花粉培养PPT学习教案

1、会计学1 花粉培养花粉培养 花粉培养花粉培养 也叫小孢子培 养，是指把花粉从花药中分 离出来，以单个花粉粒作为 外植体进行的离体培养技术 包含花粉的花药包含花粉的花药 第1页/共19页 花粉培养产生植株的途径花粉培养产生植株的途径 花粉花粉 脱分化脱分化 胚状体胚状体 愈伤组织愈伤组织 再分化再分化 植株植株 植株植株 第2页/共19页 花粉培养的优点花粉培养的优点 花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体 发育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含有 因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体 细胞植株 由于起始材料是小孢子，获得的材料总是纯合的，不 管它是二倍体还是三倍体 小孢子

2、培养可观察到由单个细胞开始雄核发育的全 过程，是一个很好的遗传与发育研究的材料体系 由于花粉能均匀地接触化学的和物理的诱变因素，花 粉是研究吸收、转化和诱变的理想材料 第3页/共19页 一、分离花粉的方法 1.自然释放法 2.研磨过滤收集法 3.剖裂释放法 第4页/共19页 1.1.自然释放法自然释放法 将花蕾进行表面消毒后，无菌条件下取出花药 ，放在固体或液体培养基上培养，花药会自然 开裂，将花粉散落在培养基上。然后将花药壁 等去除，即可进行花粉培养。 花花 蕾蕾 消毒 灭菌 花花 药药 固体培固体培 养基养基 液体培液体培 养基养基 裂开，裂开， 花粉散花粉散 落落 移走花药移走花药 花粉

3、培养花粉培养 花花 粉粉 散散 落落 过过 滤滤 离离 心心 浓浓 缩缩 接种培接种培 养养 操作简单，但效率低操作简单，但效率低 第5页/共19页 2.2.研磨过滤收集法研磨过滤收集法 将花蕾表面消毒后，放入含培养基或分离液的 无菌研磨器中研磨，使花粉释放出来，然后通 过一定孔径的网筛过滤、离心，收集花粉并用 培养基或分离液洗涤，然后用培养基将花粉调 整到理想的接种密度，移入培养皿进行培养。 消毒消毒 花蕾花蕾 无菌研磨 器研磨 花粉花粉+碎碎 片混合物片混合物 花粉滤液花粉滤液 离心 花粉沉花粉沉 淀物淀物 洗涤 花粉花粉 培养培养 筛网过滤 第6页/共19页 3.剖裂释放法剖裂释放法 这

4、一技术需要借助一定工具剖裂药壁，使花粉 释放出来，而不是自然释放。 zhe li de wen zi yi dian yi yi dou mei you yin wei kong bai chu tai duo le suo yi jiu xie dian shen me 第7页/共19页 二、花粉培养方法 1.液体浅层培养 2.平板培养法 3.看护培养法 4.微室悬滴培养法 5.条件培养法 第8页/共19页 1 1、液体浅层培养、液体浅层培养 分离的小孢子经洗涤纯化，调整到所需浓度， 根据培养皿的大小，适量加入培养皿内进行培 养。待愈伤组织或胚状体形成后转移到分化培 养基或胚发育的培养基上使

5、其生长。 zhe li de wen zi ye mei you yi yi yin wei zhao bu dao he shi de tu pian suo yi zhi neng xie xie wen zi le 第9页/共19页 2 2、平板培养法、平板培养法 将分离的花粉用液体培养基稀释或离心浓缩到 最终接种密度的2倍，把含0.6%到1%的琼脂 的培养用固体培养基加热熔化后，冷却到35 ，置于恒温水浴锅中保持这个温度不变。然后 将这种培养基与花粉培养液等量混合，迅速注 入并使之铺展在培养皿内。用封口膜把培养皿 封严，最后将材料放在25下进行暗培养，诱 导产生胚状体或再生不定芽，并进

6、而分化成小 植株。 第10页/共19页 稀释 花粉悬浮液花粉悬浮液 离心浓缩 含有含有2倍培养密度的花粉悬浮液倍培养密度的花粉悬浮液 等体积混合 含有单倍培养密度的花粉培养液含有单倍培养密度的花粉培养液 固培固培 加热熔化加热熔化 冷却至冷却至35 加封口膜加封口膜 25暗培养暗培养 花粉平板培养示意图花粉平板培养示意图 第11页/共19页 3 3、看护培养法、看护培养法 将完整的花药放在固体培养基上，然后将滤纸 片放置在花药上面，一会滤纸就被湿润，然后 迅速将花粉放置在滤纸片上，进行培养。对照 是把花粉粒直接放置在固体培养基上，其它操 作相同。 第12页/共19页 第13页/共19页 4 4

7、、微室悬滴培养法、微室悬滴培养法 把花序取下，表面消毒后用塑料薄膜包好，静 置一夜，待花药裂开、花粉散出，制成每滴含 有50到80粒的花粉悬浮培养基，然后放在微 室内进行悬滴培养。 花药花药 消毒消毒 静置一夜 花药裂开花药裂开 花粉散落花粉散落 收集 悬浮 悬浮液悬浮液 5080粒粒/滴滴 1滴 无菌无菌 载玻片载玻片 加石蜡加石蜡 “围墙围墙 ” 两侧加石蜡两侧加石蜡 油，放盖片油，放盖片 形成形成“支柱支柱 ” 盖片架于盖片架于“ 支柱支柱”之上之上 形成形成“屋顶屋顶 ” 微室制作方法 第14页/共19页 第15页/共19页 5 5、条件培养法、条件培养法 概念：指在合成培养基中加入失活的花药提取 物，然后接入花粉进行培养的一种方法。 由于失活的花药提取物中含有促进花粉发育的物 质，所以加入花药提取物有利于花粉培养成功。 第16页/共19页 花药花药+ 培养基培养基 花粉萌动