （5 5）染色时间）染色时间 染色时间长染色效果好，染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。气温而适当增减。影响染色效果的因素影响染色效果的因素 （6 6）染色用水）染色用水 为使厚薄血膜着色好，应使稀为使厚薄血膜着色好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用ph7.0 ph7.0 7.2 7.2的水稀释。如果染液偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏的水稀释

29、。如果染液偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝或偏红时，可水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝或偏红时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。影响染色效果的因素影响染色效果的因素 （7 7）冲洗方法）冲洗方法 染色后不要直接将染液倒掉，染色后不要直接将染液倒掉，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。血膜。 查完整个厚血膜未查见疟原虫查完整个厚血膜未查见疟原虫如何确定疟原虫血片为阴性如何确定疟原虫血片为阴性疟疾病人应采集标

30、本疟疾病人应采集标本 制作血涂片 采集滤纸血 抗凝全血编号滤纸血样式滤纸血样式1.2cm1.2cm考试内容考试内容 1、血片制作与染色：在30分钟内，每人制作3张血片并做吉氏染色。具体考核标准见疟原虫血片制片染色技术考核评分表。 2、镜检读片：要求每人镜检6张标本片，每张4分钟，第3分钟时提醒1次。 考试分组考试分组考试内容考试内容8:40-9:108:40-9:10保定、廊坊、唐山保定、廊坊、唐山血片制作、染色血片制作、染色第一组血片第一组血片秦皇岛、石家庄秦皇岛、石家庄血片镜检血片镜检9:25-9:559:25-9:55秦皇岛、石家庄秦皇岛、石家庄血片制作、染色血片制作、染色第二组血片第二组血片保定、廊坊、唐山保定、廊坊、唐山血片镜检血片镜检10:10-10:4010:10-10:40沧州、衡水