保留时间漂移

1、本文格式为word版，下载可任意编辑保留时间漂移 液相色谱故障排查 一飘移的保存时间 q：我的色谱峰保存时间在漂移，这是什么问题？ a：这是一个好玩的问题，可能有不同的缘由，让我们一个一个来看。大多数人通常假设保存时间的漂移是平衡问题。假如你在使用未修饰的硅胶柱做正相色谱，那么这是最可能发生的问题。正相色谱的保存时间简单受到硅胶外表吸附的水含量的影响，然后是溶解在流淌相中的水的作用。因为水在正己烷或二氯甲烷等试剂中的溶解度特别低，所以色谱柱平衡需要很长时间。我曾见过使用特别枯燥的正己烷平衡一星期后保存时间仍旧漂移的状况，所以建议避开使用特别枯燥的试剂。通常解决硅胶和水的平衡问题的方法就是使用与

2、水“半饱和的试剂。制备方法是把1体积的疏水试剂用水饱和后，再与相同体积的“枯燥试剂混合。这个方法可以极大的加快平衡时间。 在反相色谱中，平衡通常会很快。几个510柱体积的流淌相通常就足够平衡了，但这也不是全部状况。值得留意的是在离子对色谱中，使用离子对试剂平衡色谱柱。典型的离子对试剂使用浓度在25个umol/l或者更少，它们吸附在反相色谱柱填料外表，外表浓度在0.5-2 mmol/m2。1根250*4.6mm的色谱柱有大约3g外表积330 m2/g的填料，这意味着一根色谱柱有大约1000 m2的外表积，完全平衡需要2mol的浓度2 umol/l的试剂，这虽然是极端状况，但假如用几百毫升的流淌相

3、去平衡色谱柱也是很正常的。因此在保存色谱柱时，用有机溶剂代替离子对试剂保存过夜是不明智的，因为离子对试剂被去除后，第二天你又要花很长时间去平衡。 q：全部这些现象都有共同的因素：流淌相含有低浓度的强吸附试剂。这是保存时间漂移最常见的缘由么？ a：我想就是那样的，其它的现象不多见。但是强吸附剂也可能源于样品。这种状况下它们在重复进样中会渐渐累积，从而转变色谱柱的化学性质。举个例子，药品中的赋形剂。 我们可以通过观看保存时间改变的速率来得知杂质是从流淌相中引入还是从样品中引入。 试验如下： 1 进样几次，例如，4次一共1小时进样。 2 走相同量的流淌相，不进样。 3 重复第一步 4 做一个关系图，

4、保存时间 a. 对时间的关系 b. 对进样次数的关系 假如第一个图得到一条平滑的曲线，那么流淌相是引入杂质的缘由。假如第二个图得到一条平滑的曲线，那么杂质的来源是样品。 q：还是其它保存时间漂移的缘由么？ a：是的，假如流淌相的组成随着时间转变，那么就有可能导致保存时间漂移。假如你没有使用仪器的在线混合装置，那么流淌相的组分可能在缓慢的蒸发。当你用氦气流喷射流淌相的方法赶气泡的时候，你必需掌握喷射的速率最小。 此外，一个常常被忽视的缘由就是键合相的水解。制造商通常会指定一个ph范围，超出范围可能导致键合相“不稳定。这个范围通常是ph2-8或9。然而，人们会有许多缘由不 液相色谱故障排查 得不接

5、近这个极限。这不是一个明显的分界线，因为水解也会取决于其他因素如温度或有机溶剂，但是缓慢的水解会在这个极限上发生。 要保持固定相的水解稳定性，最好是在中性ph值，低温下3-5左右，等度条件好于梯度条件。当等度条件下发生水解时，键合相通常会自我吸附，达成一种区域平衡。然而，在使用高浓度的有机溶剂时，例如在梯度洗脱或者冲洗色谱柱的过程中，这种平衡被打破，键合相见被冲洗杰出谱柱。 q：我会记住的。温度能导致保存时间漂移么？ a：是的，温度通常是有可能的。假如你的样品是自动分析过夜或者过了周末的，那么你得到的保存时间漂移的结果可能和试验室温度改变有关。在很多地方，室温的设置在晚上或者周末通常是不一样的。通常来讲，1的改变导致保存时间漂移大约1%到2%。这个可以联系最终一个导致保存时间漂移的缘由色谱柱返压的增加。增加的返压说明色谱柱被污染，但是仅仅是污染的塞板还足以影响保存时间。压力会让流淌相通过塞板时产生比正常状况大的摩擦，导致流淌相受热，这个增加的温度会导致保存时间的漂移。 此外还有其他的一些缘由，但是极少发生。 在反相色谱上发生平衡很慢的现象是由于流淌相中有机溶剂比例太少。高键合覆盖率、“完全封端的c18没有被流淌相良好的“潮湿。这会导致一些现象，如流淌相和固定相失去联系造成的“疏水塌陷，这是由于固定相之间的互相吸附，从而导致可用于和样品互相作用的外表积的削