常用试剂的配制

1、常用溶液的配制信息来源：生物谷更新时间：2004-12-21 1:33:00 一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g蒸馏水 加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g蒸馏水 加至1000m1分装在棕色瓶内，于4冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 2.5 5.

2、0 10.0 20.0 30.0 40.0 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 (二)0.3台盼兰染液 称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。 (三)0.5酚红指示剂 酚红 0.5g 0.1N(0.4)NaOH 15ml 双蒸水 85ml 将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸

3、出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 (四)5.6NaHCO3溶液 称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4冰箱保存) (五)10gml秋水仙素 秋水仙素 lOmg生理盐水 100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。 (六)0.4KCl-0.4柠檬酸钠低渗液 将0.4KCl和0.4柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。 (七)2柠檬酸钠 称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。 （八）0.2次甲基兰染液 称次甲基兰(Me

4、thylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。 (九)0.5醋酸洋红(Aceio Carmine)染液 洋红 lg 醋酸 90ml 蒸馏水 110ml 将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。 (十)1甲苯胺兰(Toluidine blue) 称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。 (十一)1/3000中性红染液 取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。 (十

5、二)Giemsa染液 1贮备液Giemsa粉 1g 纯甘油 66ml 甲醇 66ml 先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。 2工作液 临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。 (十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液 苏木精 1.0g 乙醇 50ml 醋酸 5ml 甘油 50ml 硫酸铝钾 5g 蒸馏水 50ml 将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸

6、馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。 二、细胞化学和细胞组分分离溶液 (一)M一缓冲液 眯唑(Imidazole) 3.404g KCI 3.7g MgCl26H2O 101.65mg ECTA 380.35mg EDTA 29.224mg 巯基乙醇 0.07ml 甘油 297ml 蒸馏水 加至1000ml 用lNHCl调pH至7.2室温保存。 (二)2Triton X一100溶液 量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。 （三）0.2考马

7、斯亮兰R-250染液 甲醇 46.5ml 醋酸 7.0ml 考马斯亮兰 0.2g蒸馏水 加至100ml(四)A0.1碱性固绿染液(pH8.08.5) 10.1固绿水溶液 固绿(Fast green) 0.1g 蒸馏水 100ml 20.05Na2C03溶液 Na2C03 50mg蒸馏水 100ml用时按1:1体积混合即可。 B0.1酸性固绿染液(pH2.2) 10.1固绿水溶液。 2molL75盐酸液 盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml 用时按l:1混合。 (五)甲基绿一哌咯宁染液 1.1molL醋酸缓冲液(pH4.8)： (1)醋酸 17ml 蒸馏水 加至200ml (2

8、)醋酸水 13.5g 蒸馏水 加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。 2甲基绿一哌咯宁(methyl greenPyrcnln) 5哌咯宁水溶液 6ml 2甲基绿水溶液 6ml 蒸馏水 16ml lmol/L醋酸缓冲液 16ml lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。 (六)Schiff试剂 将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。 (

9、七)联苯胺混合液 联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g 95乙醇 lOOml 3过氧化氢 2滴 此液临用时配制。 (八)l番红水溶液 番红(Safranin) 1.0g 蒸馏水 100ml (九)1SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS) SDS 10g 45乙醇 100ml (十)1molLTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8 Tris 12.114g 蒸馏水 lOOml 先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100m

10、l (十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用065克) 0.9克氯化钾 0.042克氯化钙 0.025克蒸馏水 100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白 2g淀粉 6g牛肉汤 100ml用10NaHCO3调pH至7.07.2(十三)0.25molL蔗糖一0.003molL氯化钙溶液蔗糖 85.5g氯化钙 0.33g蒸馏水 1000ml(十四)1詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1刚果红染液刚果红 1g蒸馏水 100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05molL醋酸缓冲液(pH5) lOOml0.6醋酸加蒸馏水20

11、0ml、取其 42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml B-甘油磷酸钠 2g醋酸铅 2g5氯化镁 5ml以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2，过滤使用。(王世藩 汇编)三、细胞培养和细胞融合溶液(一)0.01molLPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。0.2molL磷酸氢二钠液(甲液)： NaH2PO412H2O 35.814g双蒸水 加至500ml0.2molL磷酸二氢钠液(乙液): NaH2PO412H2O 15.601g 双蒸水 加至500ml 取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水

12、至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4冰箱备用。 (二)50PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500) 称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37予热的MEM培养液，混匀，保温在37水浴中待用。 (三)MEM培养液(含10小牛血清) MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4g 双蒸水 1000ml NaHCO3 1.5g 谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g 56灭活30分钟的小牛血清110ml MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.20.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，

13、待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4冰箱保存备用。 (四)0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液 胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g EDTA粉 20.0mg 0.01molL PBS 100ml 先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5抽滤，分装置4冰箱中保存。 (五)Hanks液 1原液甲 NaCl 160g KCl 8g MgSO47H2O 2g MgCI26H2O 2g 溶于800ml馏水中。 CaCl2(无水) 2.8g 溶于100ml蒸馏水中。 将两种液体混合后，加水至100

14、0ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。 原液乙 Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。 2使用液 甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4冰箱中保存。使用时用5.6NaHCO3调pH值到所需要求。 (六)1640培养液(含lO小牛血清) RPMI-1640粉 10.39g 双蒸水 加至1000ml 通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHC

15、O31.5克调pH值到7.2。 双抗1万u/ml 10ml 灭活小牛血清 110ml 混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4冰箱备用。 (七)青、链霉素溶液 青霉素钠盐(40万u瓶) 5瓶链霉素(100万u瓶) 2瓶将两者溶于200ml0.9的无菌生理盐水，分装小瓶，-30保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。 (八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4。 (九)BrdU溶液(200ug/m1) 用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。 (十)2SSC溶液用分析天平称

16、取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。 （十一）3琼脂：取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。四、制备电镜标本的溶液(一)2.5戊二醛溶液25戊二醛 lOml 0.1molL二甲砷酸钠缓冲液 装入茶色瓶中，保存于4冰箱备用。 (二)0.1molL二甲砷酸钠缓冲液 二甲砷酸钠 10.70g 蒸馏水 500ml 将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4冰箱保存。 (三)包埋剂环氧树脂Epon812 56

17、.30g DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic anhydride，DDSA) 14.60g MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic) anhydride，MNA 29.00g 混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。 (四)2单宁酸 单宁酸 2g 双蒸水 100ml溶解后过滤装茶色瓶中，4冰箱保存。(五)高锰酸钾固定剂 柠檬酸三钠 60mmol/L氯化钾

18、 25mmol/L氯化镁 35mmol/L 高锰酸钾 125mmol/LpH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2个月左右。(六)1OsO4溶液OsO4 0.5g0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。 50ml OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡412小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。五、显影、定影溶液(一)D-72显影液 温水(52) 750ml米吐尔 3g无水亚硫酸钠 45g对苯二酚 12g无水碳酸钠 67.5g溴化钾 19g 水 加至1000ml D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。 使用原液，20显影时间12分钟可得高反差。 加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20时显影时间34分钟可得正常反差。 (二)SB-1停显液配方 水