DNA提取中各种实验试剂作用原理

1、DNA提取中各种实验试剂作用原理1、STE是Tris-Hcl 、EDTA Nacl的混合液。其总体作用是为 DNA提供保护环境，在此环 境下DNA可以呈稳定态，最少限度地受到破坏。提供缓冲体系，DNA在这一体系中呈稳定态。EDTA是DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNANaCl，有利于DNA的溶解。2、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate ）使DNA与蛋白质分离，在高温（5565C）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀

2、，3、 苯酚的作用：使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2.抑制了 DNase的降解作用。缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分 poly （A） RNA 2.不能完全抑制 RNase的 活性。Tris 酚的颜色，一般为黄色。如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。4、氯仿的作用 克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 （酚易溶于氯仿中）5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程

3、中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。6、用乙醇沉淀 DNA时，为什么加入单价的阳离子用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，女口NaCl或NaAc, Na冲和DNA分子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。7、为什么在保存或抽提 DNA过程中，一般采用 TE缓冲液在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑 DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作 用。磷酸盐缓冲系统（pKa=）和硼酸系统（pKa=）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围（pH）

4、，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3（PO4）2沉淀，在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高 离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCI （ pKa=）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris ，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用 Tris-HCI系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。8、 STE是Tris-Hcl 、EDTA Nacl的混合液。其总体作用是为 DNA提供保护环境，在此环 境下DNA可以呈稳定态，最少限度地受到破坏。提供缓冲体系，DNA在这一体系中呈稳定态。EDTA

5、是DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNANaCl，有利于DNA的溶解。9、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate ）使DNA与蛋白质分离，在高温（5565C）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，10、 苯酚的作用：使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1.有效变性

6、蛋白质；2.抑制了 DNase的降解作用。缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分 poly （A） RNA 2.不能完全抑制 RNase的 活性。Tris 酚的颜色，一般为黄色。如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。11 、氯仿的作用克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 （酚易溶于氯仿中） 5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少 气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。12、用乙醇沉淀 DNA寸，为什么加入单价的阳离子用乙醇沉淀DNA时

7、，通常要在溶液中加入单价的阳离子，女口NaCl或NaAc, Na冲和DNA分子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。Tris中文品名 : 三羟甲基氨基甲烷 ; 氨基丁三醇 ; 缓血酸胺Tris 结构式英文品名 : Tris; Tris(Hydroxymethyl)aminomethane英文别名 : 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediolTHAM; Tris base; Trometamol通用 CAS : 77-86-1产品纯度：100%(USP药典级)/ %(实验室技术级)产品级别：USP药典级，符合USP/EP/cG

8、MP寸药物赋形剂的要求分 子 式： NH2C(CH2OH)3分 子 量：使用用途 ： 生物制药 ， 体外诊断 ， 个人护理及化妆品原料等保存温度 ： 常温密封避光保存TRIS是一种最常用的生物缓冲液，常配成PH值为，,，其PH值随温度变化很大。 一般来说，温度每升高一度，PH值下降。1M TRIS-HCl 和 1.5M TRIS-HCl 是 SDS-PAGEt常用的试剂。而由TRIS配成的TAE TBE等是DNA电泳最常用的试剂，TE()主要用于溶解 DNATE为Tris 力口 EDTA合称。缓冲特性：Tris为弱碱，在室温(25 C )下，它的为；根据缓冲理论， Tris缓冲液的有效 缓冲范

9、围在到之间。Tris碱的水溶液pH在左右，一般加入盐酸以调节 pH值至所需值，即 可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响。衍生缓冲液：由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入 EDTA制成“ TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定 和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“ TAE缓冲液” (Tris/Acetate/EDTA ), 而换成硼酸则获得“ TBE 缓冲液”( Tris/Borate/EDTA )。这两种缓冲液通常用于核酸电泳 实验中。制备： Tris 可以由两步反应生成： 先由硝基甲烷生成中 间 体三羟甲基硝基甲烷 (HOCH2)3CNO)，然后再由该中间体还原得到Tris。用途： Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris 被用