医学细胞设计性实验报告课件

1、医学细胞设计性实验报告1 医学细胞生物学设计医学细胞生物学设计 性实验报告性实验报告 医学细胞设计性实验报告2 实验项目一：动物细胞融合实验项目一：动物细胞融合 实验原理实验原理 两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细 胞的过程成为胞的过程成为 。在通常情况下，两个细胞接触并不会发生融合现。在通常情况下，两个细胞接触并不会发生融合现 象。因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜象。因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜 发生一定变化，就可以促进两个或多个细胞聚集，

2、相接触的细胞膜之间融合，发生一定变化，就可以促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合， 继而细胞质融合，形成一个大的融合细胞，在自然界的继而细胞质融合，形成一个大的融合细胞，在自然界的 就是细胞融合就是细胞融合 的过程。的过程。 医学细胞设计性实验报告3 目前，细胞融合的诱导物种类很多，常用的主要有灭活的仙台病毒，目前，细胞融合的诱导物种类很多，常用的主要有灭活的仙台病毒， 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得，）和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得， 简单，且融合效果稳定。简单，且融合效果稳定。 医学细胞设计性实验报告4 医学细

3、胞设计性实验报告5 医学细胞设计性实验报告6 实验用品实验用品 （1).1).材料：鸡血材料：鸡血 。 （2).2).试剂：试剂：HanksHanks液液, ,PEGPEG溶液溶液(MV=400)(MV=400)，16401640液（含液（含10%10%灭活灭活 小牛血清和不含血清的两种），小牛血清和不含血清的两种），0.85%0.85%生理盐水，生理盐水，0.2%0.2%次甲基蓝染次甲基蓝染 (3). (3).仪器设备：显微镜仪器设备：显微镜(800r/min)(800r/min)，离心机，水浴箱，酒精，离心机，水浴箱，酒精 灯，吸管，载玻片、盖玻片，滤纸。灯，吸管，载玻片、盖玻片，滤纸。

4、医学细胞设计性实验报告7 混合液离心混合液离心 ( (800800r/minr/min离心离心) ) 8ml hanks8ml hanks 液混匀液混匀 实验步骤实验步骤 8min 静置静置1min1min后后 3737水浴水浴 PEG溶液溶液 热的热的1640 液混匀液混匀 37水浴水浴 保温保温 悬浮悬浮 离心离心 洗涤洗涤 流尽剩余液流尽剩余液 体体 鸡血鸡血 10%悬悬 液液 融化 冷却 至 50 90S内 医学细胞设计性实验报告8 加入加入 Hanks液液 含小牛含小牛 血清的血清的 1640液液 0.2%0.2%次甲基次甲基 蓝染染液染蓝染染液染 色色 镜检镜检 37水浴水浴 5m

5、in 离心弃上清离心弃上清 10min 吸纸吸干吸纸吸干 37水浴 水浴 孵育孵育30min 医学细胞设计性实验报告9 注意事项注意事项 1. 1.制备制备50%PEG50%PEG一定要保温在一定要保温在3737水浴中，不然冷却后会有结水浴中，不然冷却后会有结 晶析出。晶析出。 2. 2.在离心管中加在离心管中加PEGPEG之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流 尽液体，否则残留液会改变尽液体，否则残留液会改变PEGPEG的浓度。的浓度。 3. 3.融合过程观察：分别于温育融合过程观察：分别于温育5min5min、10min10min、20min20min、3

6、0min30min 取细胞悬液一滴制成临时装片。取细胞悬液一滴制成临时装片。 两个细胞核发生两个细胞核发生 ，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。 医学细胞设计性实验报告10 医学细胞设计性实验报告11 细胞融合过程细胞融合过程 医学细胞设计性实验报告12 实验项目二：细胞核的分离与鉴定 细胞核。 细胞内各种结构的比重和大小都不 相同，在同一离心场内的沉降速度也不 同，用不同的转速和不同的介质离心， 就可以将细胞内各组分分级分离出来。 细胞核的分离就是利用了细胞核 的比重大小与细胞内其他组分不同，先 将组织制成匀浆，再在悬浮的均匀介质 中进行离心，分离，甲

7、苯胺蓝又可以将 细胞核染成蓝紫色，这样，就可以鉴别 分离出来的细胞核。 医学细胞设计性实验报告13 实验用品实验用品： 材料：小白鼠 试剂：生理盐水,0.25mol/L蔗糖， 0.003mol/L氯化钙溶液，1%甲苯胺蓝染液 仪器设备：显微镜，普通离心机，天平， 离心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml烧 杯，解剖剪，镊子，冲洗瓶，纱布，伯乐 均浆器，载玻片，盖玻片，染色盘架 医学细胞设计性实验报告14 实验步骤： 断头处死 小白鼠 迅速开腹 取肝 加8ml预冷的 0.25mol/L蔗糖 0.003mol/L绿化高 永液于烧杯中， 将剪碎的肝组织倒入 玻璃匀浆器，是匀浆 器下端侵入盛有冰块 的器皿。 尽量剪碎 肝组织， 取1克放入 烧杯中 医学细胞设计性实验报告15 左手握持匀浆器 右手将匀浆捣杆 垂直插入管中匀 浆，直至看不到 明显的组织块 过滤匀浆液于 离心管中 离心 取上清液制 一张涂片1 将原离心管中 剩余上清液吹 打成沉淀成悬 液另制涂片2 滴染甲 苯胺蓝 染液 滴染甲 苯胺蓝 染液 镜 检 医学细胞设计性实验报告16 注意事项： 1.操作规范，防止试剂污染。 2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。 3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。 预期结果： 低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已 游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有2到4个甚 至更多个深蓝色的核仁。