植物内生真菌的分离_第1页
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文档简介

1、植物内生真菌的分离一、实验目的1. 理解内生真菌存在的普遍性和多样性2. 掌握常规的微生物分离纯化方法3. 掌握分菌过程中的一些基本操作技能二、实验原理植物内生真菌 ( Endophyte) 是指那些在其生活史的一定阶段或全 部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌， 而宿主 植物一般不表现出外在的症状。所有植物中几乎都存在内生菌 . 由于 植物内生真菌与宿主在长期的进化过程中形成了特殊的生态关系， 因 而内生真菌能产生与宿主相同或相似的具有生理活性的次生代谢产 物，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物越来越成为微生物次生代 谢产物的研究热点之一。采用微生物学常规的组织分离法从植物中

2、分离内生真菌三、实验材料板蓝根新鲜健康的叶片 试剂：次氯酸钠、无水乙醇、葡萄糖、琼脂、青霉素、 链霉 素培养基： PDA 培养基、分离培养基四、实验步骤(一) 、配制 PDA 培养基10月 27号晚上 :（1）配置PDA培养基，用电子称称取去皮的土豆100g,煮沸30min,4 层纱布过滤，滤液加热，加入琼脂 7.5 克，琼脂完全融化后加入葡 萄糖log,待稍冷却后加水至500毫升。（2）准备10瓶无菌水，每瓶150ml左右。（3）包好烧杯,培养皿,涂布棒等实验仪器,等待消毒。（二）、配制分离培养基28 号中午：（1）配置分离培养基,将 PDA 培养液均分成两份,一份备用,另一 份待高温灭菌后

3、，加入青霉素100mg/ L、链霉素200mg/ L的混合液 20ml，即得到分离培养基。（2）用消毒后的培养皿在通风橱中倒平板,注意在整个过程中保证 无菌操作。（三）、采集新鲜板蓝根叶片 28号晚上到实验室外采集新鲜健康叶片完整的板蓝根叶片。（四）、植物组织表面消毒28 号晚上将新鲜、健康的板蓝根叶片于自来水下冲洗干净,用吸水 纸吸干表面水分后剪成小段（片）做如下表面消毒处理： 75%酒精漂 洗3min，无菌水冲洗45次，5%次氯酸钠溶液漂洗叶3min，无菌水 冲洗 45 次,无菌滤纸吸干水分。（五）、接种并培养28号晚上：（1）将上述表面消毒后的材料剪切成0.5cm 2 小块，放入含有 分离培养基的平板中（3块/每板）28C恒温培养315天。最后一 次洗涤水涂布平板作为对照。（2）取备用PDA培养液高温灭菌后，加入青霉素 100mg/ L、链霉 素200mg/L的混合液20ml,在通分橱中倒平板。（六）、分离真菌29号晚上：接种培养 24 小时后,观察对照组无细菌产生,说明实验 成功。31 号中午：继续培养 2天后,实验组组织块边缘没有菌丝产生, 放入 恒温箱继续培养。11月1 号中午：观察到实验组组织块边缘没有菌丝产生, 放入恒温箱 继续培养。11月2号晚上：观察到实验组组织块边缘有少量菌丝产生

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