反相高效液相色谱法测醇提姜黄素含量

1、反相高效液相色谱法测醇提姜黄素含量 摘 要：姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，具有抗炎、抗氧化等药理作用。本实验采用高效液相色谱法对醇提姜黄素中的姜黄素的进行了含量测定。方法：采用c18色谱柱，甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相，检测波长为425nm，流速为1.0ml/min。姜黄素在5400gml-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。姜黄素平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确，可用于醇提姜黄素中姜黄素的含量测定。 关键词：醇提姜黄素；含量；测定 姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，具有抗炎、抗氧化等药理作用。姜黄素的

2、测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法、库仑滴定法等1-5。高效液相色谱法以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，从而实现对试样的分析。本实验采用高效液相色谱法对醇提姜黄素中的姜黄素的进行了含量测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器：milli-q integral纯水超纯水一体化智能系统（精艺兴业科技有限公司）；jwc-52b1精密恒温槽（上海思尔达科学仪器有限公司）；fl2200-2四元低压梯度液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；721可见分光光度计（上海楚定分析仪器有限公司）；bxxw-30ad博翔兴旺双频超声

3、波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）；fa2004j电子密度分析天平（上海维菱科学仪器有限公司）。 1.2 色谱柱：迪马c18钻石色谱柱（220mm4.6mm，5m）。 1.3 对照品：姜黄素 1.4 试剂：甲醇（永华化学科技（江苏）有限公司）、醋酸（永华化学科技（江苏）有限公司）、冰醋酸（东莞市乔科化学有限公司）、乙腈（永华化学科技（江苏）有限公司）、磷酸（东莞市乔科化学有限公司）、草酸（东莞市乔科化学有限公司）、氢氧化钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸二氢钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）。 2 测定方法确定 2.1 色谱条件 依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动

4、相：甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相，检测波长：425nm，流速：1.0mmin-1。柱温：30。理论板数按姜黄素峰计算应不得低于2000。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取姜黄素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1ml含40g的溶液，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10ml，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。 2.4 专属性试验 取乙醇、甲醇、醋酸等试验用试剂，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在姜黄素出峰处阴性液无色谱峰，结

5、果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。 2.5 精密度试验 精密称取姜黄素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为40gml-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10l，连续进样6次，记录峰面积。结果，rsd=0.63%，表明本方法精密度良好。 2.6 对照品的线性考察 精密称取适量姜黄素对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10l，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（y）为纵坐标，对照品进样量（x）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，姜黄素在5400gml-1范围内呈良

6、好的线性关系。 2.7 重现性试验 称取同一批的醇提姜黄素样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量并计算样品的rsd值，结果rsd为0.62%，结果表明此方法的重现性良好。 2.8 准确度试验 精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入姜黄素对照品，按项下方法制备成120% 140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算回收率为99.6%， rsd为0.53%。 2.9 样品稳定性试验 取同一批醇提姜黄素样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4、5小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定醇提姜黄

7、素中姜黄素的rsd=0.76%。结果表明供试品5小时内稳定。 2.10 样品含量测定 依照上述含量测定方法，测定醇提姜黄素三批样品中姜黄素的含量，结果三批样品的含量分别为35gml-1、32gml-1、36gml-1。 3 讨论 3.1 流动相的选择 分别考察甲醇-水-醋酸（70：30：0.5），甲醇-水-冰醋酸（20：80：0.5），乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90），甲醇-1%冰醋酸溶液（28：72），甲醇-水-冰醋酸（33：65：1），乙腈-0.1%的草酸溶液（30：70），甲醇-磷酸盐缓冲液（ 取0.2mol/l磷酸二氢钠溶液一定量，用氢氧化钠试液调节ph值至5.0）（72：28）不

8、同比例的流动相，结果以甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）为流动相。 3.2 检测波长的选择 制备姜黄素对照品稀释液照紫外-可见分光光度法，于190900nm波长范围内进行全波长光谱扫描，记录吸收光谱。在425nm处有最大吸收峰，故选用425nm为检测波长。 本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性好，可用于醇提姜黄素中姜黄素的含量测定。醇提姜黄素的含量应不少于30gml-1。 参考文献 1童荣生，席庆，孙世明，吴正中.反相高效液相色谱法测定七味姜黄胶囊中姜黄素的含量j.中国医院药学杂志，2003（3）. 2戚爱棣，于虹，朱晨.薄层扫描法测定姜黄、郁金、莪术中姜黄素的含量j.天津中医学院学报，2002（2）. 3刘硕谦，刘仲华，黄建安，田娜，陆英，罗国安.反相高效液相色谱法同时测定姜黄药材中3个组分的含量j.分析化