临床微生物学检验：绪论、生物安全

1、2021-6-81 临床微生物学检验 2021-6-82 绪绪 论论 学习目的和要求 1、了解教材内容、本学期学习的内容 2、复习并掌握微生物的概念与分类 3、熟悉临床微生物学的概念与任务 4、了解临床微生物学检验的现状和发展 2021-6-83 实验课 2021-6-84 一、微生物学、医学微生物和临床微生物学一、微生物学、医学微生物和临床微生物学 微生物（微生物（microorganismsmicroorganisms）是广泛分布于自然界 中的一群肉眼看不见、形体微小、结构简单肉眼看不见、形体微小、结构简单的微 小生物，常以单细胞、细胞群体或非细胞状态存 在。在提供营养物质和适宜环境的条件

2、下，一般 都能独立生活，迅速生长繁殖。 微生物的测量单位：微生物的测量单位：m、 nm 微生物分类：？ 2021-6-85 根据分化、结构和组成微生物可分为三类： 1、 原核细胞型微生物（种类、特点？） （procaryotic microorganism) 2、 真核细胞型微生物（种类、特点？） (eucaryotic microorganism) 3、 非细胞型微生物（种类、特点？） （non-cell microorganism) 2021-6-86 原核细胞型微生物 种类：种类：细菌、衣原 体、支原体、立克 次体、螺旋体、放 线菌。 特点：特点：小、原始核、 细胞器不完整。 真核细胞型

3、微生物 种类：种类：真菌、藻类。 特点：特点：较大、典型 核、细胞器完整。 2021-6-87 微生物学（microbiology)： 是生命科学的一门重要学科，是研究 微生物的种类、生物学特性以及与人类、 动植物等相互关系的科学。 2021-6-88 医学微生物学(medical microbiology)： 主要是研究与医学有关的病原微生物 的生物学特性、致病性、免疫性以及特异 性诊断和预防治疗措施的学科。 2021-6-89 二、临床微生物学的概念和任务 临床微生物学(clinical microbiology)概念： 为感染性疾病的诊断、治疗和预防提供实 验室科学依据的学科。 2021

4、-6-810 临床微生物学的任务 1、研究感染性疾病的病原特征 感染？传染？ 毒力、耐药性 2、提供快速准确的病原学诊断 3、对合理使用抗菌药物提出建议和指导 4、监控医院感染 2021-6-811 感染：感染：多指个体现象， 病原菌 个体 个体发病。 必备条件是：病原体、宿主 传染：传染：多指多指个体间现象，个体间现象， 病原菌 个体感染 下一个体感染 。 必备条件是：传染源、传播途径、易感人群。 感染感染是个体内部发生的变化,传染传染既有个体内部 变化，又是个体之间的相互影响。 2021-6-812 中华人民共和国传染病防治法（中华人民共和国传染病防治法（20042004年修订）年修订）

5、本法规定的传染病分为甲类、乙类和丙类。 甲类传染病是指：甲类传染病是指：鼠疫、霍乱。 乙类传染病是指：乙类传染病是指：传染性非典型肺炎、艾滋病、 病毒性肝炎、脊髓灰质炎、人感染高致病性禽流感、 麻疹、流行性出血热、流行性脑脊髓膜炎、流行性乙 型脑炎、狂犬病、登革热、炭疽、细菌性和阿米巴性 痢疾、肺结核、伤寒和副伤寒、百日咳、白喉、新生 儿破伤风、猩红热、布鲁氏菌病、淋病、梅毒、钩端 螺旋体病、血吸虫病、疟疾。 丙类传染病是指丙类传染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、 风疹、急性出血性结膜炎、麻风病、流行性和地方性 斑疹伤寒、黑热病、包虫病、丝虫病，除霍乱、细菌 性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以

6、外的感染性腹泻 病。 2021-6-813 三、临床微生物检验技术 课程目标 掌握微生物检验的基本技术、临床常见病 原微生物的鉴定方法（生物学特性、致病 性、免疫性） 、检验程序、药敏检测。 熟悉临床微生物实验室的生物安全和全面 质量控制方法 了解临床少见微生物的特性、检测和药敏。 2021-6-814 四、临床微生物学检验的现状与发展 规范化临床微生物实验室的建立 感染性疾病目前现状的特点 易感人群增加、新病原体出现（已控制的病原体 再现）、非感染性疾病中感染因子起作用 细菌的耐药现象日益严重 发展：病原微生物诊断快速化、自动化、智 能化，微生物样本库的建立等 免疫、分子生物学技术和计算机技

7、术的 发展推动了临床微生物学的进步 2021-6-815 2021-6-816 2021-6-817 MALDI-TOF-MS（基质辅助激光解吸/电离 飞行时间质谱, 英文名Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry） 组成： 基质辅助激光解吸电离离子源（MALDI） 和飞行时间质量分析器（TOF）。 2021-6-818 2021-6-819 2021-6-820 临床微生物实验室临床微生物实验室 安全防护安全防护 2021-6-821 学习目的和要求学习目的和要求 1、掌握微生物

8、危险度4个级别的概念，实验室生 物安全防护水平的分级，、级生物安全 柜的特点及应用范围等。 2、熟悉个人防护设备的内容、生物安全操作规范、 实验室暴露的处理和感染性废弃物的处理 2021-6-822 第一节 微生物实验室安全防护 实验室生物安全防护：采用合理的实验 室建筑设施、安全的防护设备、规范的微 生物操作技术防止相关人员、环境暴露于 实验室的感染性微生物和毒素。 2021-6-823 2021-6-824 2021-6-825 http:/ 2021-6-826 生物危害标识 2021-6-827 引起实验室相关感染最常见引起实验室相关感染最常见 的微生物的微生物 (1)细菌：伤寒沙门菌

9、、结核分枝杆菌、伤寒沙门菌、结核分枝杆菌、 布鲁菌属、布鲁菌属、Q热立克次体、鹦鹉热衣原体热立克次体、鹦鹉热衣原体 等。等。 (2)病毒：病毒：血液传播病毒、委内瑞拉马脑血液传播病毒、委内瑞拉马脑 炎病毒等。炎病毒等。 (3) 真菌：真菌：皮炎芽生菌、球孢子菌等。皮炎芽生菌、球孢子菌等。 2021-6-828 如何预防实验室相关感染的发生 合理设计的实验室建筑设施 配备适宜的安全设备 制定标准化操作规程 培训合格的实验室工作人员 完善实验室管理 2021-6-829 当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须 进行微生物危害评估。应依据传染性微生物致病能力的程度、 传播途径、稳定性、感

10、染剂量、操作时的浓度和规模、实验对 象的来源、是否有动物实验数据、是否有有效的预防和治疗方 法等诸因素进行微生物危害评估。 通过微生物危害评估确定对象微生物应在哪一级的生物安 全防护实验室中进行操作 根据危害评估结果，制定相应的操作规程、实验室管理制 度和紧急事故处理办法，必须形成书面文件并严格遵守执行必须形成书面文件并严格遵守执行。 一、微生物危险度评估 2021-6-830 感染性微生物的危险度等级分类（WHO) 危险度危险度1 1 级级（无或极低的个体和群体危险） 不太可能引起人或动物致病的微生物。 危险度危险度2 2 级级（个体危险中等，群体危险低） 病原体能够对人或动物致病，但对实验

11、室工作人员、 社区、牲畜或环境不易导致严重危害。 实验室暴露也许会引起较严重感染，但对感染有有 效的预防和治疗措施，并且疾病传播的危险有限。 危险度危险度3 3 级级（个体危险高，群体危险低） 病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不 会发生感染个体向其他个体的传播，并且对感染有 有效的预防和治疗措施。 危险度危险度4 4 级级（个体和群体的危险均高） 病原体通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容 易发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没 有有效的预防和治疗措施。 毒力 传染性 预防治疗能力 +- - 2021-6-831 微生物微生物生物安全水平生物安全水平危险等级危险等级 结核分枝

12、杆菌33（已有疫苗） 羊流产布氏杆菌33 鼻疽伯克霍尔德菌33 类鼻疽伯克霍尔德菌2/33 立克次体33 鼠疫耶尔森菌2（有疫苗）、3 细菌中危险度细菌中危险度3级的微生物级的微生物 2021-6-832 二、实验室生物安全防护水平（WHO) 实验室可以分为： 一级生物安全防护水平（biosafety level 1,BSL1) 二级生物安全防护水平(BSL2) 三级生物安全防护水平(BSL3) 四级生物安全防护水平(BSL4) 根据操作不同危险度等级微生物来决定实验室的生 物安全防护水平（实验室建筑设施、生物安全防 护设备、规范的微生物操作规程）。 2021-6-833 危险 度等 级 生物

13、安全水平实验室类型实验室操作规范安全设备 1级级基础实验室 一级生物安 全水平 基础的教学、研 究 GMT（常规的微生 物操作技术规范） 不需要，开放实验台 2级级基础实验室 二级生物安 全水平 初级卫生服务； 诊断、研究 GMT ，加防护服、 生物危害标志 开放实验台，此外需BSC 用于防护可能生成的气溶气溶 胶胶 3级级防护实验室 三级生物安 全水平 特殊的诊断、研 究 在二级生物安全防 护水平上增加特殊 防护服、进入制度、 定向气流 BSC 和或其他所有实验 室工作所需要的基本设备 4级级最高防护实验 室四级生 物安全水平 危险病原体研究在三级生物安全防 护水平上增加气锁 入口、出口淋浴

14、、 污染物品的特殊处 理 级BSC 或级BSC并穿 着正压服、双开门高压灭 菌器（穿过墙体）、经过 滤的空气 与微生物危险度等级相对应的相对应的安全防护水平、操作和设施(WHO) 2021-6-834 生物安全基本设备是确保实验室工作人员不与 致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。 包括：包括：生物安全柜、高压灭菌器、紧急喷淋及 洗眼装置和个人防护装备 1. 生物安全柜（biosafety cabinet，BSC） 是处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安 全装置。 三、实验室生物安全基本设备 2021-6-835 实验室应按要求分别配备、级生物安全 柜。 所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产

15、生气溶 胶的操作，除实际上不可实施外，都必须在生物 安全柜内进行。不得用超净工作台代替生物安全 柜。 2021-6-836 气溶胶 aerosol 悬浮于气体介质中粒径一般为悬浮于气体介质中粒径一般为 0.01m-100m0.01m-100m的固体、液体的固体、液体 微小粒子形成的胶溶状态颗粒。微小粒子形成的胶溶状态颗粒。 2021-6-837 生物安全柜（BSC）根据： 吸入空气的速度 再循环空气量和排出空气量 排风系统 压力设置 等不同分成三级 2021-6-838 I I级生物安全柜级生物安全柜 （class I biosafety cabinet） 工作状态时保证 工作人员和环境 不受

16、侵害，但不 保证实验对象不 受污染。（可用 于操作危险度1、 2、3级病原体） 2021-6-839 级生物安全柜级生物安全柜 （class biosafety class biosafety cabinetcabinet） 工作状态下遵守操作规程时既保证工 作人员不受侵害，又保证实验对象 不受污染。可用于操作危险度1、2、 3级的微生物。（最常用） 2021-6-840 二级生物安全柜 CLASS II 级生物安全柜根据结构以及气流 分配不同（主要是外排气流不同）分为： A型: A1和A2（30%气流外排） B型: B1 （70%气流接管道外排） B2 （100%气流接管道外排） 2021-

17、6-841 2021-6-842 II级级B2型生物安全柜型生物安全柜 2021-6-843 III级生物安全柜 全封闭的、气密结构的通风柜 通过与柜体联结的橡胶手套进行操作； 柜内保持至少120Pa的负压；送风通过HEPA抽 入内；外排的气流经过双层双层HEPA过滤或经 HEPA后再经燃烧燃烧处理。 可处理危险度1、2、3、4级微生物 2021-6-844 IIIBSC A：用于连接等臂长手套的 舱孔；B：窗口；C：两个 排风HEPA 过滤器；D：送 风HEPA 过滤器；E：双开 门高压灭菌器或传递箱；F： 化学浸泡槽。安全柜需要 有与独立的建筑物排风系 统相连接的排风接口。 级生物安全柜（

18、手套箱）示意图 2021-6-845 2021-6-846 2021-6-847 2. 个人防护装备个人防护装备 要求要求： 实验室任何个人必须加强个人防护加强个人防护。装备 应符合国家有关标准的要求标准的要求。在危害评估 的基础上，按不同级别的防护要求选择适 当的个人防护装备。实验室对个人防护装 备的选择、使用、维护应有明确的书面规应有明确的书面规 定、程序和使用指导。定、程序和使用指导。 2021-6-848 2021-6-849 2021-6-850 2021-6-852 四、标准操作规范（SOP) (Standard Oprating Procedure) （一）感染性或潜在感染性物质的操作： 标本采集、运送、接受和接