瓜馥木化学成分研究论文

1、瓜馥木化学成分研究论文【摘要】目的研究瓜馥木的化学成分，寻找抗肿瘤的活性成分。方法采用硅胶柱色谱技术进行分离纯化，运用波谱法进行结构解析，并进行体外抗肿瘤活性筛选。结果从瓜馥木根的乙醇提取物中分离得到1个化合物，经理化常数和波谱(EIMS，1HNMR，13CNMR)分析，鉴定为马兜铃内酰胺A，化合物马兜铃内酰胺A对肺腺癌GLC82、白血病细胞株HL60的细胞株的IC50分别为：234.35，101.17molL-1。结论马兜铃内酰胺A生物碱化合物具有一定的抗肿瘤活性。 【关键词】瓜馥木化学成分分离和提纯马兜铃内酰胺A抗肿瘤活性 瓜馥木Fissistigmaoldhamii（Hemsl.）Mer

2、r.为番荔枝科（Annonaceae）瓜馥木属(Fissistigma)植物，根入药，性温味辛，具有祛风除湿、镇痛消肿、活血化淤等功效，主要用于跌打损伤、关节炎及坐骨神经痛的治疗1。为寻找反映瓜馥木中抗炎、镇痛活性特征成分，我们对瓜馥木化学成分进行了系统研究，已报道O-甲基芒籽碱(O-methyl-moschtaoline)、酸花木碱(毛叶含笑碱，oxylopine)、氧代克斑宁(7-oxocrebanine)和胡萝卜苷(daucosterol)等成分的研究2。本文报道另一个化合物的分离和结构鉴定，并探讨该化合物对肺腺癌GLC-82及HL60白血病细胞株的抗肿瘤活性。 1仪器与材料 显微熔点测

3、定仪(温度计未校正)；AB-HS型质谱仪；DRX-400型超导核磁共振仪，TMS为内标。3164型二氧化碳培养箱(美国FORMA公司)；比色采用ThermoLabsystemsMultiskanMK3全自动酶标仪。 药材采于江西，由江西中医学院赖学文副教授鉴定为瓜馥木Fissistigmaoldhamii（Hemsl.）Merr.，标本存于广东医学院药学教研室。 2方法与结果 2.1提取与分离瓜馥木根药材经粉碎后用乙醇加热回流提取（3h3次），合并滤液，减压浓缩得总浸膏590g。浸膏用5%HCl捏溶处理后其酸不溶性部分用蒸馏水洗至中性，用水分散均匀，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯进行提取，回收溶

4、剂得石油醚部分33.2g，氯仿部分63g，醋酸乙酯部分45.4g。氯仿部分反复进行硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇为洗脱剂，得马兜铃内酰胺A化合物(15mg)。 2.2结构鉴定采用化学和光谱的方法进行结构鉴定。该化合物与生物碱试剂反应呈阳性，推测该化合物为生物碱。EI-MS给出分子离子m/z265(M+,100)，结合1H-NMR、13C-NMR，推断分子式为C16H11NO3。UVMeOHmaxnm:230,265,277；IRKBrmaxcm-1：3450，3251（羟基，NH），1691，1656(羰基)，1614，1502(苯环)；EI-MS谱：265(M+,100)，250(M+-CH3

5、,51)，222(M+-CH3-CO,18)，UV，IR，EI-MS的特征显示该化合物属于马兜铃内酰胺类成分3。1H-NMR显示在4.04(3H,s)为一甲氧基信号；7.089.26ppm处有6个芳香质子信号，其中9.26（1H,m），7.49（2H,m），7.77（1H,m）显示出未取代的D环有4氢，H-5由于受3个环的去屏蔽作用，出现在最低场的9.26ppm处，可知7.49（2H,m）为H-6,H-7，7.77（1H,m）为H-8；7.08（1H,s）及7.68（1H,s）二个孤立芳香质子信号显示A、C环上各有一孤立芳香质子，因此，A环中有两个芳香质子被取代。13C-NMR显示在171.8

6、ppm处为内酰胺羰基信号,在150.7107.1有14个芳碳信号，DEPT显示有9个季碳、6个叔碳信号，57.4处为甲氧基。该化合物的UV，IR，1H-NMR，13C-NMR，EI-MS数据与文献3，4中的马兜铃内酰胺A（AristolactamA）数据基本一致。因此，该化合物被鉴定为AristolactamAII，结构式见图1。 图1瓜馥木中各化合物结构式（略） 2.3样品体外培养抗肿瘤作用实验 2.3.1实验分组实验分为空白组：每孔仅为1640培养液，在测光密度值（OD值）时用于调“0”；对照组：每孔为含1640培养液稀释的单细胞悬液；实验组：又分1.00103，1.00102，10.00

7、，1.00，0.10，1.0010-2molL-1马兜铃内酰胺A组，即每孔含1640培养液稀释的单细胞悬液和不同浓度马兜铃内酰胺A。精密称量马兜铃内酰胺A后用少量DMSO充分溶解，再用1640培养基稀释成不同浓度备用。各组每孔溶液总体积均为200.00l。 2.3.2MTT法检测药物的抗肿瘤实验取已贴壁的GLC-82细胞，用质量浓度为0.25%胰酶消化后，计数活细胞，用1640培养基稀释成5104/ml的单细胞悬液备用；取对数生长期的悬浮HL60细胞用1640培养基稀释成1105/ml的单细胞悬液备用。分别将两种单细胞接种到96孔培养板，每组设4个复孔，对照组每孔加单细胞悬液200.00l，不

8、同浓度实验组每孔加单细胞悬液190.00l和不同浓度的马兜铃内酰胺A10.00l；对照组和不同浓度实验组细胞接种后置于37，100相对湿度，含5CO2和95%空气的培养箱中预培养48h；然后取出，仔细地吸去上清液，于每孔中加入150.00lDMSO，轻轻振荡以使甲臜完全溶解；约1h后于490nm波长处用酶标仪测OD值。按抑制率=（1-实验组OD值/对照组OD值）100%计算。采用SPSS11.5统计软件包进行统计分析，各组间样本均数采用Dunnett-t检验。实验数据及分析结果见表1。并用Probit回归法5估算半数抑制浓度（IC50值），马兜铃内酰胺A对GLC-82，HL60细胞的IC50分

9、别为234.35，101.17molL-1。 表1马兜铃内酰胺A对GLC-82及HL60细胞抑制的影响（略） 与对照组比较，*P 3讨论 本研究用MTT法研究发现：从瓜馥木中分离得到的单体化合物马兜铃内酰胺A碱对GLC-82细胞和HL60细胞均表现出一定的肿瘤抑制作用，且抑制作用随药物浓度的增加而增强，作用强度与剂量呈一定的量效关系。 在低剂量1molL-1以下时，马兜铃内酰胺A对肺腺癌GLC-82细胞株的作用不明显(P0.05)，但对于白血病HL60细胞株抑制作用在剂量0.10molL-1以上时作用明显（P 从瓜馥木中分离得到的O-甲基芒籽碱、氧代克斑宁等化合物对肺腺癌GLC-82细胞株亦有

10、抗癌活性且作用强度相似（IC50分别为83.31，109.17molL-1）5，但马兜铃内酰胺A的IC50为234.35molL-1，其作用强度不同，可能与化合物的结构类型有关（见图1）。化合物O-甲基芒籽碱、氧代克斑宁为阿朴菲类型生物碱，马兜铃内酰胺A为马兜铃内酰胺类型生物碱，研究表明针对肺腺癌GLC-82细胞株，化合物的结构母核起主导作用，各取代基团对它的生物活性有一定的影响。初步构效关系研究表明，阿朴菲类型的生物碱对肺腺癌GLC-82细胞株的毒性作用稍强。 瓜馥木中生物碱为瓜馥木抗炎、镇痛作用主要有效成分6，MTT实验法表明瓜馥木中的生物碱亦具抗肿瘤活性作用，提示瓜馥木药材值得深入研究。

11、 【参考文献】 1江苏新医学院.中药大辞典,第22版M.上海：上海科学技术出版社，2007：758. 2彭新生，高幼衡，刁远明，等.瓜馥木的化学成分研究()J.中草药,2006,37(7):984. 3余冬蕾，郭剑，廖永红，等.柴玉盘中的新内酰胺J.植物学报,1999,41(10):1104. 4Wen-LiLo,Fang-RongChang,Yang-ChangWu.AlkaloidsfromtheLeavesofFissistigmaglaucescensJ.JorunaloftheChineseChemicalSociety，2000，47(6)：1251. 5彭新生，周艳芳.氧代克斑宁

12、对人肿瘤细胞GLC-82、HL60增殖的影响J.中药药理与临床，2007，23(5)：71. 6彭新生，高幼衡，刁远明.瓜馥木成分与药理研究进展J.江西中医学院学报，2004，16(5)：805 1、最灵梦想是一个天真的词，实现梦想是个残酷的词。21.2.222.22.202112:3512:35:312月-2112:352、只有收获，才能检验耕耘的好处；只有贡献，方可衡量人生的价值。二二一二二一年二月二十二日2021年2月22日星期一3、不要放弃，你要配的上自己的野心，也不要辜负了所受的苦难。12:352.22.202112:352.22.202112:3512:35:312.22.2021

13、12:352.22.20214、找一个理由，否认忧伤，笑容就会灿烂到无所不在。2.22.20212.22.202112:3512:3512:35:3112:35:315、成功与不成功之间有时距离很短只要后者再向前几步。二月 21星期一, 二月 22, 20212/22/20216、只要努力抬起你的双脚，胜利将属于你。12时35分12时35分22-2月-212.22.20217、青春如此华美，却在烟火在散场。21.2.2221.2.2221.2.22。2021年2月22日星期一二二一二二一年二月二十二日8、真正没有资格谈明天的人，是那个不懂得珍惜今日的人。12:3512:35:312.22.20

14、21星期一, 二月 22, 20211、你始终不属于我，属于我的只是我自己。21.2.222.22.202112:3512:35:312月-2112:352、一份信心，一份努力，一份成功；十分信心，十分努力，十分成功。二二一二二一年二月二十二日2021年2月22日星期一3、你是唯一的，你是十分独特的，你就是你生命中的第一名。12:352.22.202112:352.22.202112:3512:35:312.22.202112:352.22.20214、要跟成功者有同样的结果，就必须采取同样的行动。2.22.20212.22.202112:3512:3512:35:3112:35:315、我们

15、的生命，就是以不断出发的姿势得到重生。二月 21星期一, 二月 22, 20212/22/20216、只要站起来的次数比倒下去的次数多，那就是成功。12时35分12时35分22-2月-212.22.20217、自知之明是最难得的知识。21.2.2221.2.2221.2.22。2021年2月22日星期一二二一二二一年二月二十二日8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。12:3512:35:312.22.2021星期一, 二月 22, 20211、最灵繁的人也看不见自己的背脊。21.2.222.22.202112:3512:35:312月-2112:352、最困难的事情就是认识自己。二二一二二一年二月二十二日2021年2月22日星期一3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。12:352.22.202112:352.22.202112:3512:35:312.22.202112:352.22.20214、与肝胆人共事，无字句处读书。2.22.20212.22.202112:35