药物分析课件[医术材料]

1、第第2章章 常用分析化学方法常用分析化学方法 2.1 概述概述 2.2 化学分析化学分析 2.3 光谱分析光谱分析 2.4 色谱分析色谱分析 1医疗事业 常用分析化学方法 重重 量量 分分 析析 法法 化学分析法化学分析法 容容 量量 分分 析析 法法 仪器分析法仪器分析法 光光 谱谱 分分 析析 法法 色色 谱谱 分分 析析 法法 电电 化化 学学 分分 析析 法法 2医疗事业 （1）准确度高、精密度好准确度高、精密度好； （2）灵敏度低灵敏度低，适用于，适用于常量组分常量组分含量测定，不适用含量测定，不适用 于微量和痕量组分的测定；于微量和痕量组分的测定； （3）选择性较差，选择性较差，不

2、如仪器分析法，易受干扰；不如仪器分析法，易受干扰； （4）重量法操作烦琐，耗时；）重量法操作烦琐，耗时； （5）滴定分析方法操作简便，分析速度较快。）滴定分析方法操作简便，分析速度较快。 中外药典中滴定分析法广泛应用于中外药典中滴定分析法广泛应用于原料药原料药的含量测定的含量测定 化学分析方法的特点化学分析方法的特点 3医疗事业 (1) 灵敏度高，灵敏度高，适合于微量、痕量和超痕量成分的分析；适合于微量、痕量和超痕量成分的分析； (2) 选择性较好选择性较好； (3)分析速度快分析速度快，操作简便，容易实现自动化；，操作简便，容易实现自动化； (4) 准确度和精密度比化学分析法差准确度和精密度

3、比化学分析法差，不适用于常量和，不适用于常量和 高含量成分的高含量成分的定量分析定量分析。 国内外药典国内外药典仪器分析法占绝大部分；仪器分析法占绝大部分； 其中以高效液相色谱（其中以高效液相色谱（HPLCHPLC）、分光光度法为主；）、分光光度法为主； l 色谱法：先分离后测定，适合组分复杂、干扰成分色谱法：先分离后测定，适合组分复杂、干扰成分 较多、难以用滴定分析法测定含量的品种，以及鉴别较多、难以用滴定分析法测定含量的品种，以及鉴别 和检查项目。和检查项目。 仪器分析方法的特点仪器分析方法的特点 相对误差：化学分析法相对误差：化学分析法 千分之几千分之几 仪器分析法仪器分析法5% 4医疗

4、事业 学习要求 1、掌握药物分析中常用的分析方法的分类，、掌握药物分析中常用的分析方法的分类， 各有何特点；各有何特点； 2、了解药物分析中常用的滴定分析方法；、了解药物分析中常用的滴定分析方法； 3、了解药物分析中常用的光谱法和色谱法的、了解药物分析中常用的光谱法和色谱法的 类型、特点和适用范围；类型、特点和适用范围； 4、掌握紫外、掌握紫外-可见分光光度法的定性、定量可见分光光度法的定性、定量 分析方法，以及方法的局限性；分析方法，以及方法的局限性； 5、掌握、掌握HPLC的系统构成、分离模式、特点的系统构成、分离模式、特点 和局限性。和局限性。 5医疗事业 2.2 化学分析化学分析 一、

5、重量分析一、重量分析 二、容量分析二、容量分析 6医疗事业 三、重量分析三、重量分析 定义：定义：将待测组分以化合物或单质的形式分离后，将待测组分以化合物或单质的形式分离后， 以称量其质量的方式进行含量测定的方法。以称量其质量的方式进行含量测定的方法。 分类：分类： （1）重量法）重量法 沉淀重量法沉淀重量法 CP(2005) ; AAS CP(2010) 苯妥英钠苯妥英钠: 沉淀重量法沉淀重量法 CP(2000) 提取重量法提取重量法 CP(2005) 甲磺酸酚妥钠明甲磺酸酚妥钠明 HPLC CP(2010) （2）挥发重量法）挥发重量法 （3）提取重量法）提取重量法 结晶水、炽灼残渣、干燥

6、失重结晶水、炽灼残渣、干燥失重 胰酶中脂肪的检查胰酶中脂肪的检查 P.848 1.0g 氢溴酸氢溴酸 硫酸硫酸 盐酸盐酸 硝酸硝酸 磷酸磷酸 各种有机酸各种有机酸 注意：注意： 氢卤酸盐：醋酸汞试液氢卤酸盐：醋酸汞试液 温度、水分、挥发性温度、水分、挥发性 药典中应用最广泛的一种方法药典中应用最广泛的一种方法 15% 19医疗事业 （2）非水酸量法）非水酸量法 溶剂：二甲基甲酰胺溶剂：二甲基甲酰胺 滴定液：甲醇钠的甲醇滴定液：甲醇钠的甲醇- -苯溶液苯溶液 应用：酚类、酰亚胺应用：酚类、酰亚胺 乙琥胺乙琥胺 P.4P.4 注意：注意： 甲醇钠易吸收空气中水分和二氧化碳，溶剂易挥甲醇钠易吸收空气

7、中水分和二氧化碳，溶剂易挥 发发 20医疗事业 中国药典采用非水碱量法测定含量的有中国药典采用非水碱量法测定含量的有 : : A.A.司可巴比妥司可巴比妥 B.B.异烟肼异烟肼 C.C.磺胺嘧啶磺胺嘧啶 D.D.盐酸氯丙嗪盐酸氯丙嗪 E.E.地西泮地西泮 21医疗事业 第二节第二节 光谱分析法光谱分析法 一、光谱分析基本概念一、光谱分析基本概念 二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法 三、红外光谱法三、红外光谱法 四、荧光分析法四、荧光分析法 五、原子吸收分光光度法五、原子吸收分光光度法 22医疗事业 学习要求 掌握药物分析中常用的光谱分析方法的主要掌握药物分析中常用的光谱分析方法的主

8、要 特点和用途。特点和用途。 23医疗事业 一、光谱分析基本概念一、光谱分析基本概念 l 光谱分析法：以物质（分子或原子）对光谱分析法：以物质（分子或原子）对电磁辐射电磁辐射 （光）（光）的的吸收、发射吸收、发射或或散射散射得到的得到的光谱光谱为基础的分为基础的分 析方法。析方法。 E = hc/ 能级跃迁能级跃迁 10-8秒秒 分光光度法：通过测定被测物质在分光光度法：通过测定被测物质在特定波长处特定波长处或一或一 定定波长范围波长范围内的内的吸光度吸光度或或发光强度发光强度，对该物质进行，对该物质进行 定性和定量分析的方法。定性和定量分析的方法。 24医疗事业 常用的波长范围：常用的波长范

9、围： 紫外光区：紫外光区：200400nm 可见光区：可见光区：400760nm 近红外光区：近红外光区：7602500nm （中）红外光区：（中）红外光区：250025000nm （4000400cm-1） 吸收光谱法吸收光谱法: 紫外分光光度法、可见分光光度法、紫外分光光度法、可见分光光度法、 原子吸收分光光度法、红外分光光度法原子吸收分光光度法、红外分光光度法 发射光谱法：发射光谱法：荧光分析法、原子发射光谱法荧光分析法、原子发射光谱法 散射光谱法：散射光谱法：拉曼光谱法拉曼光谱法 25医疗事业 光吸收定律：光吸收定律： 朗伯朗伯-比尔定律比尔定律 Lambert-beer Law 吸光

10、度吸光度A=Ecl 吸光系数：吸光系数： 当当c以以mol/l为单位为单位 摩尔吸收系数摩尔吸收系数（Lmol-1cm-1） 当当c以以g/100ml为单位为单位 百分吸收数系数百分吸收数系数 注意注意 （1）平行的单色光）平行的单色光 （2）均匀非散射的液态样品，微粒分散均匀的固态）均匀非散射的液态样品，微粒分散均匀的固态 或气态样品。或气态样品。 （3）吸光度具有加和性）吸光度具有加和性 %1 cm1 E 分光光度法分光光度法 321 AAAA 26医疗事业 二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法 1、紫外、紫外-可见光谱可见光谱 Ultraviolet/Visible spect

11、rum UV-Vis 分子的价电子跃迁、分子的价电子跃迁、分子振动能级和转动能级跃迁分子振动能级和转动能级跃迁 紫外吸收光谱与物质结构的关系：紫外吸收光谱与物质结构的关系： 共轭体系（离域共轭体系（离域键），芳环、含杂原子的不饱和键），芳环、含杂原子的不饱和 基团。基团。 光谱特征参数光谱特征参数 （1）最大吸收波长）最大吸收波长 max （2）最小吸收波长）最小吸收波长 min （3）肩峰）肩峰 （4）末端吸收）末端吸收 带状光谱带状光谱 27医疗事业 2、吸光度的测定、吸光度的测定 （1）对溶剂的要求）对溶剂的要求 含杂原子的有机溶剂，通常都有很强的末端吸收。含杂原子的有机溶剂，通常都有很

12、强的末端吸收。 如：甲醇和乙醇的截止使用波长为如：甲醇和乙醇的截止使用波长为205nm。 在测定之前应先检查所用溶剂在所用的波长附近是在测定之前应先检查所用溶剂在所用的波长附近是 否符合要求，即：否符合要求，即： 220240nm，A0.40241250nm，A0.20 251300nm，A0.10300nm，A0.05 （2）参比：空白对照）参比：空白对照 （3）测定波长确证）测定波长确证 28医疗事业 3、比色法、比色法 在可见光区很多物质本身并没有吸收，或在紫外光在可见光区很多物质本身并没有吸收，或在紫外光 区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可在一区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度

13、，可在一 定条件下加入定条件下加入显色试剂显色试剂，使反应产物的最大吸收移，使反应产物的最大吸收移 至可见光区后再测定。至可见光区后再测定。 参比：空白对照参比：空白对照 29医疗事业 4、影响准确度的因素、影响准确度的因素 仪器测定误差：仪器测定误差： T 读数误差：读数误差：0.22% A=0.434时相对误差最小。时相对误差最小。 A：0.30.7 调节供试品溶液的浓度、选用适当规格的比色皿。调节供试品溶液的浓度、选用适当规格的比色皿。 对比尔定律的偏离对比尔定律的偏离 (1) 非单色光的影响：非单色光的影响： 应对办法：应对办法：最大吸收波长最大吸收波长 (2) 吸光质点的相互作用吸光

14、质点的相互作用 应对办法：应对办法：稀溶液稀溶液 (3) 介质不均匀介质不均匀 应对办法：应对办法：均匀的澄清透明溶液（非散射）均匀的澄清透明溶液（非散射） 吸光度吸光度A= - -lgT 吸光系数相差越大，偏离越严重。吸光系数相差越大，偏离越严重。 透光率透光率 0IIT/ 30医疗事业 5、紫外、紫外-可见分光光度计可见分光光度计 光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器 数据记录数据记录 和处理和处理 紫外光区紫外光区:氘灯氘灯 可见光区可见光区:（卤）钨灯（卤）钨灯 色散元件：色散元件： 棱镜、光栅棱镜、光栅 （狭缝）（狭缝） 比色皿：比色皿： 石英、玻璃石英、玻璃 （1）光电管、

15、光电二极管）光电管、光电二极管 按绘制光谱图的检测方式分类：按绘制光谱图的检测方式分类： （1 1）分光扫描检测）分光扫描检测 （2 2）二极管阵列全谱检测）二极管阵列全谱检测 （2）光二极管阵列）光二极管阵列 31医疗事业 721型可见分光光度计型可见分光光度计 32医疗事业 6、分析方法、分析方法 （1）定量分析）定量分析 u利用光吸收定律利用光吸收定律 标准曲线法标准曲线法 对照品比较法对照品比较法 对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中 被测成分量的被测成分量的100%10%, 所用溶剂也应完全一致。所用溶剂也应完全一致。 吸收系数法吸

16、收系数法 ，并注意仪器的校正和检定（波长、吸，并注意仪器的校正和检定（波长、吸 光度、杂散光）。光度、杂散光）。 R R x x c A A c 100E1cm 1 % LE A c 1% cm1 x x 33医疗事业 （2）定性分析）定性分析 u 比较光谱特征可以对纯物质进行鉴别及杂质检查比较光谱特征可以对纯物质进行鉴别及杂质检查 n 鉴别鉴别 对比吸收光谱的特征参数对比吸收光谱的特征参数 乙胺嘧啶的鉴别乙胺嘧啶的鉴别 要求供试品溶液要求供试品溶液max=272nm， min=216nm 盐酸氯丙嗪的鉴别盐酸氯丙嗪的鉴别 要求供试品溶液要求供试品溶液max=254nm、306nm，A3060

17、.46 贝诺酯的鉴别贝诺酯的鉴别 要求供试品溶液要求供试品溶液max=240nm， 760730E1cm 1 % 比较吸收度比值的一致性：物质的吸收峰较多时比较吸收度比值的一致性：物质的吸收峰较多时 两性霉素两性霉素B的鉴别的鉴别 要求拱试品溶液要求拱试品溶液max=3622nm、 3812nm、 4052nm，且，且 90 A A 60 A A 405 381 381 362 . 对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性 己稀雌酚注射液的鉴别己稀雌酚注射液的鉴别 250nm450nm n 杂质检查：在特定波长下药物与杂质吸收有差异杂质检查：在特定波长下药物与杂质吸收有差异 地蒽酚中二羟基蒽醌

18、的检查地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 规定供试品溶液在规定供试品溶液在432nm处的吸收度不得超过处的吸收度不得超过0.12 头孢噻吩钠的杂质检查头孢噻吩钠的杂质检查 规定供试品溶液在规定供试品溶液在237nm处的吸收度应为处的吸收度应为0.650.72 u 分子结构的推测：根据化合物的紫外分子结构的推测：根据化合物的紫外- -可见区吸收可见区吸收 光谱可以推测所含的官能团光谱可以推测所含的官能团 34医疗事业 （1）若一个化合物在）若一个化合物在220800nm无吸收峰，无吸收峰， 则此则此 分子结构中不含共轭体系，没有醛基、羰基、溴或分子结构中不含共轭体系，没有醛基、羰基、溴或 碘。它可能是脂肪

19、族碳氢化合物、腈、醇、醚、氯碘。它可能是脂肪族碳氢化合物、腈、醇、醚、氯 化烃和氟化烃。化烃和氟化烃。 （2）210280nm有吸收，可能含有两个共轭单位。有吸收，可能含有两个共轭单位。 （3）260300nm有有强强吸收带，表示有吸收带，表示有35个共轭单个共轭单 位。位。 （4）280300nm有弱吸收带，示有羰基存在。有弱吸收带，示有羰基存在。 （5）280300nm有中等强度的吸收带，且有一定的有中等强度的吸收带，且有一定的 精细结构，示有苯环结构。精细结构，示有苯环结构。 35医疗事业 7、局限性、局限性 药物中可能含有多种有紫外吸收的杂质，干扰定量药物中可能含有多种有紫外吸收的杂质

20、，干扰定量 测定；测定； 特征性不强，谱带光谱可提供的信息量较少；仅用特征性不强，谱带光谱可提供的信息量较少；仅用 紫外吸收光谱难以确定未知药物的化学结构，单独应紫外吸收光谱难以确定未知药物的化学结构，单独应 用有一定的局限性。用有一定的局限性。 36医疗事业 紫外分光光度法中，用对照品比较法测定药物含紫外分光光度法中，用对照品比较法测定药物含 量时量时: : A.A.需已知药物的吸收系数需已知药物的吸收系数 B.B.供试品溶液和对照品溶液的浓度应接近供试品溶液和对照品溶液的浓度应接近 C.C.供试品溶液和对照品溶液应在相同的条件下测供试品溶液和对照品溶液应在相同的条件下测 定定 D.D.可以

21、在任何波长处测定可以在任何波长处测定 E.E.是中国药典规定的方法之一是中国药典规定的方法之一 37医疗事业 写出朗伯写出朗伯-比尔定律比尔定律 的公式的公式 请说出请说出 的含义的含义 紫外区波长范围是（紫外区波长范围是（ nm） 可见光区波长范围是（可见光区波长范围是（ nm） 供试品溶液的吸光度读数，以在供试品溶液的吸光度读数，以在 之间的误之间的误 差较小差较小 请写出对照品比较法的含量计算公式请写出对照品比较法的含量计算公式 %1 1cm E R R x x c A A c 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法 38医疗事业 三、红外光谱法（分光光度法）三、红外光谱法（分光光度法）

22、 Infrared spectrum (spectrophotometry) IR 1、红外光谱、红外光谱 红外光谱区：红外光谱区：250025000nm（4000400cm-1） 分子的吸收光谱：分子的振动、转动能级跃迁分子的吸收光谱：分子的振动、转动能级跃迁 特点：特点： （1）几乎所有的有机化合物在红外光谱区都有吸收）几乎所有的有机化合物在红外光谱区都有吸收 （2）峰形较尖锐）峰形较尖锐 （3）官能团都有若干特征吸收峰）官能团都有若干特征吸收峰 （4）吸收强度较弱）吸收强度较弱 定性分析：丰富的分子结构信息定性分析：丰富的分子结构信息 半定量分析半定量分析 39医疗事业 2、红外光谱仪、

23、红外光谱仪 （1）色散型）色散型 光源光源吸收池吸收池单色器单色器检测器检测器记录系统记录系统 （2）干涉型（傅立叶变换红外光谱仪）干涉型（傅立叶变换红外光谱仪） 光源光源Michelson干涉仪（吸收池）干涉仪（吸收池）检测器检测器计计 算机算机记录仪记录仪 试样制备方法：试样制备方法：压片法压片法、糊法、膜法、溶液法等、糊法、膜法、溶液法等 试样不能含水（水可产生红外吸收且可侵蚀盐窗）试样不能含水（水可产生红外吸收且可侵蚀盐窗） 固体制样技术时要注意固体制样技术时要注意多晶现象多晶现象 40医疗事业 41医疗事业 （1）特征区（官能团区）：）特征区（官能团区）：40001300cm-1 伸

24、缩振动，比较稀疏，峰位恒定，容易辨认和归属伸缩振动，比较稀疏，峰位恒定，容易辨认和归属 特征峰特征峰，如：羟基：，如：羟基：37003600cm-1 14501300cm-1 鉴定官能团鉴定官能团 注意：水注意：水 3440cm-1 1630cm-1 盐酸普鲁卡因的红外光谱图盐酸普鲁卡因的红外光谱图 3、特征吸收区域、特征吸收区域 42医疗事业 （2）指纹区：）指纹区：1300400 cm-1 分子变形振动，与整个分子的结构有关。分子变形振动，与整个分子的结构有关。 相关峰，相关峰，为某种基团的存在提供旁证为某种基团的存在提供旁证 区别结构类似的化合物区别结构类似的化合物 盐酸普鲁卡因的红外光

25、谱图盐酸普鲁卡因的红外光谱图 3、特征吸收区域、特征吸收区域 43医疗事业 4、方法与应用、方法与应用 （1 1）药物的鉴别）药物的鉴别 依据：依据：药品红外光谱集药品红外光谱集，位置、形状、相对强度，位置、形状、相对强度 l原料药的鉴别：多晶干扰原料药的鉴别：多晶干扰 按规定方法进行预处理按规定方法进行预处理1019，或重结晶后依法绘制光谱，或重结晶后依法绘制光谱 如已规定特定的药用晶型，应采用相应晶型的对照品。如已规定特定的药用晶型，应采用相应晶型的对照品。 采用溶液法采用溶液法 l制剂鉴别：提取、干燥后进行。如布洛芬片制剂鉴别：提取、干燥后进行。如布洛芬片P.121 注意晶型变化、辅料干

26、扰情况注意晶型变化、辅料干扰情况 若晶型不变化，辅料有干扰：参照原料药的标准光谱，在指若晶型不变化，辅料有干扰：参照原料药的标准光谱，在指 纹区选择纹区选择35个不受辅料干扰的待测成分的特征谱带作进行个不受辅料干扰的待测成分的特征谱带作进行 鉴别。鉴别。 l多组分原料药：选择主要成分的若干特征谱带多组分原料药：选择主要成分的若干特征谱带 938938 红外光谱法是鉴别组分单一、结构明确的红外光谱法是鉴别组分单一、结构明确的 原料药的首选方法原料药的首选方法 44医疗事业 （2 2）晶型、异构体限度检查或含量测定）晶型、异构体限度检查或含量测定 例：例：甲苯咪唑甲苯咪唑 142 A晶型是低效晶型

27、，晶型是低效晶型，640cm-1 强强 662cm-1 弱弱 C晶型是有效晶型，晶型是有效晶型，640cm-1 弱弱 662cm-1 强强 分别测定供试品和含分别测定供试品和含A晶型晶型10%的甲苯咪唑对照的甲苯咪唑对照 品的红外光谱，供试品在两个波数处吸收度的比品的红外光谱，供试品在两个波数处吸收度的比 值应小于对照品的比值，即控制供试品中值应小于对照品的比值，即控制供试品中A晶型晶型 的量小于的量小于10%。 45医疗事业 （3 3）未知物的结构确定）未知物的结构确定 光谱解析光谱解析 必须先收集样品的有关资料和数据（分子量、元素分必须先收集样品的有关资料和数据（分子量、元素分 析结果），

28、根据析结果），根据特征峰特征峰，结合，结合相关峰相关峰进行分析，作出进行分析，作出 判断。判断。 注意：注意： 由于各种型号的由于各种型号的仪器性能仪器性能不同，供试品制备时不同，供试品制备时研磨程研磨程 度度的差异或的差异或吸水程度吸水程度不同等原因，均会影响光谱的形不同等原因，均会影响光谱的形 状。因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造状。因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造 成的影响。成的影响。 46医疗事业 四、荧光分析法四、荧光分析法 fluorescence spectrophotometry FS 1、荧光、荧光 某些物质的分子受某些物质的分子受紫外光或可见光紫外光或可

29、见光照射激发照射激发(吸收吸收) 后，可以发射出比激发光波长较后，可以发射出比激发光波长较长长的荧光。的荧光。 激发：基态激发：基态各激发态的各个振动能级各激发态的各个振动能级 发射荧光：第一激发态的最低能级发射荧光：第一激发态的最低能级基态基态 荧光与物质结构的关系：荧光与物质结构的关系：键，共轭效应，刚性平面键，共轭效应，刚性平面 结构，芳环上有供电子基结构，芳环上有供电子基 荧光受溶液浓度、纯净程度、溶液中的悬浮物、氧、荧光受溶液浓度、纯净程度、溶液中的悬浮物、氧、 温度、溶液温度、溶液pH值等影响较大。值等影响较大。 47医疗事业 2、荧光激发光谱与荧光（发射）光谱荧光激发光谱与荧光（

30、发射）光谱 硫酸奎宁的激发光谱和荧光光硫酸奎宁的激发光谱和荧光光 谱谱 荧光激发光谱的形状与紫外荧光激发光谱的形状与紫外-可见吸收光谱一样可见吸收光谱一样 荧光光谱的形状与激发波长无关荧光光谱的形状与激发波长无关 48医疗事业 3、荧光强度与溶液浓度的关系荧光强度与溶液浓度的关系 l 物质的物质的低浓度范围内低浓度范围内发射出的荧光强度与发射出的荧光强度与 溶液中该物质的浓度成正比。溶液中该物质的浓度成正比。 If =Kc 注意：浓度太高的溶液会有注意：浓度太高的溶液会有“自熄灭自熄灭”作作 用，导致荧光发射光强度与浓度不成正比，用，导致荧光发射光强度与浓度不成正比， 故荧光分析法应在故荧光分

31、析法应在低浓度溶液低浓度溶液中进行。即浓中进行。即浓 度与荧光强度的线性较窄。度与荧光强度的线性较窄。 稀：稀：A0.05 49医疗事业 4、荧光分析法的特点、荧光分析法的特点 （1）灵敏度高）灵敏度高 比紫外比紫外-可见分光光度法高可见分光光度法高24个数量级个数量级 （2）选择性好）选择性好 （3）线性范围）线性范围窄窄 （4）干扰因素多）干扰因素多 50医疗事业 5、分析方法、分析方法 （1 1）定性分析方法）定性分析方法 l 依据物质的激发光谱和荧光发射光谱依据物质的激发光谱和荧光发射光谱 （2 2）定量分析方法）定量分析方法 l标准曲线法标准曲线法 l单点校正法单点校正法：当在一定条

32、件下已知线性关系良好时，：当在一定条件下已知线性关系良好时， 可在每次测定前，用可在每次测定前，用一定浓度的对照品溶液一定浓度的对照品溶液校正仪器校正仪器 的灵敏度，用下式计算供试品浓度：的灵敏度，用下式计算供试品浓度： l 注意：上式中比例项应控制在注意：上式中比例项应控制在0.52之间为宜之间为宜 51医疗事业 6、荧光分析仪荧光分析仪 光源光源 激发光激发光 单色器单色器 样品池样品池 发射光发射光 单色器单色器 数据记录数据记录 和处理和处理 检测器检测器 汞灯或氙灯汞灯或氙灯光栅光栅 四面透光四面透光 低荧光的玻璃或石英低荧光的玻璃或石英 光电倍增管光电倍增管 52医疗事业 荧光分析

33、法的应用荧光分析法的应用鉴别鉴别 马来酸麦角新碱马来酸麦角新碱 （1 1）本品的水溶液显蓝色荧光。）本品的水溶液显蓝色荧光。 双嘧达莫双嘧达莫 （1 1）取本品约）取本品约10mg10mg，加乙醇使溶解，即显绿色荧光，加乙醇使溶解，即显绿色荧光， 加酸后荧光消失。加酸后荧光消失。 荧光素钠荧光素钠 （2 2）本品的水溶液显强烈的荧光，用大量的水稀释后）本品的水溶液显强烈的荧光，用大量的水稀释后 仍极明显；但加酸使成酸性后，荧光即消失；再加仍极明显；但加酸使成酸性后，荧光即消失；再加 碱使成碱性，荧光又显出。碱使成碱性，荧光又显出。 维生素维生素B B1 1 （1 1）取本品约）取本品约5mg5

34、mg，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液2.5ml2.5ml溶解后，加溶解后，加 铁氰化钾试液铁氰化钾试液0.5ml0.5ml与正丁醇与正丁醇5ml5ml，强力振摇，强力振摇2 2分钟，分钟， 放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；加酸放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；加酸 使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光又使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光又 显出。显出。 53医疗事业 荧光分析法的应用荧光分析法的应用检查检查 氯化钠中氯化钠中铝盐铝盐的检查：在醋酸的检查：在醋酸- -醋酸铵缓冲醋酸铵缓冲 液（液（pH6.0 pH6.0 ）条件下，铝盐与）条件下，铝盐与8-8-羟基喹啉

35、羟基喹啉 反应生成发蓝光的反应生成发蓝光的8-8-羟基喹啉铝，照荧光羟基喹啉铝，照荧光 分析法（附录分析法（附录IV EIV E），在激发波长），在激发波长392nm392nm、 发射波长发射波长518nm518nm的波长处测定荧光强度，与的波长处测定荧光强度，与 铝对照溶液同法测得的荧光强度相比较。铝对照溶液同法测得的荧光强度相比较。 （千万分之二）（千万分之二） 54医疗事业 荧光分析法的应用荧光分析法的应用定量分析定量分析 CP（2005）有）有5个药物个药物 检查项下的溶出度测定：利血平片、甲地高辛片、检查项下的溶出度测定：利血平片、甲地高辛片、 地高辛片、布美他尼片地高辛片、布美他尼片 含量测定：利血平片、洋地黄毒苷片含量测定：利血平片、洋地黄毒苷片 CP（2010）有）有2个药物个药物 检查项下的溶出度测定：利血平片、甲地高辛片检查项下的溶出度测定：利血平片、甲地高辛片 含量测定：利血平片（含量测定：利血平片（P.357） 荧光分析法特别适合于药物在体液中的浓荧光分析法特别适合于药物在体液中的浓 度测定和药物在体内代谢过程的研究度测定和药物在体内代谢过程的研究 55医疗事业 五、原