禽淋巴白血病与马立克病在肿瘤组织形态学上的差别

1、禽淋巴白血病与马立克病在肿瘤组织形态学上的差别禽淋巴白血病/肉瘤群(avian leukemia/sarco-ma group)是由一些具有共同特征的病毒引起的疾病群,其中最常见的是淋巴细胞性白血病,多发于14周龄以上至性成熟的鸡。本病与马立克病均为传染性肿瘤病,其眼观病理变化与内脏型马立克病极为相似,故常对其病理诊断造成一定困难。因此,系统地观察本病的病理变化,可进一步确定它与马立克病在肿瘤组织形态学方面的差别,为临床诊断提供理论依据。1 材料与方法1.1 病料外检病料3例:白来航鸡,5月龄,主要症状为鸡冠苍白,食欲不振,下痢,消瘦,衰竭死亡;标本病料4例,由甘肃农业大学病理教研组提供。1.

2、2 主要仪器与试剂光学显微镜及图像采集系统为日本Olympus公司产品,型号为FX-35WA。氯化金为上海济宁实业有限公司产品。硝酸银为上海埃彼化学试剂有限公司产品。苏木精为上海中秦化学试剂有限公司产品。1.3 取材及处理1.3.1 病理剖检对所收集的外检病料,按照禽类尸体解剖方法,系统地检查各组织器官的形态学变化,包括体积、形状、颜色、质地、分泌物和渗出物、肿瘤结节的形态特征等,对病变典型的组织器官照相。对标本病例的观察同上。1.3.2 病理组织学检查选取每份病例的心、肝、脾、肾、肺、卵巢和腔上囊等器官,分别从肿瘤结节和肿胀器官的中心及边缘取材(各2块),体积1cm3,用100mL/L中性福

3、尔马林溶液(pH7.27.4)充分固定(标本病例无须再固定),流水冲洗,梯度乙醇脱水、二甲苯透明,浸蜡,包埋,切片(5μm厚),染色,镜检并照相。HE染色:苏木精-伊红染色法。胶原纤维染色(Masson三色染色法):二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水;Masson复合染色液染色4min;2mL/L醋酸水溶液稍洗2次;50g/L磷钨酸溶液浸泡7min;2mL/L醋酸水溶液稍洗2次;亮绿染色液染色7min;2mL/L醋酸水溶液稍洗2次;梯度乙醇脱水,二甲苯脱蜡;封片。网状纤维染色(Gomori银染色法):二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水;高锰酸钾氧化液浸泡6min;自来水冲洗1min;20g/L草酸溶液浸泡3

4、min;自来水冲洗1min;20g/L硫酸铁铵溶液浸泡2min;自来水冲洗1min;蒸馏水冲洗2次;银氨溶液浸泡1.5min;蒸馏水冲洗2次;200mL/L甲醛溶液浸泡8min;蒸馏水冲洗2次;2g/L氯 化 金 溶 液 浸 泡1min;蒸馏水冲洗2次;丽春红苦味酸染色液染色5min;梯度乙醇脱水,二甲苯脱蜡;封片。2 结果2.1 形态学变化病鸡死后尸体消瘦,羽毛蓬乱。鸡冠苍白、皱缩、局部发绀。腹部膨大,肛门周围有白色粪便。肝:弥漫性肿大,色紫红,呈斑驳状,质地脆弱,表面不平,可见数量不等的肿瘤结节。肿瘤结节单个存在或散在分布,多呈半球状埋于肝内,色灰白,分离后多为圆球形或扁平状,大小不等,直

5、径2mm5cm,质地柔软,表面平滑且有光泽,切面均匀如油脂状,外围无明显包囊,与周围肝组织界限清晰(见图1A)。脾:弥漫性肿大,颜色变淡。被膜紧张,色棕红。表面平滑、呈斑驳状,表面和切面未见明显的肿瘤结节病灶(见图1B)。肾:体积变大,色泽变淡,质地柔软,表面可见大小、形状不同的出血斑片,也见散在的灰白色肿瘤增生区。肿瘤结节数量不等,体积较小,色灰白,界限清晰(见图1C)。腔上囊:弥漫性肿大,色苍白,囊壁增厚,囊腔内有少许白色糊状物,局部黏膜出血,表面也见体积较小的白色肿瘤病灶。其他器官,如心脏、卵巢、肺和肠壁也见有灰白色肿瘤结节。2.2 病理组织学变化。2.2.1 肝原有的正常结构被破坏,肝

6、细胞弥漫性萎缩、变性和坏死,汇管区和肝小叶界限不清。肝窦扩张,充满大量的瘤细胞(见图2A)。肝组织内也见大量圆形的肿瘤结节,其间为残留的肝细胞索,结节内的瘤细胞呈膨胀性生长,临近的小结节常有融合趋势,并最终形成大结节(见图2B)。个别体积较大的结节周围看见薄层间质包裹,其外也有数层瘤细胞生长(见图2C)。胶原纤维主要分布在肿瘤结节外围,结节内部也有少量分布(见图2D)。网状纤维则分布于结 节周 边,结 节内 部未 见 其 存 在 (见 图2E)。2.2.2 肾正常肾组织结构大部分消失,肾实质被大量肿瘤组织替代,皮质、髓质界限不清,残留的肾小管上皮细胞空泡变性,核溶解、坏死。肿瘤在肾间质内呈弥漫

7、性生长或结节状膨胀性生长;瘤结节内血管数量较少;部分结节内可见残存的肾小球。肾内有大量转移性肿瘤结节,大小不等,形状不规则,临近病灶中心肾组织萎缩(见图2F);肿瘤呈灶状膨胀 性生长,肾小管上皮变性、坏死(见图2G)。肿瘤结节外围有胶原纤维形成的薄层包囊,结节周边有较多胶原纤维环绕分布,肿瘤细胞之间有少量分布(见图2H)。网状纤维则分布于结节周边,结节内部未见其存在(见图2I)。2.2.3 心心肌纤维淡染,核浓缩,部分肌纤维肿胀、坏死、断裂、玻璃样变。心肌纤维之间有肿瘤细胞弥漫性浸润,或形成大小不等的肿瘤结节,肌纤维之间有大量肿瘤细胞(见图2J)。肿瘤结节胶原纤维和网状纤维的分布特点与肝、肾等

8、器官相似,肿瘤结节的周边有薄层胶原纤维分布,内部有少量胶原纤维分布(见图2K),小肿瘤结节外围有薄层网状纤维分布,肿瘤结节内部未见(见图2L)。2.2.4 腔上囊腔上囊正常的组织结构被完全破坏,淋巴滤泡中肿瘤细胞弥漫性增生,被肿瘤细胞侵害的淋巴滤泡有不同程度的肿大,形状不规则,其中都是大小、形态比较一致的成淋巴细胞,皮质和髓质界限消失、不能辨认。滤泡外的间质中未见有肿瘤细胞(见图2M)。2.2.5 其他器官正常脾组织被大量增生的肿瘤组织分割,残留的淋巴组织萎缩、减少,脾小体破坏,脾索走向紊乱。肿瘤呈弥漫性生长,未见明显的结节状病灶。肺泡及肺间质中有肿瘤细胞弥漫性生长,或形成大小不等的肿瘤结节,

9、肺泡壁充血,临近肺泡壁毛细血管出血,肺泡腔和肺间质内有大量瘤细胞增生(见图2N),网状纤维分布于肿瘤结节周边,结节内部未见网状纤维(见图2O)。卵巢结构被破坏,肿瘤呈结节状膨胀性生长,呈灶状,形状不规则,有不同生长点(见图2P)。2.2.6 肿瘤细胞各组织器官内的肿瘤细胞均由大小、形状比较一致的成淋巴细胞组成。瘤细胞较大,形圆,胞质略嗜碱性,轮廓不清;核形圆,呈空泡状,染色质为大粒状,多靠近核膜分布,并聚集成块;核仁明显,呈嗜酸性;核分裂象多(见图2Q)。3 讨论根据肿瘤病变的形态和分布,眼观上可分为结节型、粟粒型、弥漫型和混合型4种。本试验观察到,在所检全部病例中,除受害器官的肿大和退行性变

10、化外,几乎都见明显的肿瘤结节。肿瘤结节外露或深埋于器官内,大小不等 (直径0.5mm5cm),色灰白,切面油脂状,外无明显的包膜,但界限清晰。也偶见同一病例体内大多数受害脏器呈典型的结节型病变,但个别器官呈弥漫性变化。在病理组织学上,普遍认为所有转移瘤的生长都呈灶状或多中心性的膨胀性生长,瘤细胞并不浸润于受害器官的组织间隙。本试验观察到,在所检病例的被检器官中,转移瘤的生长主要为结节状的膨胀性生长,但在个别器官内也见肿瘤细胞弥漫性浸润于组织间隙的现象,这种弥散性浸润的生长方式尤以肝、脾和心为明显。在肿瘤的间质构造上,胶原纤维在肿瘤结节周边和内部均有分布;而网状纤维则包裹在结节外围,结节内部未见

11、其存在。本病的肿瘤病变原发于腔上囊淋巴滤泡,以后可扩散至体内许多组织器官,尤以肝、肾、脾、心、性腺、肺和心最为常见。本试验观察到,鸡患淋巴白血病时各组织器官内的肿瘤细胞均由大小、形状比较一致的成淋巴细胞组成,这与马立克病时多类型、多形态的瘤细胞有显着的差别。此外,发生淋巴白血病时腔上囊中的肿瘤细胞都分布在淋巴滤泡内部,致使滤泡膨大、变形,而马立克病时腔上囊中的瘤细胞主要位于滤泡之间,以此可作为鉴别诊断的主要组织学依据。参考文献(References)1 李普霖.动物病理学M.长春:吉林科学技术出版社,1994.LI Pu-lin.Animal PathologyM.Changchun:Jilin Science andTechnology Press,1994.(in Chinese)2 孟丽.鸡淋巴细胞性白血病的诊断J.中国畜禽种业,2008,4(6):42.MENG Li.Diagnosis of chicken lymphocyte leukemiaJ.TheChinese Livestock and Poultry Breeding,2008,4(6):42.(inChinese)3 王全胜,闫强,敖日格勒.禽白血病研究进展J.兽医导刊,2