细菌形态学检查课件

1、细菌形态学检查课件 细菌形态学检查 细菌形态学检查课件 形态学检查的目的：形态学检查的目的： 从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别 的基础；的基础； 了解被检标本中有无细菌；了解被检标本中有无细菌； 直接从标本中观察到某些细菌，可对少直接从标本中观察到某些细菌，可对少 数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。 细菌形态学检查课件 1.普通光学显微镜 原理原理 自然光的波长为自然光的波长为0.4m0.4m；显微镜；显微镜 的最大分辨率为的最大分辨率为0.2m0.2m（前者的一半）；肉眼（前者的一半）；肉眼 的分辨率为的分辨率为0.2

2、mm0.2mm，故放大，故放大10001000倍，使倍，使0.2m0.2m放放 大到大到0.2mm0.2mm。 第一节 显微镜（microscope） 细菌形态学检查课件 2.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测常用于活的微生物的动力检测 3.相差显微镜 利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密 度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明 暗对比。暗对比。 应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。 4.荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光以紫外光或蓝紫光

3、作光源，因其波长比自然光 短，故分辨率比普通显微镜要高。短，故分辨率比普通显微镜要高。 细菌形态学检查课件 5.电子显微镜： 以强大的电子流代替光源，因电子流的波长以强大的电子流代替光源，因电子流的波长 仅为仅为0.005nm0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一），（仅为可见光源的几万分之一）， 故其放大倍数可达故其放大倍数可达1010万万-100-100万倍，可看清万倍，可看清1nm1nm的物的物 体。体。 电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，因电子的透射作用，可观察细菌， virusvirus内部结构，通过荧屏显示。内部结构，通过荧屏显示。 扫描电镜：因电子流对物体的表

4、面进行扫描，因电子流对物体的表面进行扫描， 可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可 用于对细菌，用于对细菌，virusvirus的结构观察。的结构观察。 细菌形态学检查课件 仅用于细菌动力的观察。仅用于细菌动力的观察。 1.压滴法压滴法 明视野法、暗视野法。明视野法、暗视野法。 2.悬滴法悬滴法 3.毛细管法毛细管法：孔径：孔径0.5-1.0mm，长约，长约60-70mm毛毛 细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后， 两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。 注意：区别细菌

5、的运动与布朗运动。注意：区别细菌的运动与布朗运动。 第二节 不染色细菌标本检查法 细菌形态学检查课件 一：染料一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。 色色 基基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团即连接在苯环上带双键的有色化学基团 ， 它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深 如如-NO-NO2 2( (硝基）硝基） -N=N- -N=N-（偶氮基（偶氮基） 助色基助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和 性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性性，且有酸、碱之分，决定了染料

6、的酸碱性: : -NH2 -NH2（碱性）（碱性） -OH -OH （酸性）（酸性） 第三节 细菌染色标本的检查 细菌形态学检查课件 常用染料种类： 碱性染料碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色：美兰，结晶紫，碱性复红等，色 基带正电，易与带负电的被染物结合着色基带正电，易与带负电的被染物结合着色 酸性染料酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基：伊红，酸性复红，刚果红，色基 带负电带负电 复合染料复合染料：可与：可与cellcell浆结合浆结合 单纯染料单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不：多为偶氮化合物，亲和力低，不 溶于水，而溶于脂溶剂。溶于水，而溶于脂溶剂。 细菌形态学检查课件 二

7、染色程序： 基本步骤： 涂片（干燥） 固定 染色 （初染、煤染、脱色、复染） 1.涂片制备： 液体标本（细菌培养液）直 接涂于玻片上； 固体培养基上的培养物 ，取 生理盐水涂片，涂成蚕豆大 小的菌膜。 细菌形态学检查课件 2.2.固定：固定： 目的：目的：杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 改变其通透性，利于染料进入改变其通透性，利于染料进入 使菌体附着在玻片上使菌体附着在玻片上 保持细菌原有的形态、结构保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。方法：常用的火焰加热固定法。 细菌形态学检查课件 3.3.染色：染色： 目的：加固初染目的：加固初染 媒染剂

8、：媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。 目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色目的：使不该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂）脱色剂：酸（为碱的脱色剂） 碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等 脱色机制：脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度 初染初染 媒染媒染 脱色脱色 细菌形态学检查课件 （对比染色）对比染色） 常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色

9、对比）、 美兰、苦味液（与红色对比）美兰、苦味液（与红色对比） 复复 染染 细菌形态学检查课件 三：常用的染色法三：常用的染色法 （一）单染法：（一）单染法： 用一种染料染，细菌及周围部分都染成用一种染料染，细菌及周围部分都染成 同一种颜色同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、主要用于观察细菌的形态、大小、 排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。 （二）复染法：（二）复染法： 用两种以上的染料，将不同的细菌或同用两种以上的染料，将不同的细菌或同 一细菌的不同结构染成不同的颜色。一细菌的不同结构染成不同的颜色。 细菌形态学检查课件 由丹麦细菌学家由丹麦

10、细菌学家Christain GramChristain Gram首创，已有首创，已有100100 多年的历史。多年的历史。 染料染料： 结晶紫、卢戈氏碘液、结晶紫、卢戈氏碘液、 95%95%酒精、稀释石炭酸复红酒精、稀释石炭酸复红 1.革兰染色法（Gram stain): 细菌形态学检查课件 原理：原理： （1）等电点学说）等电点学说：革兰阳性菌：革兰阳性菌ph2-3,低于低于 革兰阴性菌革兰阴性菌ph4-5。 （2）化学学说：）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核革兰阳性菌含大量核糖核 酸镁盐。酸镁盐。 （3）通透性学说：）通透性学说：革兰阳性菌革兰阳性菌cell wall因因 肽聚糖厚，脂类少

11、，肽聚糖厚，脂类少， 通透性低，酒精不易进入通透性低，酒精不易进入 脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易 被酒精溶解，使被酒精溶解，使cell wall通透性升高。通透性升高。 细菌形态学检查课件 结晶紫（初染）结晶紫（初染） 卢戈氏碘液（媒染）卢戈氏碘液（媒染） 95%95%酒精（脱色）酒精（脱色） 稀释石炭酸复红（复染）稀释石炭酸复红（复染） 1min 1min 水洗水洗 1min 1min 水洗水洗 1min 1min 水洗水洗 结果：结果： 意义：意义： 方法：方法： 细菌形态学检查课件 2. 抗酸染色 （acid-fast stain） 原

12、 理：分枝杆菌一般不易着色，若用分枝杆菌一般不易着色，若用5%5% 石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红 色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3%3% 盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸 菌。菌。 细菌形态学检查课件 方 法： 石炭酸复红（初染）石炭酸复红（初染） 盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色 碱性美兰（复染）碱性美兰（复染） 1min 加热至冒蒸汽加热至冒蒸汽 5min5min 涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定 细菌形态学检查课件 结 果： 意 义： 细菌形态学检查课件 细胞壁染

13、色： 染液：染液：10鞣酸溶液、鞣酸溶液、0.5结晶紫溶液结晶紫溶液 方法：涂片自然干燥方法：涂片自然干燥鞣酸染鞣酸染15min，水洗，水洗 结晶紫染结晶紫染35min，水洗，水洗待干，镜检。待干，镜检。 结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色；结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色； 无细胞壁的细菌（无细胞壁的细菌（L型菌）整个菌体染成紫色。型菌）整个菌体染成紫色。 3.特殊染色法 鞭毛染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 异染颗粒染色法 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 透射 电镜 细菌形态学检查课件 扫 描 电 镜 细菌形态学检查课件 细菌形态学检查课件 革兰阴性菌（红色）革兰阴性菌（红色）革兰阳性菌（紫色）革兰阳性菌（紫色） 细菌形态学检查课件 1 2 3 细菌形态学检查课件 图一图一 图二图二 细菌形态学