植物组培快繁程序

1、植物组培快繁程序第三章 植物组培快繁程序 植物快速繁殖就植物快速繁殖就是应用组织培养技术是应用组织培养技术,快速繁殖名优特新品快速繁殖名优特新品物，使其在较短时间物，使其在较短时间内繁衍较多的植株。内繁衍较多的植株。快繁是当前植物细胞快繁是当前植物细胞组织培养中应用最广组织培养中应用最广泛，又最有效的方法泛，又最有效的方法之一。之一。 植物组培快繁程序一、供体植株的培养与取材一、供体植株的培养与取材 二、外植体的灭菌与接种二、外植体的灭菌与接种 三、培养三、培养 四、驯化移栽四、驯化移栽五、组培快繁计划安排与实施五、组培快繁计划安排与实施 主要内容主要内容植物组培快繁程序一、供体植株的培养与取

2、材一、供体植株的培养与取材 一般来说，无论何种类型的细胞组一般来说，无论何种类型的细胞组织培养技术，起始阶段均涉及外植体取织培养技术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌与接种培养等基本过程。材、灭菌与接种培养等基本过程。 外植体来源的环境以及外植体的类型外植体来源的环境以及外植体的类型，均会影响将来培养的效果，而灭菌、，均会影响将来培养的效果，而灭菌、接种和培养条件的选择与控制，也与外接种和培养条件的选择与控制，也与外植体的来源和类型有关。植体的来源和类型有关。 植物组培快繁程序1 1、外植体的来源、外植体的来源- -生长在自然环境下的植物生长在自然环境下的植物- -有目的地培育在温室控制条件下生

3、长有目的地培育在温室控制条件下生长的植物的植物- -无菌环境下已经过离体培养的植物无菌环境下已经过离体培养的植物自然环境中生长的植株，一般带有微生自然环境中生长的植株，一般带有微生物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养效果。效果。 植物组培快繁程序自然环境生长植株自然环境生长植株植物组培快繁程序温室控制条件下生长植株温室控制条件下生长植株植物组培快繁程序已离体培养植株已离体培养植株植物组培快繁程序 在多数情

4、况下，应尽量使用温室或在多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养材料间的一致下的植物可以保持培养材料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培性，提高实验的可重复性，也便于培养技术的规范。养技术的规范。植物组培快繁程序 某些多年生植物或特殊材料，必须取某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就需要尽可能避自自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮湿和不洁净环免使用那些生长过于潮湿

5、和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能出境中的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量取生长现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的生长点部位作为起始培养的旺盛期的生长点部位作为起始培养的材料。材料。 植物组培快繁程序2 2、供体植株的管理、供体植株的管理 取自室外的外植体材料，供体植株取自室外的外植体材料，供体植株的管理十分重要，这与外植体培养时的的管理十分重要，这与外植体培养时的污染率密切相关。植株管理中应注意：污染率密切相关。植株管理中应注意：避免昆虫危害避免昆虫危害 许多昆虫如蚜虫、许多昆虫如蚜虫、螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒介，会

6、引起植物组织的潜在感染。介，会引起植物组织的潜在感染。植物组培快繁程序注意防病注意防病 尤其是真菌和细菌病害尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植体，在的侵染，取自感病植株的外植体，在培养中的污染率远远高于来自健康植培养中的污染率远远高于来自健康植株的外植体，必要时需使用化学药剂株的外植体，必要时需使用化学药剂防治病害。防治病害。控制湿度控制湿度 给供体植株浇水时应从给供体植株浇水时应从根部给水，避免从上部浇水，以免上根部给水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病原侵染的湿度环境；尽部形成易于病原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；取材前尽可能保可能降低温室湿度；取材前尽可能保持植株干爽

7、。持植株干爽。植物组培快繁程序3 3、材料取材、材料取材 材料选择材料选择 培养材料应选择有代表性的主要植培养材料应选择有代表性的主要植物、选择性状优良的种质或特殊的基因物、选择性状优良的种质或特殊的基因型。型。 快速繁殖时应在植株生长的最适时快速繁殖时应在植株生长的最适时期取材，如花药培养应在花粉发育到单期取材，如花药培养应在花粉发育到单核期取材。核期取材。植物组培快繁程序植物组培快繁程序植物组培快繁程序 取材取材 从生长健壮的无病虫害的植株上选取从生长健壮的无病虫害的植株上选取发育正常的器官和组织。最好采用茎尖发育正常的器官和组织。最好采用茎尖，后代性状较稳定，携带细菌较少。，后代性状较稳

8、定，携带细菌较少。 选取材料的大小一般在选取材料的大小一般在0.5-1.0cm0.5-1.0cm之间之间。胚胎培养或脱毒在。胚胎培养或脱毒在0.5cm0.5cm以下。材料以下。材料太大易污染，材料太小难于成活。太大易污染，材料太小难于成活。 植物组培快繁程序1 1、预处理、预处理 先对植物材料进行修剪整理，去先对植物材料进行修剪整理，去掉不需要部分，将准备使用的植物材掉不需要部分，将准备使用的植物材料（外植体）在流水中冲洗料（外植体）在流水中冲洗20-6020-60分分钟，备用。如特别不洁的外植体，可钟，备用。如特别不洁的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗先用加有洗涤剂的水清洗10-1510-1

9、5分钟分钟，再用流水冲洗干净。，再用流水冲洗干净。 二、外植体的灭菌与接种二、外植体的灭菌与接种植物组培快繁程序2 2、表面灭菌、表面灭菌（1 1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、）操作人员穿戴灭过菌的工作服、口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清洗干净，操作前再用洗干净，操作前再用70%70%酒精或消毒酒精或消毒剂擦洗双手。剂擦洗双手。（2 2）操作期间双手和台面常用）操作期间双手和台面常用70%70%酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启风机。风机。植物组培快繁程序 （3 3）接

10、种用工具（解剖刀、剪刀、镊）接种用工具（解剖刀、剪刀、镊子）可放入子）可放入70-75%70-75%酒精中，使用时需酒精中，使用时需火焰灼烧灭菌，冷却后使用。火焰灼烧灭菌，冷却后使用。 （4 4）外植体放入超净工作台内，置）外植体放入超净工作台内，置70-75%70-75%酒精中酒精中5-60 5-60 秒，秒，0.10.1氯化汞氯化汞6-6-1010分钟，或分钟，或10%10%的漂白粉上清液中的漂白粉上清液中10-1510-15分钟，然后用无菌水冲洗分钟，然后用无菌水冲洗3-53-5次。灭菌次。灭菌时需进行搅动。时需进行搅动。 植物组培快繁程序 常用灭菌药剂的使用和效果常用灭菌药剂的使用和效

11、果 灭菌剂使用浓度（%）清除的难易消毒时间效 果次氯酸钠910易530很好次氯酸钙2易530很好漂 白 粉饱和浓度易530很好氯 化 汞0.11较难210最好酒 精7075易0.22好过氧化氢1012最易515好溴 水12易210很好硝 酸 银1较难530好抗 菌 素450mg/L中3060较好植物组培快繁程序（1 1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。见方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含微茎尖要剥成只含

12、l l2 2片幼叶的茎尖大小等。在片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。（2 2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着，）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着，避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。3、外植体的接种、外植体的接种植物组培快繁程序（3 3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。细胞、器官，送入培养容器内

13、，轻轻插入培养基。若是叶片直接附在培养基上，以放若是叶片直接附在培养基上，以放1 13 3块为宜。接块为宜。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时盖上瓶盖或封口。盖上瓶盖或封口。注意：注意： 所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。植物组培快繁程序三、培养三、培养 指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件)里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织

14、或进一步分化成再生植株的过程。 1、培养含义、培养含义植物组培快繁程序2、培养方法、培养方法l(1)固体培养法固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然料的方法。是现在最常用的方法。虽然该方法设备简单，易行，但养分分布不该方法设备简单，易行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。现象发生。l(2)液体培养法液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅动或振动培较

15、少，所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给，采用往养液的方法以确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般为度一般为50100r/min，这种定期浸没，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。氧气的供给。 植物组培快繁程序 培养步骤培养步骤初代培养初代培养继代培养继代培养生根培养生根培养3、培养步骤、培养步骤植物组培快繁程序（1 1）初代培养）初代培养目的目的：获得无菌材料和无性繁殖系。获得无菌材料和无性繁殖系。无性繁殖系：无性繁殖系：是指由一个外植体继代增殖，繁殖出是指由一

16、个外植体继代增殖，繁殖出的具有相同遗传物质的植株群体。的具有相同遗传物质的植株群体。包括：芽丛、不包括：芽丛、不定芽、胚状体、原球茎等。定芽、胚状体、原球茎等。培养基培养基：诱导或分化培养基。诱导或分化培养基。 培养基中培养基中CTKCTK多，多，IAAIAA少。少。类型（根据发育方向）：类型（根据发育方向）： 丛生芽增殖型器官发生型丛生芽增殖型器官发生型 胚状体发生型胚状体发生型 原球茎发生型原球茎发生型植物组培快繁程序 根、芽根、芽胚状体胚状体根、芽根、芽愈伤组织愈伤组织芽芽根根 芽芽外植体外植体试管苗试管苗 原球茎原球茎根、芽根、芽 外植体成苗途径外植体成苗途径 根根植物组培快繁程序类型

17、类型方式方式事例事例丛生芽增殖型丛生芽增殖型腋芽萌发，以芽增殖芽，扩大繁殖系数腋芽萌发，以芽增殖芽，扩大繁殖系数甘蔗、香蕉、香石甘蔗、香蕉、香石竹、丝石竹竹、丝石竹器官发生型器官发生型通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗烟草、油菜等烟草、油菜等胚状体发生型胚状体发生型从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花药培养中产生药培养中产生甘蔗、胡萝卜、石甘蔗、胡萝卜、石刁柏等刁柏等原球茎型原球茎型由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中发育成小植株发育成小植株兰花兰花球茎芽型球茎芽型叶柄表面产生圆球形小突起（球茎芽

18、），叶柄表面产生圆球形小突起（球茎芽），一端出芽一端出根一端出芽一端出根观叶海棠观叶海棠块茎型块茎型叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分化出芽和根化出芽和根花叶芋花叶芋鳞茎型鳞茎型鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞茎茎百合、郁金香、贝百合、郁金香、贝母等母等孢子型孢子型用成熟或未成熟的孢子进行培养用成熟或未成熟的孢子进行培养地钱、狼尾蕨等地钱、狼尾蕨等根茎型根茎型蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为组培的最佳外值体组培的最佳外值体肾蕨、裂叶肾蕨、肾蕨、裂叶肾蕨、波士顿蕨等波士顿蕨等微枝扦插型微枝扦

19、插型带芽的小插条在试管内进行无菌扦插带芽的小插条在试管内进行无菌扦插葡萄、杨树葡萄、杨树植物组培快繁程序顶芽顶芽腋芽腋芽丛生芽增殖型丛生芽增殖型植物组培快繁程序微型扦插微型扦插顶芽顶芽CTKCTK刺激刺激带芽的带芽的茎切段茎切段侧芽侧芽接种培养接种培养形成的茎梢节长，形成的茎梢节长，直立向上呈小灌木直立向上呈小灌木丛状丛状获得较多嫩茎梢获得较多嫩茎梢茎段培养茎段培养继代扩繁继代扩繁试管苗试管苗生根培养生根培养无愈伤组织产生无愈伤组织产生初代初代继代继代丛生芽增殖型丛生芽增殖型植物组培快繁程序器官发生型器官发生型植物组培快繁程序脱分化脱分化分化分化愈伤组织愈伤组织芽、芽丛芽、芽丛切割芽丛切割芽丛

20、 继代培养继代培养大量芽丛大量芽丛试管苗试管苗生根培养生根培养外植体外植体初代初代继代继代器官发生型器官发生型植物组培快繁程序愈伤组织培养愈伤组织培养 愈伤组织愈伤组织具分裂能力的细胞具分裂能力的细胞已分化细胞已分化细胞脱分化脱分化继继 代代 愈伤组织愈伤组织分分 裂裂诱导期诱导期 分裂期分裂期 分化期分化期植物组培快繁程序愈伤组织诱导愈伤组织诱导 双子叶植物双子叶植物 单子叶植物和裸子植物单子叶植物和裸子植物 幼年细胞和组织幼年细胞和组织 成年细胞和组织成年细胞和组织 二倍体细胞二倍体细胞 单倍体细胞单倍体细胞 根据培养目的选取外植体根据培养目的选取外植体植物组培快繁程序愈伤组织诱导愈伤组织

21、诱导 外植体大小一般为外植体大小一般为0.5cm0.5cm的圆柱形或的圆柱形或方形块方形块 添加植调剂和天然提取物利于诱导添加植调剂和天然提取物利于诱导和维持和维持 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色或褐色或褐色植物组培快繁程序脱分化因植物种类、器官及生脱分化因植物种类、器官及生理状况有大差异：理状况有大差异：禾谷类植物脱分化较难。禾谷类植物脱分化较难。细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。花器脱分化较易；茎叶难。花器脱分化较易；茎叶难。植物组培快繁程序诱导期诱导期诱

22、导期长短与植物种类、生理状态有关。诱导期长短与植物种类、生理状态有关。诱导期长短与环境因素有关。诱导期长短与环境因素有关。 母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂频率高。频率高。 增加增加O O2 2和迅速释放和迅速释放COCO2 2利于细胞分裂。利于细胞分裂。 添加植调剂诱导分裂效果好。添加植调剂诱导分裂效果好。 合成代谢迅速。合成代谢迅速。植物组培快繁程序分裂期分裂期特征：特征： 细胞分裂快，结构细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织疏松，缺少有组织的结构，颜色浅而的结构，颜色浅而透明。透明。 植物组培快繁程序分化期分化期特征：特征： 形成瘤状结构的外表形成

23、瘤状结构的外表和内部分化；出现多和内部分化；出现多种类型的细胞。种类型的细胞。植物组培快繁程序石龙芮下胚轴石龙芮下胚轴培养产生胚状培养产生胚状体过程体过程体细胞胚状体发生型体细胞胚状体发生型植物组培快繁程序外外 植植 体体愈伤组织愈伤组织小孢子小孢子游离单细胞游离单细胞器官器官胚胚 状状 体体试试 管管 苗苗体细胞胚状体发生型体细胞胚状体发生型植物组培快繁程序胚状体形成植株的特征：胚状体形成植株的特征：1.具两极性具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的胚状体的维管组织的分布是独立

24、的“Y”形形 4.数量多，速度快，结构完整，成苗率数量多，速度快，结构完整，成苗率高高植物组培快繁程序原球茎：缩短的、呈珠粒状原球茎：缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官。似嫩茎的器官。原球茎发生型原球茎发生型 植物组培快繁程序1.1.初代培养时外植体发育途径有几条？初代培养时外植体发育途径有几条？2.2.正常的愈伤组织一般为何种颜色？其正常的愈伤组织一般为何种颜色？其诱导有何特点？诱导有何特点？思考题：思考题：植物组培快繁程序目的：扩繁无根苗目的：扩繁无根苗（生产上边扩繁边生根）（生产上边扩繁边生根）。扩繁方法：以几何级数增加，可切割茎扩繁方法：以几何

25、级数增加，可切割茎段，分离芽丛、胚状体、原球茎。段，分离芽丛、胚状体、原球茎。培养基：基本培养基培养基：基本培养基或分化培养基或分化培养基实质：增殖培养物。实质：增殖培养物。（2）继代培养）继代培养 植物组培快繁程序植物组培快繁程序植物组培快繁程序（3 3）壮苗和生根培养）壮苗和生根培养 生根培养基：生根培养基：1 12 2或或1 14MS4MS基本培养基；基本培养基；不加或少加不加或少加CTKCTK，适量添加，适量添加NAANAA；糖浓度；糖浓度1-1-1.5%1.5%。培养条件：增加光强，达培养条件：增加光强，达3000-10000lx3000-10000lx。壮苗壮苗 植物组培快繁程序生

26、根方法与途径生根方法与途径 新梢基部浸入新梢基部浸入5050或或100ppmIBA100ppmIBA液液4 48h8h；在含在含IAAIAA类培养基中培养类培养基中培养4 46d6d；移入含活性碳的生根培养基培养。移入含活性碳的生根培养基培养。其它方法其它方法 生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按植物组培快繁程序生根其它方法生根其它方法延长在增殖培养时间延长在增殖培养时间降低增殖倍率，减少降低增殖倍率，减少CTKCTK用量用量对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中直接生根直接生根胚状体发育成小苗不经生根阶段，但需胚状体发育成小苗

27、不经生根阶段，但需壮苗生根壮苗生根植物组培快繁程序 接种只是完成了离体培养的第一接种只是完成了离体培养的第一步，植物离体培养和栽培植物一样，步，植物离体培养和栽培植物一样，生长过程中也受到各种环境因素的生长过程中也受到各种环境因素的影响。培养条件是离体培养能否成影响。培养条件是离体培养能否成功的关键。在培养基条件适宜的基功的关键。在培养基条件适宜的基础上，影响试管苗生长的主要因素础上，影响试管苗生长的主要因素有光照、温度、湿度、氧气。有光照、温度、湿度、氧气。（4）培养条件）培养条件植物组培快繁程序光照光照1 1）光强）光强影响外植体细胞的增殖、影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。一般组织

28、和器官的分化。一般培养室的光照强度要求培养室的光照强度要求100010005000lx5000lx。愈伤组织的诱导有的在光照下有促进愈伤组织的诱导有的在光照下有促进作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，作用；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。幼苗生长弱小，容易徒长。植物组培快繁程序不同波长的光对细胞的分裂和器官的不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。分化有影响。 2 2）光质）光质 白光促进小花天竺葵愈伤组织白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。的生长，蓝光则无作用。如：如：红光促进杨树愈伤组织的生长，红光促进杨树愈伤组织的生长，蓝光阻碍其生长。蓝光阻碍其

29、生长。植物组培快繁程序3 3）光照时间）光照时间根据植物生物学特性决定；根据植物生物学特性决定；光照长短对试管内花的形成是个重要影响因光照长短对试管内花的形成是个重要影响因素，一般给予周期性光照比较好。多数植物素，一般给予周期性光照比较好。多数植物8-108-10小时黑暗为宜。光周期长短因植物种类小时黑暗为宜。光周期长短因植物种类而异。在胡萝卜组织培养中随着日照长度的而异。在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加，而促进生长。增加，而促进生长。 植物组培快繁程序 1 1）大多数植物）大多数植物23-3223-32，一，一般控制在般控制在25252 2C C。低于。低于1515 C C或高于或高于3

30、535 C C，对生长，对生长都是不利的。都是不利的。 2 2）植株种类及外植体的不）植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同同，其最适温度也是不同的。如百合的。如百合2020；月季；月季25252727；番茄；番茄2828。 温度温度植物组培快繁程序湿度湿度1 1）瓶内的湿度：）瓶内的湿度： 一般为一般为100100，主要受到培养基含水，主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。湿度下降。植

31、物组培快繁程序 湿度过低会使培养基丧失大量湿度过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。湿度过高会造成杂菌滋长，生长。湿度过高会造成杂菌滋长，导致大量污染。导致大量污染。一般为一般为707080%80%。2）环境湿度：）环境湿度：植物组培快繁程序1 1）培养基适宜）培养基适宜pHpH值值5-6.55-6.5，一般为，一般为5.85.8，调整用调整用0.1M0.1M的的NaOHNaOH和和HClHCl溶液溶液 。 pHpH值值2 2）H H影响培养基的硬度。影响培养基的硬度。 H H 6.5

32、 6.5 培养基会变硬；培养基会变硬； H H 5.0 5.0 培养基不易凝固。培养基不易凝固。3 3）灭菌之前，培养基的）灭菌之前，培养基的pHpH要比标准提高要比标准提高0.20.20.30.3个单位。个单位。 植物组培快繁程序气体气体(必要条件必要条件)1 1）培养瓶内氧气）培养瓶内氧气的充足与否与封口的充足与否与封口材料有关。材料有关。可用棉塞或特制的可用棉塞或特制的封口塑料。通气最封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。夏季易引起污染。植物组培快繁程序2 2）培养基内氧气充足与否与培养）培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培

33、养方式有关。基的种类和培养方式有关。固体培养基可加进活性炭来增加固体培养基可加进活性炭来增加 通气度通气度, ,以利于发根。以利于发根。液体培养时，可考虑采取振荡培液体培养时，可考虑采取振荡培 养的方式，以增加通气性。养的方式，以增加通气性。 植物组培快繁程序2 2）个大气压以）个大气压以上就对生长有阻碍上就对生长有阻碍作用，作用，5 5个大个大气压生长就完全停气压生长就完全停止，个大气压细止，个大气压细胞就不能生存。胞就不能生存。渗透压渗透压 1 1）1-21-2个大气压促进生长。个大气压促进生长。植物组培快繁程序复习思考题：复习思考题： 1.1.继代培养有何意义？其目的和实质继代培养有何意

34、义？其目的和实质是什么是什么? ? 2.2.组培苗生根方法有哪些？组培苗生根方法有哪些？ 3.3.外植体成苗途径有几条？外植体成苗途径有几条？植物组培快繁程序四、驯化移栽四、驯化移栽植物组培快繁程序n高温且恒温高温且恒温 n高湿高湿 n弱光弱光 n无菌无菌1、试管苗生态环境与自然环境的差异、试管苗生态环境与自然环境的差异 植物组培快繁程序2、试管苗的特点、试管苗的特点 n生长细弱，角质层不发生长细弱，角质层不发达达 n光合作用差光合作用差 n叶片气孔数少，活性差叶片气孔数少，活性差 n根吸收功能弱根吸收功能弱n对逆境的适应性和抵抗对逆境的适应性和抵抗能力较差能力较差植物组培快繁程序3、试管苗的

35、驯化、试管苗的驯化 n目的：提高试管苗的适应性，促其健壮，目的：提高试管苗的适应性，促其健壮，最终提高移栽成活率最终提高移栽成活率 n原则：原则： 从温、光、湿度及有无杂菌等环境因素考虑。从温、光、湿度及有无杂菌等环境因素考虑。 驯化开始数天内，与培养环境条件相似；后期驯化开始数天内，与培养环境条件相似；后期与预计栽培条件相似，逐步适应。与预计栽培条件相似，逐步适应。 n方法：即炼苗。不开口自然光下方法：即炼苗。不开口自然光下2-32-3天，然天，然后开口后开口1-21-2天。天。 植物组培快繁程序试管苗的移栽方法试管苗的移栽方法 植物组培快繁程序组培驯化移栽常用基质组培驯化移栽常用基质 植物

36、组培快繁程序组培驯化移栽用穴盘组培驯化移栽用穴盘 植物组培快繁程序试管苗的移栽方法试管苗的移栽方法植物组培快繁程序植物组培快繁程序植物组培快繁程序试管苗的移栽试管苗的移栽 n移栽方法：取出试管苗，全部轻洗去培养基移栽方法：取出试管苗，全部轻洗去培养基栽入基质栽入基质( (事先浇透水事先浇透水) )后，栽后轻浇薄水，后，栽后轻浇薄水， 移入高湿环境移入高湿环境(90%(90%以上以上) )。 n移栽场所：日光温室塑料大棚驯化室移栽场所：日光温室塑料大棚驯化室 注意：注意： 1.1.保持小苗水分供需平衡保持小苗水分供需平衡2.2.防止菌类滋生防止菌类滋生3.3.给予一定温光条件给予一定温光条件4.

37、4.注意基质配比并保持适当的通气性注意基质配比并保持适当的通气性植物组培快繁程序1 1）保持小苗水分供需平衡）保持小苗水分供需平衡 1 1周内：周内： 环境高湿，遮光。环境高湿，遮光。 1 1周后：周后： 小苗生长后逐渐降湿，拱棚两端通风。小苗生长后逐渐降湿，拱棚两端通风。 半个月后：半个月后： 揭膜，控水，增加光强。揭膜，控水，增加光强。 植物组培快繁程序2 2）防止菌类滋生）防止菌类滋生 基质高压灭菌或基质高压灭菌或3h3h烘烤灭菌或太烘烤灭菌或太阳能灭菌。阳能灭菌。 适当使用杀菌剂、消毒剂。适当使用杀菌剂、消毒剂。 移栽时少伤苗。移栽时少伤苗。 喷水加喷水加0.1%0.1%尿素或尿素或1

38、/2MS1/2MS大量元大量元素液追肥，加快苗生长。素液追肥，加快苗生长。植物组培快繁程序3 3）给予一定温光条件）给予一定温光条件 n适宜生根温度：适宜生根温度：18182020，温，温度低可加度低可加地热线地热线。 n移栽初期弱光，后逐渐加强光移栽初期弱光，后逐渐加强光照，过渡到自然光照。照，过渡到自然光照。 植物组培快繁程序保持基质通气性：保持基质通气性： 选颗粒状基质，浇水勿多。4 4）注意基质配比并保持适当的通气性）注意基质配比并保持适当的通气性 植物组培快繁程序基质配比：基质配比： 珍：蛭：草( 腐殖土)=1：1：0.5 珍：草(腐殖土)=1：1 植物组培快繁程序 提高试管苗移栽成

39、活率的途径？提高试管苗移栽成活率的途径？1 1、壮苗移栽比弱苗移栽成活率高、壮苗移栽比弱苗移栽成活率高2 2、生长素（、生长素（NAANAA）利于生根）利于生根3 3、低无机盐浓度生根效果好、低无机盐浓度生根效果好4 4、活性炭利于嫩茎生根、活性炭利于嫩茎生根5 5、避免太阳直射，温度、避免太阳直射，温度25-3025-30，湿，湿度在度在85%85%以上以上6 6、使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡、使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡植物组培快繁程序植物组培快繁程序组织培养工厂化育苗生产流程简图组织培养工厂化育苗生产流程简图 五、五、组组培培快快繁繁计计划划安安排排与与实实施施植物组培快繁程序 商业化生产规模的确定应以市场需商业化生产规模的确定应以市场需求为标准，否则试管苗难以销售，造成求为标准，否则试管苗难以销售，造成经济损失。经济损失。 外植体的入瓶；器官形成及增殖；外植体的入瓶；器官形成及增殖；试管小植株出瓶等试管苗生产过程均是试管小植株出瓶等试管苗生产过程均是在无菌条件下进行的，因此，试管苗生在无菌条件下进行的，因此，试管苗生产规模可以用无菌工作台的数量来衡量产规模可以用无菌工作台的数量来衡量的。的。植物组培快繁程序 一般一个单人无菌工作台可年生产一般一个单人无菌工作台可年生产10万万15万株万株苗，一个苗，一个1.2m0.6m2.0m的的6层培养架可年繁殖