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文档简介

1、 l通过本实验学习PCR反应的基本原理与 实验技术。 l聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增 特定基因或DNA序列的方法，故又称为 基因的体外扩增法。 l在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补 的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和 延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。 l1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋 的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。 l2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板 某区序列互补的一小段DNA片段。 l3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出 发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按 53的方向沿

2、着模板顺序合成新的DNA链。 ParameterConcentration Template pH dNTPs Gelatin Primers Mg2+ oncentration Enzyme Total volume 10 attomoles(1106 molecules) 8.4（10mM Tris-Hcl） 200 M(each one) 100 g/ml (optional) 0.5 M(each one);(0.11.0M) 0.5mM 10mM 1 unit 25100l 电泳仪电泳仪 PCR仪仪 移液器移液器 l1、DNA模板 l2、4种dNTP l3、引物1、引物2 l4、Ta

3、q酶 l5、琼脂糖 l6、DNA相对分子质量标准物 l7、吸头、50ul PCR管 l10PCR缓冲液(含Mg2) l4dNTP (每种1mmol) lTag酶 1U/ul lDNA模板 l引物1: 5- GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3 l引物2: 5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3 l引物溶液浓度 10pmol/ul l1在0.5ml RCR管内配置20ul反应体系： CK(ul)1#(ul) 模板01 引物10.40.4 引物20.40.4 10 PCR Buffer22 Taq酶0.50.5 dNTPs0.40.4 ddH2O14.315.3 Total2020 l要求： l1、写出本实验目的、原理； l2、实验器材及实验步骤； l3、列出实验结果示意

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