结核分枝杆菌传统药敏试验方法完整版

1、 药药敏敏试验试验的目的的目的 / 药敏试验的校正药敏试验的校正 获获得最相得最相关关的的临临床耐床耐药标药标准准 可能的敏感株的敏感可能的敏感株的敏感级别级别 在治在治疗疗反反应变应变化方面化方面测测定敏感性水平定敏感性水平 从从未接受未接受过过治治疗疗的患者的患者(PS)与与至少接受至少接受5/6个个月治月治疗疗的患的患 者者(PR)的的标标本菌株的敏感性本菌株的敏感性进进行比行比较较 PS = 100 菌株菌株; PR = 50 菌株菌株 Cantti G, et al. Bull WHO 1969; 41:21-43. 可能敏感菌株可能敏感菌株/ /（可能无耐药性菌株）在不同药（可能无

2、耐药性菌株）在不同药 物浓度下的抑菌分布物浓度下的抑菌分布 Minimal inhibitory concentrations (MIC) 最小抑菌最小抑菌浓浓度度 Frequency of strai ns Clinically susceptible strains (PS) Break point 1 SD 3 SD Frequency of strains Minimal inhibitory concentrations (MIC) Clinically susceptible strains (PS) Clinically resistant strains (PR) 不同不同药药

3、物物浓浓度下可能敏感菌株和可能耐度下可能敏感菌株和可能耐药药 菌株最低抑菌菌株最低抑菌浓浓度的分布度的分布 Frequency of strains Minimal inhibitory concentrations (MIC) PSPR 2 mcg/ml Break point13.1 as “R” 75.8 11.1 as “S” 可能敏感可能敏感/可能耐可能耐药药菌株菌株对对利福平的最小抑菌利福平的最小抑菌 浓浓度的累度的累积积分布分布（此（此试验试验采用采用 L-J 培培养养基用基用绝对浓绝对浓度法）度法） 85.8 Frequency of strains Minimal inhib

4、itory concentrations (MIC) Clinically susceptible strains (PS) Clinically resistant strains (PR) 采用采用 L-J 培培养养基基 Do not quote this data! (n=81) (n=111) 校正的乙校正的乙胺胺丁醇的丁醇的临临界界浓浓度度 (此试验采用改良罗氏培养基的绝对浓度法) 42% 50% In L-J Mediu m In 7H10 Mediu m 67%67% 抗抗结结核核药药物的最低抑菌物的最低抑菌浓浓度比平均峰度比平均峰值值 EMB ETH OFX CFX INH R

5、MP KM CPM PAS SM 推荐的临临界浓浓度 药药物LJ*7H107H11Bactec 460MGIT 960 异异烟肼肼0.20.20.20.10.1 利福平40.01.01.02.01.0 乙胺胺丁醇2.05.07.52.55.0 链链霉素4.02.02.02.01.0 吡嗪酰胺吡嗪酰胺NRNRNR100.0100.0 卡那霉素30.05.06.04.0 阿米卡星40.01.01.0 卷曲霉素40.010.010.01.252.5 环环丙沙星2.02.02.02.01.0 氧氟氧氟沙星2.02.02.02.02.0 莫西沙星0.5 0.25 加替沙星1.0 乙硫异酰胺异酰胺5.01

6、0.02.55.0 丙硫异异烟胺胺40.01.252.5 PAS1.02.08.02.0 环丝酰胺环丝酰胺40.0NRNRNRNR 氨苯氨苯硫脲脲NRNRNRNRNR 利奈唑酮唑酮1.01.0 *Proportion WHO推荐推荐药药敏敏试验试验的的临临界界浓浓度度, 2007 (4) 浓缩过程中利福平的稳定性浓缩过程中利福平的稳定性 抗结核药物的储存抗结核药物的储存 在密封的硅在密封的硅胶胶容器容器内储内储存存 (最好在最好在真真空下空下储储存存) 比例法比例法 (by Middlebrook & Cohn) Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum

7、media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 + + 3 10-5 26 9 0 % resistant 34.6 0.1 Interpretation Resistant Susceptible 药药敏敏试验结试验结果果-1 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-3 / of bact

8、erial suspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )13+2+11870 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )2282000 Interpr

9、etation R (7.1) (2 /28x100) S (0.03) (1/2800 x 100) S (0.6) (18/2800 x100) S (0.3) (7/2800 x 100) MTB 药药敏敏试验结试验结果果-2 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-3 / of bacterial s

10、uspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or if use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )14+2+21+3+0 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )22+50010 Interpretati

11、on?S?MTB 药药敏敏试验结试验结果果-3 1 . If use nichrome wire (0.7 mm wire/ 3 mm of internal diameter), inoculate one loopful of bacterial suspension of 10-2 / or if use pipette, inoculate 0.1 m l of 10-3 / of bacterial suspension 2. If use nichrome wire, inoculate one loopful of 10-4 / bacterial suspension or i

12、f use pipette, inoculate 0.1 ml of 10-5 /. DrugNoneINHRIFSMEMBPNB Concentrations (/) 00.240.04.02.0500.0 Tube NoC1H1R1S1E1PB Inoculum (10-4 )13515000 Tube NoC2H2R2S2E2 Inoculum (10-6 )200000 InterpretationRR?MTB 17个个跨跨国参国参比比实验实验室室网络网络第第14轮轮熟熟练练度度测试结测试结果果 （数数据据来来源于源于Armand Van Deun 2007年）年） 敏感性敏感性特特异

13、异性性效能效能可重可重复复性性 Isoniazid 异异烟烟肼肼 S敏感敏感=13 R耐耐药药=17 Average (%)99999998 100%13141114 95%4313 Rifampicin利福平利福平 S敏感敏感=10 R耐耐药药=17 Average (%)99999998 100%14141214 95%3323 Streptomycin S敏感敏感=11 R耐耐药药=16 Average (%)97919594 100%121179 95%5688 Ethambutol S敏感敏感=17 R耐耐药药=4 Average (%)88979697 100%1113811 95

14、%6476 蓝色数字表示实验室数量蓝色数字表示实验室数量 51个国个国家（或地家（或地区区）参参比比实验实验室利福平和室利福平和 异异烟烟肼药肼药敏敏试验结试验结果的一致性果的一致性 （世界（世界卫卫生生组织组织第四期全球耐第四期全球耐药报药报告，告，2008） % Agreement一致性一致性Isoniazid异异烟烟肼肼Rifampicin利福平利福平 10038 (77.6)37 (72.5) 95-996 (12.2)9 (17.6) 90-944 (8.2)5 (9.8) 901 (2.0)0 Total number of labs 合合计计 49 (100.0)51 (100.0) Test Drug 药药物 敏感性 (%) 特异异性 (%) 患病情况况下的耐药结药结果预测值预测值(%) 1%15%110%130%1 KM2100909.234.552.681.1 CPM21009620.056.873.591.5 OFX21009725.064.178.793.5 ETH279918.232.049.479.0 二二线线抗抗结结核核药药物耐物耐药预测值药预测值 1 Prevalence rates 2 Results of SLDST proficiency tests done once in 2004 (coordin