基础医学生化测量系统的校准南京课件

1、基础医学生化测量系统的校准南 京 1 生化测量系统的校准生化测量系统的校准 南通大学附属医院南通大学附属医院 王惠民王惠民 基础医学生化测量系统的校准南 京 2 一、与校准相关的一些基本问题一、与校准相关的一些基本问题 校准（校准（Calibration）重要吗？）重要吗？ 实验室中测量不合格约实验室中测量不合格约15%15%由校准误差所致由校准误差所致 临床医生往往认为检验结果的临床医生往往认为检验结果的“不准不准”是由不正确的是由不正确的 校准造成的校准造成的 陈文祥主任认为，检验结果互认的前提是：陈文祥主任认为，检验结果互认的前提是： 测量结果是否具有可比性测量结果是否具有可比性（溯源，

2、方法性能评价：（溯源，方法性能评价： 校准）校准） 可比性的标准可比性的标准 参考测量区间参考测量区间（一致化问题）（一致化问题） 基础医学生化测量系统的校准南 京 3 校准受到重视了吗？校准受到重视了吗？ 一般由组长进行校准一般由组长进行校准 一般无一般无SOP，或，或SOP不够详细不够详细 CLSI或去其他的国际组织尚未有相应的标准或指或去其他的国际组织尚未有相应的标准或指 南南 一般的实验室无校准的记录一般的实验室无校准的记录 科主任一般不过问校准的正确与否科主任一般不过问校准的正确与否 基础医学生化测量系统的校准南 京 4 校准什么？校准什么？ 测量仪器？测量系统（测量仪器？测量系统（

3、“调标调标”或或“定标定标”）？）？ 测量仪器：单独或与辅助设备组合，用于测量的装置。测量仪器：单独或与辅助设备组合，用于测量的装置。 测量系统：由一台或多台测量仪器所组成的用于测量系统：由一台或多台测量仪器所组成的用于特定特定 测量的成套系统，包括试剂和电源等。测量的成套系统，包括试剂和电源等。 校准实际上就是将测量系统与校准实际上就是将测量系统与“参考系统参考系统”进行比较，进行比较， 并将测量系统调整至参考系统相一致水平的过程。并将测量系统调整至参考系统相一致水平的过程。 基础医学生化测量系统的校准南 京 5 F t A LV VVV t A C S SRR 6 21 10 11 实际上

4、，有些情况下不需要对测量系统进行校准实际上，有些情况下不需要对测量系统进行校准 临床化学测量常根据系数进行计算临床化学测量常根据系数进行计算 例：酶催化活性浓度的测量例：酶催化活性浓度的测量 F F值又称为值又称为K K值值 基础医学生化测量系统的校准南 京 6 项目项目 理论理论 K K值值 校准校准K K值值校准校准K K值与理论值与理论K K值之间的误差值之间的误差 RANDOXRANDOX 试剂试剂 国产试剂国产试剂 RANDOXRANDOX 试剂试剂 国产试剂国产试剂 ALT-3633-4201-5079-15.63%-39.80% AST-3633-4211-5020-15.91%

5、-38.18% ALP326239664090-21.58%-25.38% GGT496450595286-1.91%-6.49% CK 71066236573412.24%19.31% LDH71061025413785-44.30%-93.99% 校准校准K K值与理论值与理论K K值的比较值的比较 基础医学生化测量系统的校准南 京 7 DiaSys Randox 基础医学生化测量系统的校准南 京 8 为什么用校准品后得到的为什么用校准品后得到的K K值与理论值与理论K K值不值不 一致？一致？ 校准品是如何定值的？校准品是如何定值的？ 方法不一样方法不一样（参考方法）（参考方法） 仪器不

6、一样仪器不一样（最好的仪器，每次定值前都必须（最好的仪器，每次定值前都必须 对仪器进行校准）对仪器进行校准） 试剂不一样试剂不一样（最好的试剂）（最好的试剂） 基础医学生化测量系统的校准南 京 9 参考方法与常规方法测量仪器的差异参考方法与常规方法测量仪器的差异 参考方法参考方法 （Agilent Cary 4000） 常规方法常规方法 （JJG464-2005 要求）要求） 波长准确度波长准确度 0.1nm5nm 波长精密度波长精密度 0.025nm2.5nm 吸光度准确度吸光度准确度0.00025A0.07A 温度准确度温度准确度370.137.00.1 半波宽半波宽0.05nm15nm

7、基础医学生化测量系统的校准南 京 10 二、校准前的准备二、校准前的准备 1.生化分析仪的准备生化分析仪的准备 生化分析仪的校准或检定生化分析仪的校准或检定 生化分析仪的性能验证生化分析仪的性能验证 2.试剂的准备试剂的准备 试剂是否获准入试剂是否获准入 试剂的性能验证试剂的性能验证 3.水的准备水的准备 基础医学生化测量系统的校准南 京 11 1.生化分析仪的准备生化分析仪的准备 生化分析仪的校准或检定生化分析仪的校准或检定 由厂家根据其标准对生化分析仪进行校准由厂家根据其标准对生化分析仪进行校准 由有关计量部门根据国家标准（由有关计量部门根据国家标准（JJG494-2005） 对仪器进行检

8、定对仪器进行检定 基础医学生化测量系统的校准南 京 12 生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析 仪检定规程仪检定规程JJG 494-2005进行）进行） 零点漂移零点漂移 波长准正确度及重复性波长准正确度及重复性 杂散光杂散光 吸光度正确度吸光度正确度 吸光度重复性吸光度重复性 吸光度线性误差吸光度线性误差 交叉污染率交叉污染率 温度正确度温度正确度 比色杯间差距比色杯间差距 基础医学生化测量系统的校准南 京 13 生化分析仪检定用标准物质生化分析仪检定用标准物质 用于吸光度用于吸光度正正确度与重复性检定的标准确度与重复性检定的标准

9、物质物质 杂散光检定的标准物质杂散光检定的标准物质 吸光度线性检定的标准物质吸光度线性检定的标准物质 交叉污染检定的标准物质交叉污染检定的标准物质 中国计量科学研究院，北京市北三环东路中国计量科学研究院，北京市北三环东路1818号，号， 电话：，电话：，6427883864278838 基础医学生化测量系统的校准南 京 14 零点漂移零点漂移 开机开机30min, 30min, 用蒸馏水调吸光度至用蒸馏水调吸光度至0.0000.000处，处， 10min10min内吸光度的最大变化值应符合下表规定：内吸光度的最大变化值应符合下表规定： 类类 级级 飘移值飘移值 一一 （棱镜式或（棱镜式或 光栅

10、式）光栅式） A A0.0020.002 B B0.0040.004 C C0.0060.006 二二 （干涉滤光片或（干涉滤光片或 吸收滤光片）吸收滤光片） A A0.0020.002 B B0.0040.004 C C0.0060.006 基础医学生化测量系统的校准南 京 15 单波长单波长(nm)(nm)飘移（飘移（A A）双波长双波长(nm)(nm)飘移（飘移（A A） 3400.0148340/4050.0015 4050.0093405/5700.0009 450-0.0060450/6000.0004 5050.0088505/6600.0006 6600.0036660/750

11、-0.0004 复兴仪器的零点飘移复兴仪器的零点飘移 基础医学生化测量系统的校准南 京 16 复兴仪器复兴仪器340nm340nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 17 复兴仪器复兴仪器340nm340nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 18 复兴仪器复兴仪器405nm405nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 19 复兴仪器复兴仪器405nm405nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 20 复兴仪器复兴仪器340/405nm340/405nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 21 复兴仪器复兴仪器34

12、0/405nm340/405nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 22 复兴仪器复兴仪器405/505nm405/505nm零点漂移零点漂移 基础医学生化测量系统的校准南 京 23 出现零点飘移可能原因出现零点飘移可能原因 电压不稳电压不稳 光电倍增管或光接收元件老化光电倍增管或光接收元件老化 仪器灵敏度过高仪器灵敏度过高 仪器设计与制造的缺陷仪器设计与制造的缺陷 基础医学生化测量系统的校准南 京 24 波长的正确度波长的正确度 波长正确度的测定方法根据分光原理不同而异波长正确度的测定方法根据分光原理不同而异 分光式仪器（光栅由于不需传动调节波长，一般不分光式仪器（光栅由于不

13、需传动调节波长，一般不 需校准）需校准） 低压汞灯、氘灯、干涉滤光片低压汞灯、氘灯、干涉滤光片 镨钕滤光片、氧化钬滤光片镨钕滤光片、氧化钬滤光片 滤光式仪器滤光式仪器 将滤光片拆下在已校准的分光光度计将滤光片拆下在已校准的分光光度计 上进行波长扫描，测定波长和半波宽上进行波长扫描，测定波长和半波宽 一般仪器不容易拆卸一般仪器不容易拆卸 基础医学生化测量系统的校准南 京 25 特征谱线特征谱线 低压汞灯低压汞灯: 253.7nm: 253.7nm 氘灯氘灯: 486nm: 486nm、656.1nm656.1nm 镨钕滤光片镨钕滤光片: 529nm: 529nm、808nm808nm（400nm

14、400nm900nm900nm内至少有内至少有 1010个吸收峰）个吸收峰） 氧化钬滤光片氧化钬滤光片: 200: 200700nm700nm共共1212条谱线条谱线 干涉滤光片干涉滤光片: : 长波通滤光片长波通滤光片: 200: 2001100nm1100nm，光学分辨率为，光学分辨率为1nm1nm 短波通滤光片短波通滤光片: 400: 400700nm700nm，光学分辨率为，光学分辨率为1nm1nm 基础医学生化测量系统的校准南 京 26 波长的重复性波长的重复性 指多次波长测试数据的离散性，或者多指多次波长测试数据的离散性，或者多 次波长测试数据的符合程度。次波长测试数据的符合程度。

15、 一般取波长正确度的一般取波长正确度的3 3次测试结果中最次测试结果中最 大值与最小值之差作为波长重复性。大值与最小值之差作为波长重复性。 基础医学生化测量系统的校准南 京 27 波长正确度及重复性的要求波长正确度及重复性的要求 （nm） 类类级级波长范围波长范围正确度正确度重复性重复性 一（分光一（分光 类仪器）类仪器） A A 340340700700 1 10.50.5 B B 340340700700 3 31.51.5 C C 340340700700 5 52.52.5 类类级级波长范围波长范围正确度正确度半波宽半波宽 二（滤光二（滤光 类仪器）类仪器） A A 340340700

16、700 2 21010 B B 340340700700 4 41212 C C 340340700700 6 61515 基础医学生化测量系统的校准南 京 28 杂散光杂散光 杂散光与波长的半波宽有关，半波宽越大，杂散光越杂散光与波长的半波宽有关，半波宽越大，杂散光越 多。多。 测定测定50g/L50g/L亚硝酸钠（亚硝酸钠（NaNONaNO2 2）标准溶液相对于蒸馏）标准溶液相对于蒸馏 水在水在340nm340nm处的吸光度，了解杂散光的多少。处的吸光度，了解杂散光的多少。 亚硝酸钠溶液的配制方法亚硝酸钠溶液的配制方法 将分析纯亚硝酸钠固体试剂放入称量瓶置于烘箱中，在箱温为将分析纯亚硝酸钠

17、固体试剂放入称量瓶置于烘箱中，在箱温为 1055下烘下烘2h，取出置于干燥器中冷却至室温，在分析天平上，取出置于干燥器中冷却至室温，在分析天平上 （精度为（精度为0.1mg）精确称取）精确称取10g，置于，置于200mL烧杯中，用小半杯蒸馏烧杯中，用小半杯蒸馏 水溶解后移入水溶解后移入200mL容量瓶中，以少量蒸馏水冲洗烧杯三次，均倒入容量瓶中，以少量蒸馏水冲洗烧杯三次，均倒入 容量瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度线反复摇匀，置于阴凉干燥处备容量瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度线反复摇匀，置于阴凉干燥处备 用。用。 基础医学生化测量系统的校准南 京 29 340nm340nm340nm 345nm34

18、5nm 基础医学生化测量系统的校准南 京 30 基础医学生化测量系统的校准南 京 31 杂散光杂散光 1 1）在波长）在波长340nm340nm，第一个试剂位放入蒸馏水，以蒸，第一个试剂位放入蒸馏水，以蒸 馏水为样本，重复测定馏水为样本，重复测定5 5次吸光度值；第二个试剂次吸光度值；第二个试剂 位放入位放入NaNONaNO2 2溶液，以溶液，以NaNONaNO2 2溶液为样本，重复测溶液为样本，重复测 定定5 5次吸光度值；或将蒸馏水和次吸光度值；或将蒸馏水和NaNONaNO2 2溶液分别加溶液分别加 入同一比色杯读取吸光度（可消除比色杯误差），入同一比色杯读取吸光度（可消除比色杯误差），

19、重复测定重复测定5 5次，共得次，共得5 5个蒸馏水和个蒸馏水和5 5个个NaNONaNO2 2溶液的溶液的 吸光度。吸光度。 2 2）最小）最小NaNONaNO2 2溶液吸光度溶液吸光度- -最大蒸馏水吸光度最大蒸馏水吸光度2.32.3。 基础医学生化测量系统的校准南 京 32 复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定 基础医学生化测量系统的校准南 京 33 复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定 基础医学生化测量系统的校准南 京 34 复兴仪器的杂散光测定（空白）复兴仪器的杂散光测定（空白） 基础医学生化测量系统的校准南 京 35 吸光度正确度吸光度正确度 指吸光度实际测定值与理论值之差

20、，该指吸光度实际测定值与理论值之差，该 偏差越小吸光度正确度越高，间接说明波长偏差越小吸光度正确度越高，间接说明波长 的正确度与杂散光的多少。的正确度与杂散光的多少。 1 1）国家标准物质法）国家标准物质法 2 2）己糖激酶法）己糖激酶法 基础医学生化测量系统的校准南 京 36 吸光度正确度吸光度正确度 1 1）国家标准物质法：）国家标准物质法： 使用国家标准物质研究中心制备的标准物质溶使用国家标准物质研究中心制备的标准物质溶 液，其吸光度分别为液，其吸光度分别为0.50.5和和1.01.0。 在在340nm340nm波长、比色杯光径波长、比色杯光径1cm1cm时，以标准物质时，以标准物质 标

21、示的参比液作参比，测吸光度值，重复测量标示的参比液作参比，测吸光度值，重复测量3 3次。次。 计算计算3 3次测量值的算术平均值与标准值之差，次测量值的算术平均值与标准值之差， 0.50.5的标准液允许误差为的标准液允许误差为0.0250.025， 1.0 1.0 的标准液，的标准液， 允许误差为允许误差为0.070.07。 基础医学生化测量系统的校准南 京 37 测定结果测定结果 标准物质的吸光度：标准物质的吸光度：A A1-1 1-1=0.489 A =0.489 A1-2 1-2=0.980 =0.980 （不（不 确定度：确定度：0.0050.005） 检测结果：检测结果： A A1-

22、1 1-1=0.4916 =0.4916；0.48360.4836；0.48120.4812，均值为，均值为0.48550.4855 A A1-2 1-2=0.9703 =0.9703；0.97140.9714；0.97220.9722，均值为，均值为0.97130.9713 结果判定：结果判定：A A1-1 1-1误差 误差0.0250.025；A A1-2 1-2误差 误差0.070.07。即。即 0.464A0.464A1-1 1-10.514 0.514；0.910A0.910A1-2 1-21.050 1.050 基础医学生化测量系统的校准南 京 38 吸光度正确度吸光度正确度 2

23、2）己糖激酶法）己糖激酶法 用己糖激酶（用己糖激酶（HKHK）法测定葡萄糖浓度时，反应产生）法测定葡萄糖浓度时，反应产生NADHNADH， 在在340nm 340nm 测定吸光度，间接测测定吸光度，间接测NADHNADH的的（理论值为理论值为 62206220），以此为标准校正），以此为标准校正。 以以HKHK测葡萄糖为例，试剂反应过程如下：测葡萄糖为例，试剂反应过程如下： HKHK 葡萄糖葡萄糖+ ATP-6-P-+ ATP-6-P-葡萄糖葡萄糖+ ADP, + ADP, G6PDH G6PDH 6-P- 6-P-葡萄糖葡萄糖+ NAD+ NAD+ +-葡萄糖酸葡萄糖酸+NADH, +NAD

24、H, 基础医学生化测量系统的校准南 京 39 影响吸光度准确度的主要因素影响吸光度准确度的主要因素 杂散光多杂散光多 波长不正确波长不正确 标准液不正确标准液不正确 仪器的灵敏度或其他原因仪器的灵敏度或其他原因 基础医学生化测量系统的校准南 京 40 吸光度重复性吸光度重复性 1 1）以重铬酸钾标准溶液为样本，在波长）以重铬酸钾标准溶液为样本，在波长340nm340nm，吸光度，吸光度 为为0.30.30.5,0.5,以蒸馏水为空白以蒸馏水为空白, ,试剂量为全自动生化试剂量为全自动生化 分析仪标称的最小试剂量、测定时间为分析仪标称的最小试剂量、测定时间为10min10min；每；每 3030

25、秒读取吸光度秒读取吸光度, ,连续连续2020次，得到次，得到2020个吸光度值。个吸光度值。 计算计算CVCV，应，应1.0% 1.0% 2 2）采用吸光度约为）采用吸光度约为0.50.5生化分析仪用吸光度标准物质，生化分析仪用吸光度标准物质， 在在340nm340nm处连续测定处连续测定5 5次，然后计算其中最大值与最次，然后计算其中最大值与最 小值之差。吸光度的重复性均应不大于小值之差。吸光度的重复性均应不大于0.0050.005 基础医学生化测量系统的校准南 京 41 检测结果：检测结果： A1-1=0.4828A1-1=0.4828；0.48310.4831；0.48360.4836

26、；0.48120.4812； 0.4820.482 0.4836-0.4812=0.00240.0050.4836-0.4812=0.00240.005 基础医学生化测量系统的校准南 京 42 吸光度线性误差吸光度线性误差 分别用浓度为分别用浓度为2.02.0、4.04.0、6.06.0、8.08.0、 10.0g/L10.0g/L的氯化钴标准溶液，以蒸馏水为对照，的氯化钴标准溶液，以蒸馏水为对照， 在在510nm510nm（500-520nm500-520nm）测定各溶液吸光度，连）测定各溶液吸光度，连 续测量续测量3 3次，然后将所得数据求相关系数，次，然后将所得数据求相关系数， r r0

27、.9950.995。或按下列公式计算，线性误差符合。或按下列公式计算，线性误差符合 规定要求。规定要求。 基础医学生化测量系统的校准南 京 43 1 1 n i Ai K nCi 100% KiK i K 1 1 1 0.1691 0.08455 2.0 A K C 1 1 100%0.1% KK K 2 2 2 0.3333 0.08342 4.0 A K C 2 2 100%1.2% KK K 3 3 3 0.5106 0.08510 6.0 A K C 3 3 100%0.7% KK K 4 4 4 0.6680 0.08600 8.0 A K C 4 4 100%1.8% KK K 5

28、 5 5 0.8329 0.08329 10.0 A K C 5 5 100%1.4% KK K 基础医学生化测量系统的校准南 京 44 12345 0.08447 5 KKKKK K 分光装置分光装置吸光度范围吸光度范围线性误差（线性误差（% %） 棱镜或光栅棱镜或光栅 0.1-0.30.1-0.35 5 0.3-0.60.3-0.64 4 0.6-0.90.6-0.95 5 结论：符合吸光度线性要求结论：符合吸光度线性要求 3.36783.3678 0.999 3.3682840 0.283633492 Sxy r SxxSyy 基础医学生化测量系统的校准南 京 45 交叉污染率交叉污染率

29、 概念：由测量系统将一个检测样品反应携带到另一个检概念：由测量系统将一个检测样品反应携带到另一个检 测样品反应的分析物不连续量，由此错误地影响了另测样品反应的分析物不连续量，由此错误地影响了另 一个检测样品的表现量。一个检测样品的表现量。 1 1、氯化钴方法、氯化钴方法 2 2、桔红、桔红G G方法方法 3 3、临床标本的检测：、临床标本的检测：50U/L50U/L与与250U/L250U/L的的ASTAST 或或ALTALT测定测定 基础医学生化测量系统的校准南 京 46 测定方法：测定方法： 将氯化钴标准溶液按仪器规定的最小样品量，先用质将氯化钴标准溶液按仪器规定的最小样品量，先用质 量浓

30、度为量浓度为2.0g/L2.0g/L的氯化钴标准溶液将比色杯冲洗三次，接的氯化钴标准溶液将比色杯冲洗三次，接 着对该溶液连续测量四次。按上述方法依次循环对着对该溶液连续测量四次。按上述方法依次循环对2.02.0和和 10.0g/L10.0g/L氯化钴标准溶液重复测得七组在氯化钴标准溶液重复测得七组在510nm510nm处的测量值处的测量值 （四组低浓度值和三组高浓度值），然后按以下公式将每（四组低浓度值和三组高浓度值），然后按以下公式将每 相邻两组值进行计算，得到三个低浓度到高浓度的计算值相邻两组值进行计算，得到三个低浓度到高浓度的计算值 和三个高浓度到低浓度的计算值，即为交叉污染率，均应和三

31、个高浓度到低浓度的计算值，即为交叉污染率，均应 1.5%1.5%。 基础医学生化测量系统的校准南 京 47 L L1 1=0.1634=0.1634；L L2 2=0.1691=0.1691；L L3 3=0.1639=0.1639；L L4 4=0.1668=0.1668 H H1 1=0.8316=0.8316；H H2 2=0.8331=0.8331；H H3 3=0.8305=0.8305 CoCoLH LH=(0.8317-0.8316)/(0.8317-0.1666) =(0.8317-0.8316)/(0.8317-0.1666)100%=0%100%=0% CoCoHL HL=

32、(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666) =(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666)100%=-0.4%100%=-0.4% 结论：交叉污染率符合要求结论：交叉污染率符合要求 123()/30.8317HHH 234()/30.1666LLL 基础医学生化测量系统的校准南 京 48 温度正确度温度正确度 用分度值小于用分度值小于0.10.1专用测温装置，测定比色杯专用测温装置，测定比色杯 的设定温度，当仪器升到设定温度范围内，每的设定温度，当仪器升到设定温度范围内，每 隔隔30s30s记录一次温度，连续测记录一次温度，连续测1010次，计算平均值。次

33、，计算平均值。 Fluke 1521Fluke 1521点温度计（点温度计（0 0.001001C C）。）。 类类级级温度准确度温度准确度 一、二一、二 A 0.1 B0.3 C0.5 基础医学生化测量系统的校准南 京 49 1 1 37.1837.18 2 2 0.182 0.182 9 9 37.0737.07 9 9 0.079 0.079 2121 37.0637.06 9 9 0.069 0.069 2929 37.1137.11 2 2 0.112 0.112 4141 37.0637.06 9 9 0.069 0.069 4949 37.0337.03 5 5 0.035 0.

34、035 6161 36.9936.99 3 3 - - 0.007 0.007 898937.069 37.069 0.069 0.069 10110137.088 37.088 0.088 0.088 11911937.053 37.053 0.053 0.053 12112137.095 37.095 0.095 0.095 12912937.125 37.125 0.125 0.125 14114136.977 36.977 -0.023 -0.023 14914937.062 37.062 0.062 0.062 15115136.811 36.811 -0.089 -0.089 15

35、915937.045 37.045 0.045 0.045 杯号杯号温度温度温度差温度差杯号杯号 温度温度温度差温度差 极差极差0.205 0.205 基础医学生化测量系统的校准南 京 50 比色杯间差距比色杯间差距 以重铬酸钾标准溶液为样本，在波以重铬酸钾标准溶液为样本，在波 长长340nm340nm，吸光度为，吸光度为0.30.30.5,0.5,以蒸馏水以蒸馏水 为空白为空白, ,每比色杯重复测定每比色杯重复测定3 3次，平均吸次，平均吸 光度值应小于光度值应小于0.050.05（Olympus)Olympus)。 基础医学生化测量系统的校准南 京 51 杯号杯号A A 杯号杯号A A杯号

36、杯号A A杯号杯号A A 1 10.4030.403 11110.40110.401121210.40160.401631310.40430.4043 2 20.40180.4018 12120.40470.404722220.40930.409332320.40310.4031 3 30.40330.4033 13130.41050.410523230.40430.404333330.41120.4112 4 40.40470.4047 14140.4050.40524240.40760.407634340.40430.4043 5 50.40880.4088 15150.40540.405

37、425250.41110.411135350.41540.4154 6 60.40890.4089 16160.40490.404926260.39640.396436360.4070.407 7 70.41260.4126 17170.40580.405827270.40410.404137370.40930.4093 8 80.40230.4023 18180.40230.402328280.40530.405338380.40810.4081 9 90.40520.4052 19190.41120.411229290.40730.407339390.4080.408 10100.4023

38、0.4023 20200.40910.409130300.4020.40240400.41460.4146 基础医学生化测量系统的校准南 京 52 杯号杯号A A 杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A 41410.41730.4173 51510.41840.418461610.40030.400371710.40520.4052 42420.41420.4142 52520.42010.420162620.40370.403772720.40530.4053 43430.41470.4147 53530.41880.418863630.40620.406273730.39890.398

39、9 44440.41340.4134 54540.40920.409264640.40380.403874740.40430.4043 45450.42130.4213 55550.40340.403465650.40450.404575750.39890.3989 46460.40660.4066 56560.40250.402566660.4030.40376760.40110.4011 47470.40250.4025 57570.41360.413667670.39810.398177770.40420.4042 48480.41150.4115 58580.40830.4083686

40、80.40190.401978780.40520.4052 49490.41920.4192 59590.41160.411669690.40370.403779790.40310.4031 50500.41320.4132 60600.40310.403170700.40460.404680800.39790.3979 基础医学生化测量系统的校准南 京 53 杯号杯号A A 杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A 81810.40140.4014 91910.40430.40431011010.40270.40271111110.40770.4077 82820.40780.4078 9

41、2920.40270.40271021020.40490.40491121120.40290.4029 83830.40220.4022 93930.40380.40381031030.40140.40141131130.4030.403 84840.40770.4077 94940.40250.40251041040.40410.40411141140.39960.3996 85850.40410.4041 95950.40430.40431051050.39920.39921151150.40230.4023 86860.40140.4014 96960.40330.40331061060

42、.40230.40231161160.40260.4026 87870.40930.4093 97970.39980.39981071070.40620.40621171170.40250.4025 88880.40490.4049 98980.40230.40231081080.40390.40391181180.40080.4008 89890.40160.4016 99990.40410.40411091090.4050.4051191190.40270.4027 90900.40720.4072 1001000.4020.4021101100.4050.4051201200.39580

43、.3958 基础医学生化测量系统的校准南 京 54 杯号杯号A A 杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A 1211210.40970.4097 1311310.40030.40031411410.40230.40231511510.4030.403 1221220.40120.4012 1321320.40430.40431421420.40580.40581521520.40350.4035 1231230.40330.4033 1331330.40640.40641431430.40540.40541531530.40450.4045 1241240.40640.4064 13413

44、40.4030.4031441440.40310.40311541540.40470.4047 1251250.4030.403 1351350.40180.40181451450.40120.40121551550.41010.4101 1261260.40390.4039 1361360.40390.40391461460.39790.39791561560.4030.403 1271270.39950.3995 1371370.40030.40031471470.39940.39941571570.40310.4031 1281280.41660.4166 1381380.40060.4

45、0061481480.41540.41541581580.40140.4014 1291290.4020.402 1391390.40260.40261491490.41240.41241591590.40490.4049 1301300.40040.4004 1401400.40410.40411501500.40120.40121601600.41160.4116 极差极差=0.4213-0.3958=0.0255=0.4213-0.3958=0.0255 基础医学生化测量系统的校准南 京 55 2.试剂的准备试剂的准备 试剂是否获准入试剂是否获准入 是否有是否有SFDA证书证书 试剂的性

46、能验证试剂的性能验证 精密度精密度 线性线性 延迟时间（如果有）延迟时间（如果有） 空白对照空白对照 3. 水的准备：用一级水水的准备：用一级水 基础医学生化测量系统的校准南 京 56 三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题 l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？ l 处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问 题？）题？） l 测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？ l 校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平

47、均K K值？值？ l 空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？ 基础医学生化测量系统的校准南 京 57 英国英国RANDOXRANDOX公司公司“人基质复合校准血清人基质复合校准血清” 以人血清为基质以人血清为基质 根据德国临床化学协会的规定赋值根据德国临床化学协会的规定赋值 由全球由全球30003000多家参考实验室赋值，每种仪器至少多家参考实验室赋值，每种仪器至少 由由1010家实验室赋值家实验室赋值 复溶条件复溶条件:20:202525,30,3

48、0分钟分钟 对对COCO2 2、ACPACP与与ALPALP有特殊要求有特殊要求 未提供不确定度未提供不确定度 所有测量系统的值均一样所有测量系统的值均一样 基础医学生化测量系统的校准南 京 58 德国德国DiaSysDiaSys公司公司“人基质复合校准血人基质复合校准血 清清” TruLab NTruLab N、 TruLab PTruLab P和和TruCal UTruCal U 以人血清为基质以人血清为基质 根据德国临床化学协会的规定赋值根据德国临床化学协会的规定赋值 复溶条件复溶条件: 25: 25,30,30分钟（分钟（ALP 2ALP 2小时）小时） 基础医学生化测量系统的校准南

49、京 59 美国美国RocheRoche公司公司 C.f.a.s (Calibrator for C.f.a.s (Calibrator for automated systems )automated systems ) 适用于适用于RocheRoche系统的系统的RocheRoche方法方法 在人基质血清中加入了人及各种动物来源的组份在人基质血清中加入了人及各种动物来源的组份 加入稳定剂加入稳定剂 在在RocheRoche规定的严格的条件下，由规定的严格的条件下，由RocheRoche的主校准的主校准 品赋值品赋值 复溶条件复溶条件:20:202525,30,30分钟分钟 基础医学生化测量系

50、统的校准南 京 60 美国美国BeckmanBeckman公司公司(Synchon Multi (Synchon Multi Calibrator )Calibrator ) 适用于适用于SynchonSynchon试剂试剂 加入稳定剂加入稳定剂 溯源至溯源至NISTNIST 液态，不需复溶液态，不需复溶 基础医学生化测量系统的校准南 京 61 美国美国Bio-RadBio-Rad公司控制品公司控制品 以人血清基质以人血清基质 可任选液体可任选液体/ /干粉、定值干粉、定值/ /不定值产品不定值产品 液体不含甘油和乙二醇液体不含甘油和乙二醇 提供任何仪器提供任何仪器/ /试剂的定值试剂的定值

51、多个品种、包装、浓度可供选择多个品种、包装、浓度可供选择 美国美国FDAFDA认证认证 基础医学生化测量系统的校准南 京 62 某国产检测系统（某国产检测系统（X X）分别与罗氏）分别与罗氏C.fas C.fas 校准品校准品(Y1)(Y1)、与朗、与朗 道道Level2Level2校准品校准品(Y2)(Y2)、与朗道、与朗道Level3Level3校准品校准品(Y3)(Y3)比较比较 基础医学生化测量系统的校准南 京 63 三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题 l 校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？ l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶

52、间差问题？低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？ 加溶剂的准确性）加溶剂的准确性） l 测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？ l 校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？ l 空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？ 基础医学生化测量系统的校准南 京 64 x %CV CKCK 校准校准测定测定 天数天数s1ABss1ABsK KK K

53、* * 1 13 35685856858 571325713257506575065728257282 2 23 35816358163 596945969459643596435938759387 3 33 35377453774 540575405753916539165363253632 4 44 45415754157 551785517854608546085437154371 5636756367 s s23542354 4.2%4.2% 室温复溶条件下校准室温复溶条件下校准CKCK 基础医学生化测量系统的校准南 京 65 x %CV CKCK 校准校准测定测定 天数天数s1ABs

54、s1ABsK KK K* * 1 14 45547455474557175571755961559615610756107 2 24 45547455474557425574255255552555525555255 3 33 35574655746567975679756577565775601556015 4 43 35547455474555965559655182551825506055060 5577255772 s s550550 1.0%1.0% 标准化复溶条件下校准标准化复溶条件下校准CKCK （置于（置于18182020水温下复溶水温下复溶30305min5min） 基础医学

55、生化测量系统的校准南 京 66 校准品处理的注意点校准品处理的注意点 必须将复溶条件标准化。虽不会对所有被测物必须将复溶条件标准化。虽不会对所有被测物 产生影响，但对产生影响，但对CKCK、脂蛋白会产生较大影响。、脂蛋白会产生较大影响。 应有严格应有严格SOPSOP。 加样的重复性加样的重复性（0.4%0.4%） 是否有瓶间差，值得研究是否有瓶间差，值得研究（0.5%0.5%） 注意排除离群值。注意排除离群值。 严格控制校准条件，将严格控制校准条件，将K K值值CVCV控制在控制在1%1%内内。（制（制 定校准的标准）定校准的标准） 基础医学生化测量系统的校准南 京 67 x %CV LDHL

56、DH 校准校准测定测定 天数天数s1Abss1AbsK KK K* * 1 12 28903589035900889008890746907469048290482 2 21 18864688646888648886488995889958912689126 3 32 28903589035903079030790088900888995689956 4 42 28864688646881668816686331863318807888078 8953689536 s s930930 1.0%1.0% 标准化复溶条件下校准标准化复溶条件下校准LDHLDH 差差.6%.6% 基础医学生化测量系统

57、的校准南 京 68 三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题 l 校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？ l 处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问 题？）题？） l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？ l 校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？ l 空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准的核查：是否

58、有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？ 基础医学生化测量系统的校准南 京 69 在在ISO 11095:1996 ISO 11095:1996 基于标准样品的线性校准基于标准样品的线性校准 （GB/T 22554-2010 GB/T 22554-2010 ）中确定，对于基本校准方）中确定，对于基本校准方 法的最少校准点法的最少校准点/ /水平是水平是3 3个。个。 EURACHEM “EURACHEM “分析方法的目标适用性分析方法的目标适用性”指南规定：指南规定： 对于校准，包括空白至少对于校准，包括空白至少6 6个浓度水平。个浓度水平。 Commission Decision 2002/

59、657/ECCommission Decision 2002/657/EC规定：建立规定：建立 一个校准曲线，包括零浓度至少需要一个校准曲线，包括零浓度至少需要5 5个浓度水平。个浓度水平。 基础医学生化测量系统的校准南 京 70 ISO 11095:1996 ISO 11095:1996 认为校准系统的有效性检查，至认为校准系统的有效性检查，至 少有少有2 2个、最好是个、最好是3 3个校准水平通过控制图监控校个校准水平通过控制图监控校 准的有效性。准的有效性。 基础医学生化测量系统的校准南 京 71 三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题 l 校准品校准品：是否可溯源？配套？

60、互换性？是否可溯源？配套？互换性？ l 处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问 题？）题？） l 测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？ l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？ l 空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？ l 校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？ 基础医学生化测量系统的校准南 京 72 x %CV LDHLDH 校