实验一_几种光学显微镜的使用.

1、实验一 几种光学显微镜的使用 一一. .实验目的实验目的 1.了解几种光学显微镜的 结构、工作原理、主要 用途和使用方法 2.掌握使用普通显微镜提 高分辨力的方法 二二. .实验原理实验原理 基本原理基本原理 几种光学显微镜几种光学显微镜 普通光学显微镜普通光学显微镜 普通光学显微镜也叫复式 显微镜，它适用于观察一 般的固定的，有色的透明 度较高的标本。其最大分 辨率一般为0.2微米，从构 造上可分为光学、机械和 电子三大系统。 暗视野显微镜暗视野显微镜 暗视野显微镜是以丁达尔现象 为基础设计的，它使用了特殊 的聚光器进行斜射照明，因光 源中心束不直入物镜，所以视 野黑暗，而被检细胞器因斜射

2、照明发生衍射和反射，所以发 亮可见。 暗视野显微镜适用于观察物体的 存在与运动 相差显微镜相差显微镜 相差显微镜是以光的干涉现象 为基础设计的。它用装有环状 光栏的聚光器造成的空心光线 柱，使直射光和衍射光发生干 涉，从而把我们肉眼不能看见 的相位差变为可见的振幅差， 同时相位板上装有吸收膜，吸 收部分直射光以增加反差 相差显微镜一般用于观察活的 细胞的细微结构 如何提高分辨率如何提高分辨率 数片孔径数片孔径 数片孔径也叫镜口率，是物镜和被 检样品之间的介质的折射率与物镜 所接受的光锥顶角的一半的正弦的 乘积。 公式：N.A.=nsin 物镜的数值孔径愈大，显微镜的能 力就愈强。数值孔径与分辨

3、率成正 比，与焦点深度成正比。显微镜物 镜的前透镜口径愈小，数值孔径愈 大，放大倍数愈高，价格愈高 分辨率分辨率 公式：公式：R=0.16 /N.A. （R：分辨率；：分辨率； ：照射光线波长；：照射光线波长； N.A.：物镜数值孔径）：物镜数值孔径） R值愈小，分辨能力愈大。物镜的值愈小，分辨能力愈大。物镜的 分辨率与照射光线的波长成反比，分辨率与照射光线的波长成反比， 与物镜的数值孔径成正比。与物镜的数值孔径成正比。 照明光线波长愈短，物镜的数值孔照明光线波长愈短，物镜的数值孔 径愈大，显微镜的分辨率愈大径愈大，显微镜的分辨率愈大 在光学成像过程中，在光学成像过程中，目镜不起初始目镜不起初

4、始 造像作用，仅作放大而已造像作用，仅作放大而已 放大率放大率 显微镜的总放大率为：显微镜的总放大率为： Mt=Mob Me Mph Mt:总放大率总放大率 Mob:物镜放大率物镜放大率 Me： 目镜放大率目镜放大率 Mph：摄影透镜放大率：摄影透镜放大率 首先计算出有效放大倍率：首先计算出有效放大倍率： 0.65 5000.65 1000=300-650 再用物镜放大倍率除以有效放大倍率再用物镜放大倍率除以有效放大倍率: 325 40650 40=8-16 求得的数值是应选配的目镜放大倍率求得的数值是应选配的目镜放大倍率 的范围，即要选用的范围，即要选用8 -16 的目镜的目镜 焦点深度焦点深度 当显微镜对被检样品的某一点或 平面准焦时，影像的清晰范围，不 局限于这一点或面，在某上下的一 定距离或深度内也是清晰的。这段 距离或深度，就叫做焦点深度，简 称焦深。 焦深与物镜的数值孔径和总放大 率成反比，影像的焦深加大，提高 物镜的数值孔径，清晰度变小，总 放大率提高，焦深度小，总放大率 降低，焦深加大。使用同一物镜， 配用倍率的目镜，焦深随目镜倍率 加大儿减小 三、实验方法三、实验方法 1.观察草履虫的外形，运动，纤 毛，食物泡等。 取少许擦镜纸纤维，放于载 玻片上，滴一滴草履虫悬液， 然后盖片观察 2.洋