遗传病的诊断课件

1、遗传病的诊断第十三章第十三章 遗传病的诊断遗传病的诊断 遗传病的诊断遗传病诊断包括：遗传病诊断包括： * *现症患者诊断现症患者诊断 * *症状前诊断症状前诊断 * *产前诊断（植入前诊断）产前诊断（植入前诊断） 遗传病的诊断 第一节第一节 现症患者诊断现症患者诊断 (symptomatic diagnosis) (symptomatic diagnosis) 遗传病的诊断 一、常规临床诊断一、常规临床诊断1. 1. 病史的收集病史的收集一般病史：患者的一般发病情况。一般病史：患者的一般发病情况。家族史家族史: :本病在家族中的发病情况。本病在家族中的发病情况。婚姻史：有无近亲结婚等。婚姻史：

2、有无近亲结婚等。生育史生育史: :生育年龄，子女健康状况；有无流产、生育年龄，子女健康状况；有无流产、 死产、早产；有无药物接触史、放射线死产、早产；有无药物接触史、放射线 接触史等。接触史等。 遗传病的诊断 2. 2.症状和体征的了解症状和体征的了解 遗传病的症状和体征有和其它疾病的共同遗传病的症状和体征有和其它疾病的共同性，亦有遗传病本身的特殊性。性，亦有遗传病本身的特殊性。 除注意遗传病的特异性征候群，还应注意除注意遗传病的特异性征候群，还应注意身体发育，智力发育，性器官发育情况。身体发育，智力发育，性器官发育情况。 3 3. .临床辅助检查临床辅助检查 包括实验室检查、包括实验室检查、

3、X X线、超声、心电图、脑线、超声、心电图、脑电图、电图、CTCT等。等。 遗传病的诊断 二、二、 系谱分析系谱分析 pedigree analysispedigree analysis 系谱分析往往是由先证者的症状、体征、实系谱分析往往是由先证者的症状、体征、实验室检查和其它辅助检查作出疾病的诊断后，追验室检查和其它辅助检查作出疾病的诊断后，追溯到家系中其他成员，写出系谱图。溯到家系中其他成员，写出系谱图。 遗传病的诊断在绘制系谱过程中要注意：在绘制系谱过程中要注意：1.1.系统、完整系统、完整 * *系谱成员应调查三代以上，（包括死者）系谱成员应调查三代以上，（包括死者） * *凡有近亲婚

4、配、死胎、流产和婴儿死亡等，凡有近亲婚配、死胎、流产和婴儿死亡等，也须询问清楚，记录在系谱中。也须询问清楚，记录在系谱中。2.2.去伪存真去伪存真 注意区别病人和家属所提供信息的真伪。注意区别病人和家属所提供信息的真伪。 遗传病的诊断3.3.注意新的基因突变注意新的基因突变例如：假肥大型肌营养不良（例如：假肥大型肌营养不良（ DMDDMD）约有约有1/31/3的病例为新的基因突变引起的。一的病例为新的基因突变引起的。一般认为是由于患者母亲卵子形成过程中般认为是由于患者母亲卵子形成过程中X X染染色体上色体上DMDDMD基因突变所致。基因突变所致。遗传病的诊断对系谱的分析要注意区别对系谱的分析要

5、注意区别：1.1.孟德尔遗传病孟德尔遗传病 包括包括ADAD遗传病、遗传病、ARAR遗传病、遗传病、XDXD遗传病、遗传病、XRXR遗传遗传病、病、YLYL疾病等。疾病等。 系谱分析对这类疾病的分析非常有用，分析时系谱分析对这类疾病的分析非常有用，分析时要考虑到某些疾病的遗传异质性、不规则外显、外要考虑到某些疾病的遗传异质性、不规则外显、外显不全和延迟显性等情况，可能会造成一些临床假显不全和延迟显性等情况，可能会造成一些临床假象，由于遗传的异质性可能将不同的遗传病误认为象，由于遗传的异质性可能将不同的遗传病误认为同一种遗传病进行分析。同一种遗传病进行分析。遗传病的诊断 2.2.非孟德尔遗传病非

6、孟德尔遗传病线粒体遗传病线粒体遗传病 ： 线粒体基因突变所致的遗传病只通过母线粒体基因突变所致的遗传病只通过母系遗传，女性患者的子女都可能患病。线粒体系遗传，女性患者的子女都可能患病。线粒体遗传病表现为晚发、进行性。遗传病表现为晚发、进行性。多基因病：多基因病： 其家族性聚集性可能类似于孟德尔遗传，其家族性聚集性可能类似于孟德尔遗传，但不严格遵循孟德尔分离规律。但不严格遵循孟德尔分离规律。遗传病的诊断3.3.具有特殊遗传学现象的疾病具有特殊遗传学现象的疾病基因组印记基因组印记 来自双亲的等位基因和染色体区域的表达来自双亲的等位基因和染色体区域的表达不是等同的，这些等位基因在传递上符合孟德不是等

7、同的，这些等位基因在传递上符合孟德尔规律，但在表达方面受传递的双亲性别影响尔规律，但在表达方面受传递的双亲性别影响, ,因而产生母源印记或父源印记时，在系谱分析因而产生母源印记或父源印记时，在系谱分析中要加以注意。中要加以注意。遗传病的诊断动态突变动态突变 在孟德尔遗传疾病中，突变后的基因在在孟德尔遗传疾病中，突变后的基因在世代传递中稳定存在，但在三核苷酸重复序世代传递中稳定存在，但在三核苷酸重复序列扩展所致的遗传病中，处于突变状态的基列扩展所致的遗传病中，处于突变状态的基因在世代传递中表现为不稳定，其重复单元因在世代传递中表现为不稳定，其重复单元的数目发生改变。的数目发生改变。遗传病的诊断（

8、一）染色体检查（一）染色体检查 又称核型分析（又称核型分析（karyotape analysis)karyotape analysis)，即通，即通过血液或组织培养制备染色体标本，进而显带、显过血液或组织培养制备染色体标本，进而显带、显微摄影，分组排列对比分析。微摄影，分组排列对比分析。 是确诊染色体病的主要方法。随着显带技术的是确诊染色体病的主要方法。随着显带技术的应用以及高分辩率染色体显带技术的出现和改进，应用以及高分辩率染色体显带技术的出现和改进，能更准确地判断和发现更多的染色体数目和结构异能更准确地判断和发现更多的染色体数目和结构异常综合征，还可以发现新的微畸变综合征。常综合征，还可以

9、发现新的微畸变综合征。三、细胞遗传学检查三、细胞遗传学检查遗传病的诊断遗传病的诊断1.1.标本来源：标本来源： 现症病人外周血和身体的各种组织现症病人外周血和身体的各种组织2.2.染色体检查适应症：染色体检查适应症：智能低下、生长迟缓或伴有其他先天畸形者。智能低下、生长迟缓或伴有其他先天畸形者。夫妇中有染色体异常，如平衡结构重排、嵌合体等。夫妇中有染色体异常，如平衡结构重排、嵌合体等。家族中已发现染色体异常或先天畸形个体。家族中已发现染色体异常或先天畸形个体。多发性流产的妇女及其丈夫。多发性流产的妇女及其丈夫。原发闭经和男女不育症者。原发闭经和男女不育症者。3535岁以上的高龄孕妇。岁以上的高

10、龄孕妇。有两性内外生殖器畸形者。有两性内外生殖器畸形者。遗传病的诊断（二）性染色质检查（二）性染色质检查利用发根鞘细胞，皮肤或口腔上皮细胞，利用发根鞘细胞，皮肤或口腔上皮细胞，绒毛和羊水细胞检查绒毛和羊水细胞检查X X染色质或染色质或Y Y染色质。用于染色质。用于两性畸形或性染色体数目异常疾病的诊断。两性畸形或性染色体数目异常疾病的诊断。 优点是方法简单，有一定价值，但确认优点是方法简单，有一定价值，但确认仍需依靠染色体检查。仍需依靠染色体检查。遗传病的诊断 1.X 1.X染色质检查染色质检查 用于由于用于由于X X染色体数目异常而引起的性染色体数目异常而引起的性染色体畸变综合征检测。染色体畸

11、变综合征检测。 如：如：TurnerTurner综合征综合征 X X染色质为阴性染色质为阴性。 KlinefelterKlinefelter综合征综合征 X X染色质为阳性。染色质为阳性。2 2个个X X染色质染色质遗传病的诊断 2. Y2. Y染色质检查染色质检查 Y Y染色质检查适用于具有一个或一个以上染色质检查适用于具有一个或一个以上Y Y染色体的个体或细胞群。如正常男性只有染色体的个体或细胞群。如正常男性只有一个一个Y Y小体而小体而XYYXYY男性有男性有2 2个个Y Y小体。小体。 可用于性别的鉴定。可用于性别的鉴定。遗传病的诊断（三）染色体原位杂交（三）染色体原位杂交 应用标记的

12、特异性应用标记的特异性DNADNA探探针与玻片上的细胞中期染色体针与玻片上的细胞中期染色体或间期核的或间期核的DNADNA或或RNARNA杂交，在杂交，在这些核酸不改变其结构和分布这些核酸不改变其结构和分布格局的情况下，研究核酸片段格局的情况下，研究核酸片段的位置、相互关系，因此称为的位置、相互关系，因此称为原位杂交。原位杂交。 遗传病的诊断荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISHFISH）：）： 用生物素、地高辛配基等标记物标记的用生物素、地高辛配基等标记物标记的DNADNA探针进行原位杂交后，用荧光标记的生物素亲探针进行原位杂交后，用荧光标记的生物素亲和蛋白和抗亲和蛋白的抗体进行免疫检测和放和

13、蛋白和抗亲和蛋白的抗体进行免疫检测和放大，使探针杂交的区域大，使探针杂交的区域发出荧光，这种原位杂发出荧光，这种原位杂交称为荧光原位杂交。交称为荧光原位杂交。可完成非整倍体的检测。可完成非整倍体的检测。 遗传病的诊断利用利用FISHFISH技术诊断技术诊断DownDown综合征综合征 图示：利用图示：利用2121号染号染色体特异性探针对一位色体特异性探针对一位高龄妊娠妇女进行产前高龄妊娠妇女进行产前诊断，未培养的羊水细诊断，未培养的羊水细胞进行荧光原位杂交胞进行荧光原位杂交, , 显示所检测的细胞均有显示所检测的细胞均有3 3个杂交信号个杂交信号, ,经选择性人工流产后确诊为经选择性人工流产后

14、确诊为DownDown综合征患儿。综合征患儿。遗传病的诊断 四、生物化学检查四、生物化学检查 单基因遗传病往往是由于基因突变导致酶和单基因遗传病往往是由于基因突变导致酶和蛋白质的改变或缺如，使一些器官的发育和正常的蛋白质的改变或缺如，使一些器官的发育和正常的代谢发生改变，并在临床上表现出一系列症状。代谢发生改变，并在临床上表现出一系列症状。 因此，酶和蛋白质的定性和定量分析可反映基因此，酶和蛋白质的定性和定量分析可反映基因结构的改变，是诊断单基因病的主要方法之一，因结构的改变，是诊断单基因病的主要方法之一，由于主要采用生化手段故称之为生物化学检查。由于主要采用生化手段故称之为生物化学检查。 遗

15、传病的诊断遗传病的诊断五、五、 基因诊断基因诊断 gene diagnosisgene diagnosis 采用分子生物学方法在采用分子生物学方法在DNADNA水平或水平或RNARNA水水平对某一基因进行分析，从而对特定的疾病平对某一基因进行分析，从而对特定的疾病进行诊断。进行诊断。 基因诊断特点基因诊断特点: : 针对直接病因诊断。针对直接病因诊断。 特异性强特异性强, ,灵敏度高。灵敏度高。遗传病的诊断适应性强适应性强, ,诊断范围广诊断范围广, ,因基因探针可为任何来因基因探针可为任何来 源、任何种类源、任何种类, ,其探针序列可为未知或已知其探针序列可为未知或已知, ,待待 检测的目的

16、基因可为一个特定基因或基因组合。检测的目的基因可为一个特定基因或基因组合。目的基因是否处于活化状态均可目的基因是否处于活化状态均可, ,无组织和发无组织和发 育特异性育特异性, ,因此可用于检测一些具有组织表达因此可用于检测一些具有组织表达 特异性和分化阶段表达特异性的基因。特异性和分化阶段表达特异性的基因。遗传病的诊断（一）基因诊断的基本技术（一）基因诊断的基本技术 * * 分子杂交技术分子杂交技术 * * 聚合酶链式反应聚合酶链式反应(PCR)(PCR)技术技术 * * DNADNA序列测定技术序列测定技术 * * 基因芯片技术基因芯片技术遗传病的诊断 分子杂交技术分子杂交技术 molec

17、ular hybridization molecular hybridization 原理：双链原理：双链DNADNA在加热到一定温度以上或在在加热到一定温度以上或在碱性溶液中会变性成为两条单链，互补的两条碱性溶液中会变性成为两条单链，互补的两条DNADNA单链在一定条件下结合成为双链。即能够进单链在一定条件下结合成为双链。即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在补的原则进行，它不仅能在DNADNA和和DNADNA之间进行，之间进行，也能在也能在DNADNA和和RNARNA之间进行。之间进行。遗传病的诊断 因此因此 ，

18、当一段已知基因的核酸序，当一段已知基因的核酸序列作为探针，与变性后的单链列作为探针，与变性后的单链DNADNA接触时，接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组结合成双链，从而表明被测基因组DNADNA中中含含有已知的基因序列。有已知的基因序列。 遗传病的诊断基因探针（基因探针（ProbeProbe）：）： 是一段带有标记的，与待测基因有关的是一段带有标记的，与待测基因有关的核酸序列。核酸序列。探针种类探针种类: : 基因组探针（基因组探针（genomic probegenomic probe） cDNA cDNA探针（探针（

19、cDNA probecDNA probe） 寡核苷酸探针（寡核苷酸探针（oligonucleotide probeoligonucleotide probe） 遗传病的诊断杂交方法：杂交方法： SouthernSouthern杂交杂交 NorthernNorthern杂交杂交 斑点杂交斑点杂交 液相杂交液相杂交 夹心杂交夹心杂交 原位杂交原位杂交 寡核苷酸探针杂交寡核苷酸探针杂交遗传病的诊断遗传病的诊断2.2.斑点杂交法斑点杂交法 又称等位基因特异的寡核苷酸又称等位基因特异的寡核苷酸(ASO(ASO) )探针杂交。探针杂交。 用人工合成的用人工合成的2020个碱基左右长度的个碱基左右长度的AS

20、OASO探针，一探针，一般要合成两种探针：正常探针，突变探针。般要合成两种探针：正常探针，突变探针。 将待测的细胞或将待测的细胞或DNADNA直接点在硝酸纤维膜或尼龙直接点在硝酸纤维膜或尼龙膜上，将标记有同位素（或其他标记）的变性探针膜上，将标记有同位素（或其他标记）的变性探针与其进行杂交，通过放射自显影，判断受检基因的与其进行杂交，通过放射自显影，判断受检基因的有无以及基因的拷贝数，进行基因诊断。有无以及基因的拷贝数，进行基因诊断。 遗传病的诊断遗传病的诊断聚合酶链反应聚合酶链反应 polymerase chain reactionpolymerase chain reaction，PCRP

21、CR 聚合酶链反应技术是在体外迅速的选择扩增特聚合酶链反应技术是在体外迅速的选择扩增特定的靶定的靶DNADNA的方法。又称体外的方法。又称体外DNADNA克隆技术。克隆技术。PCRPCR的的原理：原理：（1 1）按靶）按靶DNADNA片段的片段的55和和33端的碱基顺序各合成两端的碱基顺序各合成两条引物（长约条引物（长约2020个碱基的寡核苷酸）；个碱基的寡核苷酸）；（2 2）将待测）将待测DNADNA变性后，加入四种单核苷酸变性后，加入四种单核苷酸（dNTPdNTP），），引物和耐热引物和耐热DNADNA聚合酶（聚合酶（Taq Taq 酶）；酶）；遗传病的诊断（3 3）反应液进行热）反应液进

22、行热循环，每一周期经循环，每一周期经过过变性（变性（92-9592-95），），复性（复性（40-6040-60）和）和延伸（延伸（65-7265-72）三）三个阶段产生倍增的个阶段产生倍增的DNADNA。一般进行一般进行20-4020-40个周个周期。期。遗传病的诊断PCRPCR相关技术及应用：相关技术及应用： 多重多重PCRPCR RT-PCR RT-PCR Amp-FLP Amp-FLP PCR-ASO PCR-ASO PCR-SSCP PCR-SSCP 定量定量PCRPCR PCR-DGGE PCR-DGGE遗传病的诊断1 2 3 4 5a b1 1：正常人：正常人 2,4,5 2,4

23、,5：纯合体患者：纯合体患者 3 3：杂合体：杂合体(2(2的弟弟的弟弟) )左为泳动变位模式：左为泳动变位模式：a a 正常人；正常人；b b 纯合体患者纯合体患者遗传病的诊断PCR-SSCPGAAGAGTGTTATCTCCAC遗传病的诊断 DNADNA测序技术测序技术(DNA sequenceing(DNA sequenceing MaxanMaxan和和GilbertGilbert首先建立了化学方法，首先建立了化学方法，SangerSanger建立了建立了DNADNA测序的酶学方法。测序的酶学方法。 最新的最新的DNADNA自动测序法以不同荧光色素标记的自动测序法以不同荧光色素标记的四种

24、不同脱氧核苷酸为原料进行酶促合成反应，经四种不同脱氧核苷酸为原料进行酶促合成反应，经过凝胶电泳分离，应用激光分析及计算机处理就能过凝胶电泳分离，应用激光分析及计算机处理就能直接读出碱基顺序。极大地推进了生命科学的发展直接读出碱基顺序。极大地推进了生命科学的发展和人类基因组计划的进程，而且测序的长度可以达和人类基因组计划的进程，而且测序的长度可以达到到1000bp1000bp以上。以上。遗传病的诊断 DNA DNA测序（测序（DNA Sequencing)DNA Sequencing)是检测未知突变是检测未知突变和已知突变基因的最基本和最重要的实验手段。和已知突变基因的最基本和最重要的实验手段。

25、遗传病的诊断基因芯片技术基因芯片技术 基因芯片技术是近年基因芯片技术是近年来发展十分迅速的大规模、来发展十分迅速的大规模、高通量分子检测技术。其高通量分子检测技术。其基本原理是核酸杂交，其基本过程是将许多特定的基本原理是核酸杂交，其基本过程是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，形成矩阵点。现在的技术可以做固定于支持物上，形成矩阵点。现在的技术可以做到在到在1cm1cm2 2上排列成千上万个上排列成千上万个“点点”。遗传病的诊断 样品样品DNA/RNADNA/RNA通过通过PCRPCR扩增、体外转录等扩增、体外转录等

26、技术掺入荧光标记分子，技术掺入荧光标记分子，然后按碱基配对原理进然后按碱基配对原理进行杂交，再通过荧光检行杂交，再通过荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号做出比较和检测，得出所要的一探针上的荧光信号做出比较和检测，得出所要的信息。信息。 遗传病的诊断遗传病的诊断（二）基因诊断的途经（二）基因诊断的途经1.1.直接诊断直接诊断 检测突变基因检测突变基因 直接诊断是直接检测致病突变的基因。它通直接诊断是直接检测致病突变的基因。它通常使用基因本身或紧邻的常使用基因本身或紧邻的DNADNA序列作为探针，或通序列作为探针，或通过

27、过PCRPCR扩增产物，以探查基因无突变、缺失等异常扩增产物，以探查基因无突变、缺失等异常及其性质，这称为直接基因诊断，它适用已知基及其性质，这称为直接基因诊断，它适用已知基因异常的疾病。因异常的疾病。遗传病的诊断 当致病基因的某种突变类型与发病有直当致病基因的某种突变类型与发病有直接的因果关系接的因果关系, ,或者对致病基因以及分子机或者对致病基因以及分子机制已完全了解制已完全了解, ,或者对致病基因以及分子机或者对致病基因以及分子机制部分了解但已知其中规律制部分了解但已知其中规律, ,可应用此途径。可应用此途径。遗传病的诊断2. 2. 间接诊断间接诊断 基因连锁分析基因连锁分析 当致病基因

28、虽然已知但其异常尚属未知或当致病基因虽然已知但其异常尚属未知或突变类型较多时；或致病基因本身尚属未知时，突变类型较多时；或致病基因本身尚属未知时，但被检测基因有紧密连锁的但被检测基因有紧密连锁的DNADNA多态标记，可多态标记，可以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推以通过对受检者及其家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。断前者是否获得了带有致病基因的染色体。 遗传病的诊断 连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种DNADNA多态性位，特别是基因突变部位或紧邻的多多态性位，特别是基因突变部位或紧邻的多态性位点作为标记。态性位点作为标记。R

29、FLPRFLP、VNTRVNTR、SSCPSSCP、AMPAMPFLPFLP等技术均可用于连锁分析。等技术均可用于连锁分析。遗传病的诊断（三）基因诊断的方法选择：（三）基因诊断的方法选择： 各种遗传病的基因异常是不同的，同一遗各种遗传病的基因异常是不同的，同一遗传病也可以有不同的基因异常，但这些异常大传病也可以有不同的基因异常，但这些异常大体可分为基因缺失和突变两大类型。根据对基体可分为基因缺失和突变两大类型。根据对基因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法。因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法。遗传病的诊断 遗传的基因诊断方法遗传的基因诊断方法基因异常基因异常 方法方法 探针、引物或限制

30、酶探针、引物或限制酶基因缺失基因缺失 基因组基因组DNADNA印迹杂交印迹杂交PCRPCR扩增扩增 缺失基因的探针缺失基因的探针 引物包括缺失或在缺失部位内引物包括缺失或在缺失部位内点突变点突变 RFLPRFLP分析分析ASOASO杂交杂交 突变导致其切点消失的限制酶突变导致其切点消失的限制酶 PCRPCR产物的多态性分析产物的多态性分析 正常和异常的正常和异常的ASOASO探针探针 （RFLPRFLP、SSCPSSCP、DGGEDGGE） 引物包括突变部位引物包括突变部位基因已知基因已知 基因内或旁侧序列多态性基因内或旁侧序列多态性 基因内或旁基因内或旁但异常不明但异常不明 （RFLPRFL

31、P、 SSCPSSCP、AMPAMPFLPFLP） 侧序列探针或引物侧序列探针或引物 连锁分析连锁分析 基因未知基因未知 与疾病连锁的多态性，与疾病连锁的多态性， 与疾病连锁的多态与疾病连锁的多态 如如SSCPSSCP、AMPAMPFLPFLP连锁分析，连锁分析， 位点探针或引物位点探针或引物 RFLPRFLP位点单体型连锁分析位点单体型连锁分析遗传病的诊断（四）基因诊断在遗传病诊断中的应用（四）基因诊断在遗传病诊断中的应用1 1 对单基因病的基因诊断对单基因病的基因诊断（1 1）点突变型遗传病的基因诊断）点突变型遗传病的基因诊断镰形细胞性贫血的基因诊断镰形细胞性贫血的基因诊断 遗传病的诊断遗

32、传病的诊断Normal probeMutation probe遗传病的诊断无过氧化氢酶血症（无过氧化氢酶血症（acatalasemia) acatalasemia) 是一种常染色体隐性遗传病，患者过氧化氢酶活是一种常染色体隐性遗传病，患者过氧化氢酶活性只有正常人的性只有正常人的0.2%0.2%0.4%0.4%，杂合体血液中过氧化氢，杂合体血液中过氧化氢酶活性则处于中间水平。过氧化氢酶基因由酶活性则处于中间水平。过氧化氢酶基因由1313个外显个外显子和子和1212个内含子组成。个内含子组成。应用应用32P32P标记标记PCRPCR反应中底物反应中底物方法，扩增第方法，扩增第4 4个外显子和内个外

33、显子和内含子附近的含子附近的203bp203bp片段，应用片段，应用SSCPSSCP法可清楚地判断患者和法可清楚地判断患者和杂合体。杂合体。 遗传病的诊断aa/aa aa/- aa/a- a-/- -/-14kb10kb10kb 4kbBamH IBamH I左侧：左侧：1616号染色体上携有数目不同的基因号染色体上携有数目不同的基因右侧：右侧：a a基因探针杂交的结果基因探针杂交的结果 - -地贫基因缺失的诊断地贫基因缺失的诊断正常正常贫血贫血症状症状携带携带者者HbH（2 2）基因缺失型遗传病的诊断）基因缺失型遗传病的诊断遗传病的诊断DMDDMDBMDBMD的缺失型诊断：的缺失型诊断：遗传

34、病的诊断（3 3）基因异常不明的遗传病的诊断）基因异常不明的遗传病的诊断 以苯丙酮尿症以苯丙酮尿症( PKU )( PKU )的基因诊断为例。的基因诊断为例。RFLPRFLP分析：分析： 遗传病的诊断一个一个PKUPKU家系的家系的RFLPRFLP单体单体型分析型分析 遗传病的诊断遗传病的诊断PKU，AR1 21 2 35.6 Kb5.2 Kb4.2 Kb4.0 KbHind Sph11.0 Kb 9.7 Kb 7.0 Kb遗传病的诊断PKUPKU家系家系PAHPAH基因基因STRSTR连锁分析连锁分析 遗传病的诊断2 2多基因遗传病的基因诊断多基因遗传病的基因诊断 人类基因组多态性是多基因病

35、基因诊断的基础，人类基因组多态性是多基因病基因诊断的基础，易感基因多态性的检测能帮助我们理解多基因病发易感基因多态性的检测能帮助我们理解多基因病发生的机制，有助于对疾病的诊断和分类。生的机制，有助于对疾病的诊断和分类。 目前已经发现一些多基因病相关基因，如载脂目前已经发现一些多基因病相关基因，如载脂蛋白蛋白E E基因（基因（ApoEApoE）的多态性与阿尔茨海默病（）的多态性与阿尔茨海默病（ADAD）有高度相关性，血管紧张肽转换酶基因的多态性与有高度相关性，血管紧张肽转换酶基因的多态性与原发性高血压和心肌梗死高度相关。原发性高血压和心肌梗死高度相关。遗传病的诊断3 3 对肿瘤的基因诊断对肿瘤的

36、基因诊断ras基因突变的检测基因突变的检测 rasras基因突变的检测可采用基因突变的检测可采用PCR-ASOPCR-ASO方法进行，方法进行，已知已知rasras基因突变的热点在基因突变的热点在1212、1313及及6161密码子。密码子。 p5353基因的检测基因的检测 目前常用目前常用PCRPCR法进行检测法进行检测p p5353突变的热点是外显突变的热点是外显子子5-85-8，一般可先选用外显子，一般可先选用外显子5-85-8的引物进行扩增，的引物进行扩增，其后再进行突变位点的详尽分析，甚至测序。另一其后再进行突变位点的详尽分析，甚至测序。另一初步检测初步检测p p5353基因突变的方

37、法为基因突变的方法为PCR-SSCPPCR-SSCP，然后测序。，然后测序。 遗传病的诊断（五）疾病基因诊断的展望（五）疾病基因诊断的展望未来的基因诊断主要发展方向未来的基因诊断主要发展方向 * *胚胎着床前诊断胚胎着床前诊断在囊胚在囊胚8 8个细胞期，通过对其个细胞期，通过对其中一个细胞的染色体核型分折和原位杂交，从而将中一个细胞的染色体核型分折和原位杂交，从而将人类的遗传缺陷控制在最早期阶段；人类的遗传缺陷控制在最早期阶段； * *母体外周血中胎儿细胞分析技术；母体外周血中胎儿细胞分析技术； * *对常见病、多发病如心血管系统疾病、糖尿病、对常见病、多发病如心血管系统疾病、糖尿病、精神疾病

38、、神经系统疾病、恶性肿瘤、哮喘、近视精神疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、哮喘、近视眼等进行分子诊断。眼等进行分子诊断。遗传病的诊断第二节第二节 症状前诊断症状前诊断（pre-symptomatic diagnosispre-symptomatic diagnosis） 指在遗传病的临床症状出现前所作的诊断。指在遗传病的临床症状出现前所作的诊断。 是针对一些常染色体显性是针对一些常染色体显性(AD)(AD)遗传病的杂合子遗传病的杂合子个体的一种诊断方法。这些个体往往发病年龄延迟，个体的一种诊断方法。这些个体往往发病年龄延迟，如果能在杂合子个体生育之前或出现症状之前就作如果能在杂合子个体生育之前或出

39、现症状之前就作出诊断，可以避免他将致病基因传递给后代，减少出诊断，可以避免他将致病基因传递给后代，减少遗传病的发病率。遗传病的发病率。遗传病的诊断 常染色体显性杂合子个体的症状前诊断方法常染色体显性杂合子个体的症状前诊断方法有三种：有三种：1 1家系分析法和风险估计家系分析法和风险估计 2 2生化学检查生化学检查3 3基因分析基因分析 新生儿筛查（新生儿筛查（neonatal screeningneonatal screening）也是一）也是一种症状前的诊断。是对已出生的新生儿进行某些种症状前的诊断。是对已出生的新生儿进行某些遗传病的诊断，是出生后预防和治疗某些遗传病遗传病的诊断，是出生后预

40、防和治疗某些遗传病的有效方法。的有效方法。 遗传病的诊断第三节第三节 产前诊断产前诊断（prenatal diagnosisprenatal diagnosis） 产前诊断产前诊断又称又称宫内诊断宫内诊断（intrauterine intrauterine diagnosisdiagnosis）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作出准确的诊断。某种遗传病或先天畸形作出准确的诊断。 遗传病的诊断一、产前诊断的适应征一、产前诊断的适应征1 13535岁以上的高龄孕妇或夫妇一方有明显致畸因素接岁以上的高龄孕妇或夫妇一方有明显致畸因素接 触史；触史；2

41、2夫妇之一有染色体数目或结构异常者；或曾生育过夫妇之一有染色体数目或结构异常者；或曾生育过 染色体病患儿的孕妇；染色体病患儿的孕妇；3 3已知或推测孕妇是已知或推测孕妇是ARAR或或XRXR携带者；曾生育过某种单携带者；曾生育过某种单 基因遗传病患儿的孕妇；基因遗传病患儿的孕妇；4 4曾生育过先天畸形（尤其是神经管畸形）的孕妇；曾生育过先天畸形（尤其是神经管畸形）的孕妇；5 5有原因不明的自然流产，畸胎，死产及新生儿死亡有原因不明的自然流产，畸胎，死产及新生儿死亡 的孕妇。的孕妇。遗传病的诊断二、产前诊断的方法二、产前诊断的方法仪器诊断仪器诊断 包括：包括：X X线检查线检查 超声波检查超声波

42、检查 胎儿镜检查胎儿镜检查细胞学方法（染色体检查；染色质检查）细胞学方法（染色体检查；染色质检查） 生化学方法（蛋白质或酶检查；代谢产物检查）生化学方法（蛋白质或酶检查；代谢产物检查） 分子生物学方法（基因分析）分子生物学方法（基因分析）遗传病的诊断三、产前诊断的标本及采集技术三、产前诊断的标本及采集技术可用于检测的标本：可用于检测的标本： 羊水上清液、羊水细胞羊水上清液、羊水细胞 绒毛绒毛 脐带血、孕妇外周血中胎儿细胞脐带血、孕妇外周血中胎儿细胞 孕妇血清和尿液孕妇血清和尿液 受精卵、胚胎组织受精卵、胚胎组织 遗传病的诊断羊膜穿刺术（羊膜穿刺术（amniocentesisamniocentesis） 羊膜穿刺术一般在妊娠羊膜穿刺术一般在妊娠16161818周时进行。因周时进行。因为此时羊水量多、胎儿浮动，穿刺时容易进针，为此时羊水量多、胎儿浮动，穿刺时容易进针，且不易伤及胎儿。取材最好是在且不易伤及胎儿。取材最好是在B B超监视下进行。超监视下进行。遗传病的诊断绒毛吸取术绒毛吸取术c