新生儿溶血三项检测的临床应用

1、2021/3/271 新生儿溶血三项检测的临床应用 2021/3/272 有报道有报道: 占新生儿溶血比例 ABO溶血病85.3% Rh溶血病14.6% MN溶血病0.1% 新生儿溶血病新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn HDN）, 系指母、婴血型不合引起的同族免疫性溶血系指母、婴血型不合引起的同族免疫性溶血;已发现的人已发现的人 类类29个血型系统中个血型系统中,以以ABO血型不合最常见血型不合最常见,Rh血型不合血型不合 较少见较少见; 2021/3/273 胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少, ,胎

2、儿红胎儿红 细胞通过胎盘进入母体血循环中刺激母体产生相应的血型细胞通过胎盘进入母体血循环中刺激母体产生相应的血型 抗体（抗体（IgGIgG）。）。 此抗体又可通过胎盘进入胎儿血循环中导致胎儿、新此抗体又可通过胎盘进入胎儿血循环中导致胎儿、新 生儿体内特异性抗原抗体反应生儿体内特异性抗原抗体反应, ,使红细胞致敏单核使红细胞致敏单核- -吞噬细吞噬细 胞系统内破坏而溶血。胞系统内破坏而溶血。 2021/3/274 ABO溶血病的病因和发病机制溶血病的病因和发病机制 ABO血型的遗传血型的遗传 有有A基因者称基因者称A型型,有有B基因者称基因者称B型型,同时有同时有A、B二二 个基因者称个基因者称

3、AB型型,有有H基因而无基因而无A、B基因为基因为O型型 假如母假如母“O”型型,父父“A”型（纯合子或杂合子）型（纯合子或杂合子） 母基因母基因 型型OO AO A 父基因父基因 型型AA 子基因型子基因型 子血型子血型 AOOO 母基因母基因 型型OO 父基因父基因 型型AO AO或或 或或 2021/3/275 ABO血型抗体血型抗体 正常情况下正常情况下,红细胞上缺乏红细胞上缺乏A或或B抗原时抗原时,血浆中存血浆中存 在相应的抗体即抗在相应的抗体即抗A抗体或抗抗体或抗B抗体为天然抗体抗体为天然抗体,以以 IgM为主为主,实质是由于机体与广泛存在的类实质是由于机体与广泛存在的类ABO物物

4、 质接触产生。质接触产生。 如果由于输血、怀孕或类如果由于输血、怀孕或类ABO物质的刺激使物质的刺激使 抗体浓度增加抗体浓度增加,这种免疫抗这种免疫抗A或抗或抗B抗体多半为抗体多半为IgG, 特别是特别是O型母亲。型母亲。 2021/3/276 血型基因型血浆中可以存在的抗体 OOO抗A抗体和抗B抗体 AAA AO 抗B抗体 BBB BO 抗A抗体 ABAB无 ABO血型与抗体血型与抗体 2021/3/277 ABO溶血病可发生在怀孕第一胎溶血病可发生在怀孕第一胎 自然界存在自然界存在A或或B血型物质如某些植物、寄生虫、血型物质如某些植物、寄生虫、 伤寒疫苗、破伤风及白喉类毒素等。伤寒疫苗、破

5、伤风及白喉类毒素等。 O型母亲在第一次妊娠前型母亲在第一次妊娠前,已接受过已接受过A或或B血型物质血型物质 的刺激的刺激,血中抗血中抗A或抗或抗B (IgG)效价较高。效价较高。 怀孕第一胎时抗体即可进入胎儿血循环引起溶血。怀孕第一胎时抗体即可进入胎儿血循环引起溶血。 ABO血型不合中约血型不合中约20%发病发病 血浆及组织中存在的血浆及组织中存在的A和和B血型物质血型物质,部分中和部分中和 来自母体的抗体。来自母体的抗体。 胎儿红细胞胎儿红细胞A或或B抗原位点少抗原位点少,抗抗 原性弱原性弱,反应能力差。反应能力差。 2021/3/278 Rh溶血病的病因和发病机制溶血病的病因和发病机制 R

6、h基因基因 编码编码Rh抗原的两个基因是抗原的两个基因是RHD和和RHCE; Rh基因系统的等位基因中最重要的是基因系统的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e 五种五种,不存在不存在d基因基因; RHD基因编码基因编码D抗原抗原,RHCE基因的编码产物为基因的编码产物为C/c和和 E/e,C和和E一起遗传一起遗传,排列为排列为DCE;无无d抗原抗原; d表示表示D阴性表现型阴性表现型; RHD和和RHCE基因编码的单倍型中最常见的有基因编码的单倍型中最常见的有8种形种形 式式:Dce、dce,DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和和dCE。 2021/3/279 Rh溶血病溶血病 红细胞缺

7、乏红细胞缺乏D抗原称为抗原称为Rh阴性阴性,具有具有D抗原称为抗原称为Rh阳阳 性性,中国人绝大多数为中国人绝大多数为Rh阳性。阳性。 母亲母亲Rh阴性阴性(无无D抗原抗原),若胎儿若胎儿Rh阳性可发生阳性可发生Rh溶血溶血 病。病。 母亲母亲Rh阳性阳性(有有D抗原抗原),但缺乏但缺乏Rh系统其他抗原如系统其他抗原如E 等等,若胎儿有该抗原也可发生若胎儿有该抗原也可发生Rh溶血病。溶血病。 RhD溶血病最常见溶血病最常见 其抗原性强弱依次为其抗原性强弱依次为DECce。 RhD溶血病最常见溶血病最常见,其次为其次为RhE,Rhe溶血病罕见。溶血病罕见。 2021/3/2710 Rh溶血病一般

8、不发生在第一胎溶血病一般不发生在第一胎 由于自然界无由于自然界无Rh血型物质血型物质 首次妊娠末 期或胎盘剥 离 经过2-6月以后再次妊娠孕期几天内 Rh阳性胎儿 血 0.5 1ml 胎儿已 娩 出 胎儿Rh血 型同上胎 少量胎儿血 0.050.1ml 胎儿红细胞 溶血 Rh阴性母血产生IgM抗 体 产生少量 IgG抗体 母血循环产生大量 IgG抗体 初发免疫反应初发免疫反应次发免疫反应次发免疫反应 第一胎不溶血第一胎不溶血第二胎溶血第二胎溶血 胎盘胎盘 2021/3/2711 Rh溶血病发生在第一胎的情况溶血病发生在第一胎的情况 Rh阴性母亲既往输过阴性母亲既往输过Rh阳性血。阳性血。 Rh

9、阴性母亲既往有流产或人工流产史。阴性母亲既往有流产或人工流产史。 极少数可能是由于极少数可能是由于Rh阴性孕妇的母亲为阴性孕妇的母亲为Rh阳性阳性,其其 母怀孕时已使孕妇致敏母怀孕时已使孕妇致敏,故第一胎发病（外祖母学故第一胎发病（外祖母学 说）。说）。 RhD血型不合者约血型不合者约5%发病发病 母亲对胎儿红细胞母亲对胎儿红细胞Rh抗原的敏感性不同。抗原的敏感性不同。 2021/3/2712 临床表现临床表现 临床特点ABO溶血病 Rh溶血病 发生频率常见不常见 发生的母子血型主要发生在母O型胎儿A 型或B型 母缺少任一Rh抗原 胎儿却具有该 Rh抗原 发生胎次第一胎可发病（约半数） 一般发

10、生在第二胎;第一胎也可发病 下一胎情况不一定大多数更严重 临床表现较轻 较重,严重者甚至死胎 黄疸 生后第23天出现 24小时内出现并迅速加重 贫血 轻可有严重贫血或伴心力衰竭 肝脾大 很少发生 多有不同程度的肝脾增大 晚期贫血很少发生可发生,持续至生后36周 2021/3/2713 实验室检查实验室检查 血型检查血型检查 母子母子ABO和和Rh血型血型 溶血检查溶血检查 溶血时红细胞和血红蛋白减少溶血时红细胞和血红蛋白减少,早期新生儿毛细血管血血早期新生儿毛细血管血血 红蛋白红蛋白6%）; 血涂片有核红细胞增多（血涂片有核红细胞增多（10/100个白细胞）个白细胞）; 血清总胆红素和未结合胆

11、红素明显增加血清总胆红素和未结合胆红素明显增加; 致敏红细胞和血型抗体测定致敏红细胞和血型抗体测定 2021/3/2714 抗人球蛋白试验 抗人球蛋白试验: 又称Coombs试验, 利用抗球蛋白抗体作为第二抗体,连 接与红细胞表面抗原结合的特异抗体,使红细胞凝集。经常用 作试验的有两类方法。 直接试验:是检查被检红细胞上有无已结合的不 完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。 间接试验:是检查血清中游离的不完全 抗体 （包括IgG类的抗A或抗B）。 2021/3/2715 直接直接Coombs试验试验 抗人免疫球蛋白 自身抗体 2021/3/2716 注意事项注意事项 标本采取后应立即进行试验,

12、延迟试验或中途停止可使抗 体从细胞中丢失。 抗球蛋白试剂应按照说明最适稀释度使用,否则可产生前 带或后带现象而误认为阴性结果。 受检红细胞一定要用盐水洗涤3次,除去红细胞悬液混杂的 血清蛋白,以防止假阴性结果。 最好对阴性结果进行核实,即在该试管中再加1滴IgG致敏 红细胞如结果为阳性,则表示试管内的抗球蛋白试剂未被 消耗,阴性结果可靠。 如需了解体内致敏红细胞的Ig类型,则可分别以抗IgM或抗 C3单价抗球蛋白试剂进行试验。 2021/3/2717 注意事项注意事项 红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反 应。 全凝集或冷凝集血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白 试剂中含有抗转铁

13、蛋白时,均可使红细胞发生凝集。 试剂:多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）;阳性对照细胞 IgG抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞生理盐水悬液。取3人 份O型红细胞等量混匀,经生理盐水洗涤后取压积红细胞, 加等量抗D血清,至37水浴致敏1小时,取出后用生理盐水 洗涤3次压积红细胞洗涤配成5%红细胞生理盐水悬液;阴 性对照细胞（正常人5%红细胞生理盐水悬液。取3人份O型 红细胞等量混匀,经生理盐水洗涤后取压积红细胞,配成5% 红细胞生理盐水悬液）。 2021/3/2718 间接间接Coombs试验试验 抗人免疫球蛋白 同种异型抗体 2021/3/2719 注意事项注意事项 如血清与相应红细胞在

14、37 水浴中致敏1小时,75%的抗体 吸附于红细胞上,如致敏2小时,则抗体吸附达95%;如以低 离子盐水溶液代替生理盐水配制5%红细胞悬液,则致敏时 间可减少至15-30分钟,但抗Fy抗体需较长的孵育时间。 红细胞洗涤应迅速、彻底。要将生理盐水用力冲入管底, 使管底红细胞松散分离。要防止手上的蛋白质污染。1滴 1:4000稀释的血清可中和抗球蛋白血清1滴,导致假阳性结 果。 离心速度和时间非常重要,应取能使阳性对照管出现阳性 反应的最小离心力和最短离心时间。 2021/3/2720 注意事项注意事项 当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球 蛋白与不规则抗体的结合,当红细胞上抗体数

15、量较少,可通 过反复离心、摇摆,在离心的方法,增加抗原抗体的接触, 提高阳性率。 如果检测的抗体为补体依赖抗体,则必须加入新鲜AB型血 清. 试剂:多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）;已知抗体血清 （用于检测特殊红细胞抗原）:5%已知抗原的红细胞盐水 悬液（用于检测血清中不完全抗体）;5%D阳性红细胞盐水 悬液（阳性对照用）;不完全抗D血清:AB型血清。 2021/3/2721 抗人球蛋白试验的应用 直接法: 常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自 身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。 间接法: 多用于检测母体Rh（D）抗体,以便及早发现和避免新 生儿溶血症的发生。亦可对红细胞

16、不相容的输血所产生的 血型抗体进行检测。 2021/3/2722 游离试验游离试验 检查新生儿血清中游离抗体检查新生儿血清中游离抗体: 将新生儿血清与标准A(B)细胞（与新生儿同种 红细胞） 做间接抗人球蛋白试验,阳性结果, 则表示有抗体存在。 新生儿血清中游离抗体检查结果新生儿血清中游离抗体检查结果 意义意义 指示红细胞 意义 AC BC OC + - - 游离的抗-A - + - 游离的抗-B + + - 游离的抗-A抗-B或-AB +- +- + 游离的ABO系统以外的抗体 - - - 无游离抗体 2021/3/2723 2021/3/2724 2021/3/2725 2021/3/27

17、26 2021/3/2727 2021/3/2728 2021/3/2729 热放散试验 2021/3/2730 热放散试验方法 2021/3/2731 2021/3/2732 热放散试验注意事项 2021/3/2733 乙醚放散试验 2021/3/2734 酸放散 2021/3/2735 放散试验的应用 2021/3/2736 新生儿红细胞抗体放散试验结果意义新生儿红细胞抗体放散试验结果意义 指示红细胞指示红细胞 意义意义 AC BC OC + - - 放散出IgG抗-A - + - 放散出IgG抗-B + + - 放散出IgG抗-AB或同时放散 IgG抗-A或IgG抗-B +- +- +

18、放散出ABO血型以外的抗体 - - - 没有放散出抗体 2021/3/2737 新生儿血型血清学检查结果分析新生儿血型血清学检查结果分析 游离 释放 结果 直抗 试验 试验 抗筛 判定 意义 +/- + + -/+ 确诊 ABO HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体 +/- - + -/+ 确诊 ABO HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体 +/- - + -/+ 确诊 ABO HDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体 + - - - 可疑 可疑ABO HDN - + - - 可疑 可疑ABO HDN - - - - 否定 血清学实验未能证实 2021/3/2738 新生儿溶血三项检测新生儿溶血三

19、项检测 试验名称目的方法结果判定意义 改良直接抗 人球蛋白试 验(改良 Coombs试验) 测定患儿红 细胞上结合 的血型抗体 “最适稀释度”的抗人球 蛋白血清与充分洗涤后的 受检红细胞盐水悬液混合 红细胞凝聚 为阳性 红细胞已致敏,为确 诊实验 Rh溶血病阳性率高而 ABO溶血病低 抗体释放试 验 测定患儿红 细胞上结合 的血型抗体 加热使患儿致敏红细胞结 合的母体血型抗体释放于 释放液中,该释放液与同 型成人红细胞混合,再加 入抗人球蛋白血清 红细胞凝聚 为阳性 检测致敏红细胞的敏 感试验,为确诊实验 Rh和ABO溶血病一般 均为阳性 游离抗体试 验 测定患儿血 清中来自母 体的血型抗 体

20、 在患儿血清中加入与其相 同血型的成人红细胞,再 加入抗人球蛋白血清 红细胞凝聚 为阳性 估计是否继续溶血和 换血效果,不是确诊 试验 2021/3/2739 治疗治疗 产前治疗产前治疗 血浆置换血浆置换 宫内输血宫内输血 酶诱导剂酶诱导剂 提前分娩提前分娩 新生儿治疗新生儿治疗 光疗光疗 药物治疗药物治疗 换血疗法换血疗法 其他治疗其他治疗 2021/3/2740 产前治疗产前治疗 血浆置换血浆置换 目的目的:换出抗体换出抗体,减少胎儿溶血减少胎儿溶血 用于用于:血血Rh抗体效价明显增高抗体效价明显增高,又不宜提前分娩的孕妇又不宜提前分娩的孕妇 宫内输血宫内输血 直接将与孕妇血清不凝集的浓缩

21、红细胞在直接将与孕妇血清不凝集的浓缩红细胞在B超下注入脐血超下注入脐血 管或胎儿腹腔内管或胎儿腹腔内 目的目的:纠正贫血纠正贫血 用于用于:胎儿水肿或胎儿胎儿水肿或胎儿Hb80g/L,肺尚未成熟者肺尚未成熟者 2021/3/2741 产前治疗产前治疗 酶诱导剂酶诱导剂 孕妇于预产期前孕妇于预产期前12周口服苯巴比妥周口服苯巴比妥 目的目的:诱导胎儿诱导胎儿UDPGT产生增加产生增加,减轻新生儿黄疸减轻新生儿黄疸 提前分娩提前分娩 既往有输血、死胎、流产和分娩史的既往有输血、死胎、流产和分娩史的Rh阴性孕妇阴性孕妇 本次妊娠本次妊娠Rh抗体效价逐渐升至抗体效价逐渐升至1:32或或1:64以上以上

22、 用分光光度计测定羊水胆红素增高用分光光度计测定羊水胆红素增高 羊水羊水L/S2,提示胎肺已成熟提示胎肺已成熟 2021/3/2742 光疗光疗 降低血清未结合胆红素简单而有效的方法。通过光线照 射,能使胆红素的性质改变后经胆汁排泄到肠腔,或从尿内 排出。 副作用 治标不治本 2021/3/2743 药物治疗药物治疗 白蛋白白蛋白 纠正代谢性酸中毒纠正代谢性酸中毒 肝酶诱导剂肝酶诱导剂 静脉用免疫球蛋白静脉用免疫球蛋白 见新生儿黄疸见新生儿黄疸 2021/3/2744 换血疗法换血疗法 作用作用 换出部分血中游离抗体和致敏红细胞换出部分血中游离抗体和致敏红细胞, ,减轻溶血。减轻溶血。 换出血中大量胆红素换出血中大量胆红素, ,防止发生胆红素脑病。防止发生胆红素脑病。 纠正贫血纠正贫血, ,改善携氧改善携氧, ,防止心力衰竭。防止心力衰竭。 2021/3/2745 指征指征 产前已明确诊断,出生时脐血总胆红素68mol/L (4mg/dl),血红蛋白低于120g/L,伴水肿、肝脾大和心 力衰竭者。 生后12小时内胆红素每小时上升12mol/L （0.7mg/dl）者。 总胆红素已达到342mol/L（