流式细胞仪结果分析

1、第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用 一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析 三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型 四、肿瘤耐药相关蛋白分析四、肿瘤耐药相关蛋白分析 五、五、AIDSAIDS病检测中的应用病检测中的应用 六、自身免疫性疾病相关六、自身免疫性疾病相关HLAHLA抗原分析抗原分析 七、移植免疫中的应用七、移植免疫中的应用 思考题思考题 小结小结 流式细胞术流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式是以流式 细胞仪为检测手段的一项

2、能快速、精确的对细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对 单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分 选的新技术。选的新技术。 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及 细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下， 通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种 信号对细胞进行定量分析或纯化分选。信号对细胞进行定量分析或纯化分选。 细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量 流式细胞术的特点流式细胞术的特点

3、流式细胞仪流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧是测量染色细胞标记物荧 光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分 析和分选基础上发展起来的对细胞的物析和分选基础上发展起来的对细胞的物 理或化学性质（如大小、内部结构、理或化学性质（如大小、内部结构、 DNADNA、RNARNA、蛋白质、抗原等）进行快速、蛋白质、抗原等）进行快速 测量并可分类收集的高技术。测量并可分类收集的高技术。 第一节第一节 概述概述 细胞组成细胞组成细胞功能细胞功能 大小大小细胞表面细胞表面/ /胞浆胞浆/ /核核-特异性抗原特异性抗原 粒度粒度细胞活性细胞活性 DNA, RNADNA, RNA含量含

4、量胞内细胞因子胞内细胞因子 蛋白质含量蛋白质含量激素结合位点激素结合位点 钙离子钙离子, PH, PH值值, , 膜电位膜电位酶活性酶活性 流式细胞仪常检测的细胞特性流式细胞仪常检测的细胞特性 采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发 效率；效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检 测的灵敏度和特异性；测的灵敏度和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数 信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分

5、析精确信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确 性。性。 一、工作原理一、工作原理 （1 1） 液流系统液流系统 （2 2） 光学系统光学系统 （3 3） 数据处理系统数据处理系统 1.流式细胞仪的基本结构：流式细胞仪的基本结构： 由样本和鞘液组成由样本和鞘液组成 待测细胞待测细胞 单个细胞的悬液单个细胞的悬液 荧光染料标记的荧光染料标记的 单抗对其染色单抗对其染色 受清洁气体压力受清洁气体压力 从样品管进从样品管进 入流动室形成样本流入流动室形成样本流 鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是 包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处

6、于喷嘴中心包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心 位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 （1）液流系统）液流系统 喷嘴喷嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液鞘液 液流系统示意图液流系统示意图 FCMFCM的液流系统（如的液流系统（如 何形成单个细胞流）何形成单个细胞流） 样本管样本管 鞘液管鞘液管 激光光源：气冷式氩离子激光器激光光源：气冷式氩离子激光器 分色反光镜：反射长分色反光镜：反射长/ /短波长，通过短短波长，通过短/ /长长 波长波长 光束成形器：两十字交叉放置的透镜光束成形器：两十字交叉放置的透

7、镜 透镜组：形成平行光，除去室内光透镜组：形成平行光，除去室内光 滤片：长通、短通、带通滤片：长通、短通、带通 光电倍增管：光电倍增管：FS, SSFS, SS（散射光），（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4FL1, FL2, FL3, FL4（荧光）（荧光） （2）光学系统）光学系统 FlowFlow TipTip LaserLaser SS and FLSS and FL DetectorDetector FS DetectorFS Detector 光学系统示意图光学系统示意图 主要由计算机及其软件组成主要由计算机及其软件组成 （3）数据处理系统）数据处理系统 基本工作原理

8、基本工作原理 单细胞液柱 已标记的单细 胞悬液和鞘液 硅化管 流动室喷嘴 荧光检测系统和 散射光感受系统 收集光信号 荧光染料被 激发发光 光电倍增管 脉冲信号 计算机系统 分析结果 放大 垂直相交 形成稳态水平激光与之 基本过程基本过程 区别区别流式细胞仪流式细胞仪显微镜显微镜 光源光源激光激光自然光、灯光自然光、灯光 对象对象细胞、生物粒子细胞、生物粒子细胞、组织等细胞、组织等 承载工具承载工具鞘液及流动室鞘液及流动室载玻片载玻片 检测信号检测信号光学信号光学信号形态及染色形态及染色 放大方式放大方式PMTPMT、放大电路、放大电路目镜目镜物镜、光学放大物镜、光学放大 统计统计计算机，计算

9、机，50005000人工，人工，200200 结果结果多参数，综合分析多参数，综合分析简单，单参数简单，单参数 流式细胞仪与显微镜的区别流式细胞仪与显微镜的区别 细胞在液柱中与激光束相交时细胞在液柱中与激光束相交时 向周围向周围360立体角方向散射的光线立体角方向散射的光线 信号，它的强弱与细胞的大小、形信号，它的强弱与细胞的大小、形 状、胞内颗粒折射等有关，主要分状、胞内颗粒折射等有关，主要分 为为前向散射光前向散射光和侧向散射光侧向散射光。 二、散射光的测定二、散射光的测定 前向散射光前向散射光（forward scatter, forward scatter, FSFS）：激光束照射细胞

10、时，光激光束照射细胞时，光 以相对轴较小角度以相对轴较小角度(0.5(0.51010) )向前方散射的讯号用于检测细向前方散射的讯号用于检测细 胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意图前向散射光示意图 侧向散射光（侧向散射光（side scatter, SSside scatter, SS）：）：激光束照射细激光束照射细 胞时，光以胞时，光以9090角散射的讯号，用于检测细胞角散射的讯号，用于检测细胞内部内部 结构属性。结构属性。 FALS Sensor 90LS Sensor La

11、ser 侧向散射光侧向散射光示意图示意图 测得的测得的FSFS与与SSSS信信 号通过计算机处理，号通过计算机处理， 可得到可得到FS-SSFS-SS图，由图，由 此可仅用散射光信号此可仅用散射光信号 对未染色的活细胞进对未染色的活细胞进 行分析或分选。行分析或分选。 此为血细胞分类此为血细胞分类 的基本原理，但不能的基本原理，但不能 分析表面分子。分析表面分子。 淋巴细胞淋巴细胞 单核细胞单核细胞 中性粒细胞中性粒细胞 光散射测量最有效用途：光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群从非均一群体中鉴别出某些亚群 荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激荧光信号由被检细胞上标记的特

12、异性荧光染料受激 发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过 波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧 光信号区分开，送入不同的光电倍增管。光信号区分开，送入不同的光电倍增管。 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的 多个不同特征。多个不同特征。 线性放大器和对数放大器线性放大器和对数放大器 三、荧光测量三、荧光测量 荧光染料的特性荧光染料的特性 激发波长激发波长(E

13、XCITING)(EXCITING) 发射波长发射波长(EMISSION)(EMISSION) 荧光补偿荧光补偿 通过流式细胞仪进行细胞分选通过流式细胞仪进行细胞分选 主要是在对具有某种特征的细胞需主要是在对具有某种特征的细胞需 进一步培养和研究时进行的。进一步培养和研究时进行的。 四、细胞分选原理四、细胞分选原理 细胞悬液形成液流柱细胞悬液形成液流柱 流动室振动流动室振动 液流断裂成液滴液流断裂成液滴 空白液滴空白液滴含细胞的液滴含细胞的液滴 弃去弃去 偏转落入收集器偏转落入收集器 压电晶体压电晶体产生产生机械振动机械振动 不充电不充电充电充电 （一）分选基本原理（一）分选基本原理 分选速度

14、：分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬单位时间内分选的细胞数量。与悬 液中细胞的含量成正比。液中细胞的含量成正比。 分选纯度：分选纯度：分选出的目的细胞占所有收获细胞分选出的目的细胞占所有收获细胞 的百分率。的百分率。 分选收获率：分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过实际收获的分选细胞与设定通过 测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。 分选得率：分选得率：从一群体细胞悬液中分辨出目的细从一群体细胞悬液中分辨出目的细 胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。 与分选速度成反比。与分选速度成反比。

15、 （二）分选的技术要求（二）分选的技术要求 参数：参数：FS,SS,FLFS,SS,FL 数据显示方式数据显示方式 （单参数直方图（单参数直方图 、双、双 参数散点图参数散点图 、二维等高图、二维等高图 、假三维、假三维 等高图等高图 、三参数散点图、三参数散点图 ） 设门分析技术设门分析技术 第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析 FSFS：反映颗粒的大小：反映颗粒的大小 SSSS：反映颗粒的内部结构复杂程度：反映颗粒的内部结构复杂程度 FLFL：反映颗粒被染上的荧光数量多少：反映颗粒被染上的荧光数量多少 一、一、 参数参数 单参数直方图单参数直方图 双参数直方图双参数直方图: :点

16、图点图 二维等高图二维等高图 假三维等高图假三维等高图 三参数直方图三参数直方图 多参数分析多参数分析 直分析方图直分析方图 设门分析设门分析: :REGION和和GATE设置设置 二、数据显示方式二、数据显示方式 由一维参数由一维参数( (散射光或荧光散射光或荧光) )与颗粒计数与颗粒计数 (COUNT)构成，反映同样散射光或荧光构成，反映同样散射光或荧光 强度的颗粒数量的多少。强度的颗粒数量的多少。 （一）单参数直方图（一）单参数直方图 单参数直方图单参数直方图 细胞相对数量细胞相对数量 信道信道 (channel(channel ) ) 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测双参数直方图：

17、纵轴和横轴分别代表被测 量细胞的两个测量参数，根据这两个参数量细胞的两个测量参数，根据这两个参数 就可以确定细胞在图上的表达位置。就可以确定细胞在图上的表达位置。 双参数信号双参数信号通常采用对数信号，最常用的通常采用对数信号，最常用的 是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，是点密图，在图中，每个点代表一个细胞， 点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光 强度的颗粒数量的多少。强度的颗粒数量的多少。 （二）双参数直方图（二）双参数直方图 1.双参数直方图点图双参数直方图点图 绿色荧光强度绿色荧光强度 红色荧光强度红色荧光强度 双参数直方图点图双参数直方图点图 2

18、. 二维等高图二维等高图 由类似地图上的等高线组成，其本质也是由类似地图上的等高线组成，其本质也是 双参数直方图。双参数直方图。 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细等高图上每一条连续曲线上具有相同的细 胞相对或绝对数，即胞相对或绝对数，即“等高等高”。 曲线层次越高曲线层次越高( (越里面的线越里面的线) ) 所代表的细胞所代表的细胞 数愈多。数愈多。 等高线越密集则表示细胞数变化率越大。等高线越密集则表示细胞数变化率越大。 二维等高图二维等高图 3. 假三维等高图假三维等高图 （三）三参数直方图（三）三参数直方图 多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激

19、 发光激发后，得到的荧光信号和散射光信发光激发后，得到的荧光信号和散射光信 号可根据需要进行组合分析。号可根据需要进行组合分析。 （四）流式细胞仪的多参数分析（四）流式细胞仪的多参数分析 Gate Gate设置：指在某一张选定参数的直设置：指在某一张选定参数的直 方图上，根据该图的细胞群分布选定方图上，根据该图的细胞群分布选定 其中想要分析的特定细胞群，并要求其中想要分析的特定细胞群，并要求 该样本所有其他参数组合的直方图只该样本所有其他参数组合的直方图只 体现这群细胞的分布情况。体现这群细胞的分布情况。 根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆 形门、多边

20、形门、任意形状门和十字门。形门、多边形门、任意形状门和十字门。 三、设门分析技术三、设门分析技术 A A 淋巴细胞淋巴细胞 B B 单核细胞单核细胞 C C 中性粒细胞中性粒细胞 A A、B B、C C均均 为任意门为任意门 线性门线性门 Region设置设置: 区阈（区阈（region, R）与门）与门(gate, G ) 是两个是两个 相关的概念，区阈可与门对应，但是也相关的概念，区阈可与门对应，但是也 可以包含于门。可以包含于门。 D1 CD4+/CD3- D2 CD4+/CD3+ D3 CD4- /CD3- D4 CD4- /CD3+ 如十字门分析时，起如十字门分析时，起 就可以由四个

21、区域构就可以由四个区域构 成，即成，即 G=D1+D2+D3+D4。 样本制备样本制备 标记染色标记染色 液相芯片技术液相芯片技术 质量控制质量控制 第四节第四节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求 外周血淋巴细胞样品的制备外周血淋巴细胞样品的制备 分离单个核细胞分离单个核细胞 培养细胞的样品制备培养细胞的样品制备 蛋白酶消化蛋白酶消化 机械吹打机械吹打 使贴壁细胞脱落使贴壁细胞脱落 洗涤洗涤 尼龙网过滤尼龙网过滤 单细胞悬液单细胞悬液 一、免疫检测样品制备一、免疫检测样品制备 新鲜实体组织单细胞悬液的制备新鲜实体组织单细胞悬液的制备 机械法机械法 酶处理法酶处理法 化学

22、试剂处理法化学试剂处理法 表面活性剂处理法表面活性剂处理法 单细胞悬液的保存单细胞悬液的保存 深低温保存法（一年）深低温保存法（一年） 乙醇或甲醇保存法（乙醇或甲醇保存法（2 2周）周） 甲醛或多聚甲醛保存法（甲醛或多聚甲醛保存法（2 2月）月） 适用条件适用条件: : 有较高的量子产额和消光系数有较高的量子产额和消光系数 对对488nm488nm的激发光波长有较强的吸收的激发光波长有较强的吸收 发射光波长与激发光波长间有较大的波长差发射光波长与激发光波长间有较大的波长差 易与标记单抗结合而不影响抗体的特异性易与标记单抗结合而不影响抗体的特异性 二、常用的荧光染料与标记染色二、常用的荧光染料与

23、标记染色 FITCFITC Texas redTexas red PE.PC.APCPE.PC.APC PEcy5PEcy5 FL1 FL2 FL3 FL4 激光激光 细细 胞胞 悬悬 液液 异硫氰酸荧光素异硫氰酸荧光素 得州红得州红 能量传递复合染料能量传递复合染料 藻胆蛋白类藻胆蛋白类 （一）几种常见的荧光染料（一）几种常见的荧光染料 名称名称染料染料激发激发 波长波长 荧光颜荧光颜 色色 溶解性溶解性对对PHPH敏感敏感 性性 特点特点 异硫氰酸荧异硫氰酸荧 光素光素 FITCFITC488488绿绿 525525 易易敏感敏感易溶于水，与抗体结易溶于水，与抗体结 合不影响特异性合不影响

24、特异性 得州红得州红Texas Texas redred 568568红红 615615 不易不易不敏感不敏感稳定，偶联后量子产稳定，偶联后量子产 额低额低 藻红蛋白藻红蛋白PEPE488488橙橙 575575 易易不敏感不敏感具较多发光基团，消具较多发光基团，消 光系数和量子产额高光系数和量子产额高 藻青蛋白藻青蛋白PCPC488488 别藻青蛋白别藻青蛋白APCAPC633633红红 670670 能量传递复能量传递复 合染料合染料 PEcy5PEcy5488488红红 670670 易易不敏感不敏感减少交叉，成本高减少交叉，成本高 常用的几类荧光染料常用的几类荧光染料 用化学法将两种不

25、同激发波长的染料用化学法将两种不同激发波长的染料 结合在一起，在结合在一起，在488nm488nm激发光照射下，通过激发光照射下，通过 一个荧光染料被激发后产生的发射波长再一个荧光染料被激发后产生的发射波长再 激发另一荧光染料产生荧光信号，从而检激发另一荧光染料产生荧光信号，从而检 测到该特定荧光信号。测到该特定荧光信号。 能量传递复合染料能量传递复合染料 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 红色荧光 花青苷花青苷5 5 藻红蛋白藻红蛋白 能量传递复合染料机制能量传递复合染料机制 荧光染料与细胞成分的四种结合方式荧光染料与细胞成分的四种结合方式 结构亲和式结构亲和

26、式 嵌入结合嵌入结合 共价键结合共价键结合 荧光标记抗体特异性结合荧光标记抗体特异性结合 免疫荧光标记方法免疫荧光标记方法 直标直标: :干扰少干扰少, ,但需购买多种单抗但需购买多种单抗 间标间标: :步骤多步骤多, ,干扰多干扰多, ,不需标记多种抗体不需标记多种抗体 组合标记组合标记 （二）免疫荧光标记（二）免疫荧光标记 免疫胶乳颗粒的应用即液相芯片技术免疫胶乳颗粒的应用即液相芯片技术是把微小是把微小 的乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把的乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把 针对不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标针对不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标 本，在悬液中与微粒进行特

27、异性地结合，经激本，在悬液中与微粒进行特异性地结合，经激 光照射后不同待测特产生不同颜色，并可进行光照射后不同待测特产生不同颜色，并可进行 定量分析。因检测速度极快，所以又有定量分析。因检测速度极快，所以又有“液相液相 芯片芯片”之称之称 。 三、免疫胶乳颗粒技术的应用三、免疫胶乳颗粒技术的应用 微小的乳胶微球分别染成上百微小的乳胶微球分别染成上百 种不同的荧光色（固相芯片是种不同的荧光色（固相芯片是 用探针在芯片上的坐标位置给用探针在芯片上的坐标位置给 基因的特异性编码；而液相芯基因的特异性编码；而液相芯 片则是用颜色来编码）片则是用颜色来编码） 通过对标记不同荧光素分子的检测，实通过对标记

28、不同荧光素分子的检测，实 现现FCMFCM对可溶性物质的定量分析对可溶性物质的定量分析 适当的制备方式适当的制备方式 处理红细胞处理红细胞 实体组织来源标本用机械法实体组织来源标本用机械法 温度温度25253737，pH7.0pH7.07.27.2 四、流式细胞免疫学技术的质量控制四、流式细胞免疫学技术的质量控制 （一）单细胞悬液制备的质控（一）单细胞悬液制备的质控 温度温度 pHpH 染料浓度染料浓度 固定剂固定剂 （二）免疫荧光染色的质控（二）免疫荧光染色的质控 光路与流路校正光路与流路校正: : 确保激光光路与样品确保激光光路与样品 流处于正交状态，减少变异（流处于正交状态，减少变异（C

29、VCV）。）。 PMTPMT（光电倍增管）校准（光电倍增管）校准: : 保证样品检测保证样品检测 时仪器处于最佳灵敏度工作状态。时仪器处于最佳灵敏度工作状态。 绝对计数校准绝对计数校准: : 保证计数的准确性。保证计数的准确性。 （三）仪器操作的质控（三）仪器操作的质控 同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照，同型对照：即免疫荧光标记中的阴性对照， 选用相同源性的选用相同源性的未标记单抗未标记单抗作为对照调整和作为对照调整和 设置电压，以保证特异性。设置电压，以保证特异性。 全程质量控制：与待测标本一起标记和检测，全程质量控制：与待测标本一起标记和检测， 结果达靶值，提示本次实验结果可靠。结果达

30、靶值，提示本次实验结果可靠。 （四）免疫检测的质控（四）免疫检测的质控 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学 基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式 细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析， 可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增 加了有效的手段和帮助。加了有效的手段和帮助。 第四节第四节 在免疫学检验中的应用在免疫学检验中的应用 T T淋巴细胞及其亚群分析淋巴细胞及其亚群分析 Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4

31、-CD8+T) B淋巴细胞及其亚群分析淋巴细胞及其亚群分析 B1(CD19+CD5+):产生产生IgM型自身抗体型自身抗体, 参与免疫调节、与自参与免疫调节、与自 身免疫病的发生有关身免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗体产生高亲和性特异性抗体 NK细胞分析细胞分析 NK(CD3-CD16+CD56+) 一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析 细胞介导细胞毒性试验细胞介导细胞毒性试验( (死细胞与活细胞比例死细胞与活细胞比例) ) 细胞内细胞因子测定细胞内细胞因子测定 二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析 三、淋巴

32、造血系统及白血病免疫分型三、淋巴造血系统及白血病免疫分型 对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型 用于选择化疗方案、判断预后及检出微小用于选择化疗方案、判断预后及检出微小 残留病变残留病变 CD4+Th细胞、细胞、CD4+/CD8+比例比例 MDR(+)表示对化疗药物耐药表示对化疗药物耐药 四、肿瘤耐药基因分析四、肿瘤耐药基因分析 五、五、AIDS病检测中的应用病检测中的应用 HLA-B27可出现在可出现在58%97%的强直的强直 性脊椎炎性脊椎炎(As) 患者患者 六、自身免疫病相关六、自身免疫病相关HLA抗原分析抗原分析 FCM作为一个强大的技术平台，已应用于多作

33、为一个强大的技术平台，已应用于多 个领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越个领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越 广泛。目前移植免疫中的广泛。目前移植免疫中的FCM应用主要包括流应用主要包括流 式细胞术的交叉配型（式细胞术的交叉配型（Flow cytometry cross- matching, FCXM）和群体反应性抗体（）和群体反应性抗体（Panel reactive antibody, PRA）检测。）检测。 七、移植免疫中的应用七、移植免疫中的应用 思考题思考题 1. 流式细胞仪的分析检测原理是什么？流式细胞仪的分析检测原理是什么？ 2. 流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光和荧光

34、的检流式细胞仪分析中前向散射光、侧向散射光和荧光的检 测意义。测意义。 3. 何谓荧光补偿？何谓何谓荧光补偿？何谓“液相芯片液相芯片”技术？技术？ 4. 细胞分选的基本原理。细胞分选的基本原理。 5. FCM分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设分析中有哪些数据显示方式，如何解读结果及其设 门分析的意义？门分析的意义？ 6. 如何进行如何进行FCM分析检测样品的制备？分析检测样品的制备？ 7. 流式细胞分析前如何验证仪器工作状态，采用何种校正流式细胞分析前如何验证仪器工作状态，采用何种校正 物？物？ 8. 流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面？流式细胞免疫分析的质量控制包括哪些方面？ 9. 流式细胞术有哪些临床应用价值？流式细胞术有哪些临床应用价值？ 10. 流式细胞仪分析中常见的荧光素有那些？他们的特性如流式细胞仪分析中常见的荧光素有那些？他们的特性如 何？何？ 小小 结结 流式细胞术（流式细胞术（FCM）是在保持细胞及细胞器或微粒的结构）是在保持细胞及细胞器或微粒的结构 及功能不被破坏的状态下，从分子水平上获取多种信号实现及功能不被破坏的状态下，从分子水平上获取多种信号实现 对单个细胞进行定量分析或纯化分选。对单个细胞进行定量分析或纯化分选。 FCM分析中前向散射光反映颗粒的大小；