小青龙汤复方提取工艺研究论文

1、小青龙汤复方提取工艺研究论文1仪器与试药 1.1仪器Agilent1100Series高效液相色谱仪（安捷伦公司）；SartoriusBP211-D电子天平（德国赛多利斯公司）。 1.2试药 麻黄、芍药、细辛、干姜、甘草、桂枝、半夏和五味子药材（均购于成都市荷花池中药材市场）；磷酸二氢钾、磷酸；甲醇和乙腈为色谱纯。 2方法2，3 2.1指标及含量测定方法中国药典2005版收载的小青龙汤现有制剂均只以方中的芍药苷为质量控制指标，因此本方保留该质量控制指标。复方中麻黄为君药，因此增加盐酸麻黄碱为质量控制指标。 2.1.1盐酸麻黄碱含量测定方法盐酸麻黄碱对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱对照品10

2、.83mg于100ml容量瓶中，以甲醇定容，摇匀，精密吸取2ml于25ml量瓶中，甲醇定容，摇匀，过0.45m微孔滤膜，取续滤液备用。 麻黄供试品的制备：精密量取复方提取液适量（相当于麻黄生药0.2g）于已干燥的锥形瓶中，低温挥干，以25ml甲醇溶解，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，以甲醇补足减少量，摇匀，滤过，精密量取续液1ml，置中性氧化铝柱（100200目，内径1cm，1.5g）上，以50%甲醇洗脱，收集洗脱液约9ml于量瓶中，加磷酸1滴，以50%甲醇定容摇匀，过0.45m微孔滤膜，取续滤液备用。 测定方法：C18柱（250mm4.6mmDiamonsil5m），流动相为

3、乙腈-0.1%磷酸（990），以三乙胺调节pH=4.5，检测波长207nm，流速1ml/min，柱温25，理论板数以盐酸麻黄碱峰计，不得低于3000。 盐酸麻黄碱标准曲线的绘制：分别吸取盐酸麻黄碱对照品溶液2，4，6，8，10，12，16，20，24l进样，按照测定方法测定，绘制标准曲线。结果见图1。回归曲线Y=1722.7X+39.103，R2=0.9998，盐酸麻黄碱进样量在0.0172880.207456g间具有良好的线性关系。 2.1.2芍药苷含量测定方法 芍药苷对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加入量瓶中，甲醇定容，制成60g/ml的甲醇对照品溶液，过0.45m微孔滤膜，取

4、续滤液备用。 白芍供试品溶液的制备：精密量取复方提取液适量（相当于白芍生药0.1g），水浴挥干，以35ml稀乙醇转移至50ml量瓶中，超声处理30min，冷却至室温，稀乙醇定容，摇匀，过0.45m微孔滤膜，取续滤液备用。 测定方法：C18柱（250mm4.6mm,Diamonsil5m），流动相为乙腈-0.1%磷酸（1486），检测波长230nm，流速1ml/min，柱温25，理论板数以芍药苷峰计，不得低于2000。 芍药苷标准曲线的绘制：分别吸取芍药苷对照品溶液1，2，3，4，6，8l进样，按照测定方法测定，绘制标准曲线，（见图2）。回归曲线Y=15414X+2.5391，R2=0.9998

5、，芍药苷进样量在0.0060.048g间具有良好的线性关系。 2.26种提取工艺的优化研究及结果 2.2.1不同提取溶剂回流提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、95%乙醇为提取溶剂，按L9（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表1执行，实验按各正交表实施，结果用SPSS11.5作方差分析，确定优化工艺。结果见表27。表1不同溶液回流提取工艺因素水平（略）表2以水为溶剂回流提取考察结果（略）表3以水为溶剂回流提取方差分析结果（略）表4以60%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表5以60%乙醇溶剂回流提取方差分析结果（略）表6以95%乙醇为溶剂回流提取考察结果（略）表7以95%乙醇为溶剂回流提取方

6、差分析结果（略） 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）提取溶剂量（A）提取时间（B），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A2B2C3。 由方差分析结果得，影响因素大小为：提取时间（B）提取溶剂量（A）提取次数（C），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A3B2C2。 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：提取次数（C）提取溶剂量（A）提取时间（B），3个因素均具有显著性影响，优化工艺为A3B2C3。 2.2.2不同提取溶剂渗漉提取工艺研究及结果以水、60%乙醇、95%乙醇为提取溶剂，按L9（34）正交表进行实验。因素水平安排按照表8执行，实验按各正交表实施，结果用SPSS11

7、.5作方差分析，确定优化工艺。结果见表914。表8不同溶剂渗漉提取工艺因素水平（略）表9以水为溶剂渗漉提取考察结果（略）表10以水为溶剂渗漉提取方差分析结果（略）表11以60%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表12以60%乙醇溶剂渗漉提取方差分析结果（略）表13以95%乙醇为溶剂渗漉提取考察结果（略）表14以95%乙醇为溶剂渗漉提取方差分析结果（略） 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）渗液速度（C）药材粒度（B），A和C因素具有显著性影响，优化工艺为A3B2C3。 由方差分析结果得，影响因素大小为：药材粒度（B）渗漉液量（A）渗漉速度（C），B因素具有显著性影响，优化工艺为A

8、1B3C1。 由方差分析结果分析得，影响因素大小为：渗漉液量（A）药材粒度（B）渗漉速度（C），A因素具有显著性影响，优化工艺为A2B2C1。 2.3不同提取工艺及提取溶剂对提取工艺的影响对比研究 2.3.1不同正交实验因素分析结果见表15。表15不同正交实验结果分析（略） 2.3.2不同优化提取工艺的对比研究按照上述各种优化工艺，分别称取复方药材进行提取试验，以提取液中盐酸麻黄碱和芍药苷的含量为指标加权（权重系数依次为0.6和0.4），综合评价提取工艺。对比不同提取工艺的差异。结果见表16。表16不同工艺验证结果(略) 2.3.3相同方法不同溶剂对提取工艺的影响研究结果见表17。表17不同溶

9、剂时间的比较结果（略） 2.3.4相同溶剂不同提取方法间的比较研究结果见表18。表18不同提取方法比较结果（略） 2.3.5综合评价结果实验表明，在考察范围内，小青龙汤提取工艺优劣顺序为60%乙醇回流提取水回流提取60%乙醇渗漉95%乙醇回流提取水渗漉；提取方法对比研究结果表明，回流提取方法效果较渗漉提取方法效果好；提取溶剂对比研究表明60%乙醇为提取溶剂较其他两种溶剂效果好。 3讨论 现有小青龙汤成方制剂只选择了芍药苷为含量控制指标，对于复方制剂的多指标多成分而言，显得质量控制过于单一。本研究从处方构成出发，增加君药麻黄的指标成分盐酸麻黄碱为指标，更多的注重全方的系统性。 实验结果均反应回流

10、提取法较渗漉法的提取效果好，其中提取溶剂又以60%乙醇为佳，这与控制指标的选择有一定的关系，但是是否在药效方面有正变的关系，还需要进行药效学研究。 小青龙汤整体提取的不同工艺比较结果得出，优化提取工艺为12倍量60%乙醇回流提取2次，1.5h/次。所得优化提取工艺合理可行，可作为小青龙汤的提取工艺。 【参考文献】 1段富津.方剂学M.上海：上海科学技术出版社，2002：25. 2国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005. 3马云淑，宁朝香.小青龙滴丸的制备工艺及质量标准J.云南中医学院学报，1999，22（3）：14. 【摘要】目的探讨提取方法、提取溶剂对小青龙汤复方提取的影响，并筛选出最佳提取工艺。方法拟用回流、渗漉两种传统提取法，水、60%乙醇、95%乙醇3种提取溶剂进行正交实验，以提取液中盐酸麻黄碱、芍药苷含量（权重系数依次为0.6，0.4）为指标，通过指