三种药物血药浓度的高效液相色谱方法

1、三种药物血药浓度的高效液相色谱方法癫痫是一种反复发作的神经系统疾病，需长期用药才能控制发病，有的患者甚至需要终身用药。苯巴比妥（ PB） 、苯妥英钠（ PH） 和卡马西平（ CBZ） 是临床常用的抗癫痫药物，广泛应用于儿童患者。PB 主要用于癫痫大发作及癫痫持续状态，PH 是治疗癫痫大发作和局限性发作的首选药物，CBZ 是治疗单纯性局限性发作和大发作的首选药物之一1.这三种药物治疗指数低、安全范围窄、个体差异大，使用不当易致疗效不佳或严重不良反应。因其血药浓度与疗效和毒性关系密切，故监测其血药浓度可提高临床用药的有效性和安全性。本研究以艾司唑仑为内标，建立了同时测定 PB、PH、CBZ 三种药

2、物血药浓度的高效液相色谱（ HPLC） 方法，现报道如下。1 仪器和试药。1. 1 仪器。Agilent1260 高效液相色谱仪（ G1314F 紫外检测器，Chemstation 工作站） ; AUW220D 电子天平（ 日本岛津） ;TG16-W 微量高速离心机（ 长沙湘仪离心机仪器有限公司） ; WH-2 微量旋涡混合仪（ 上海沪西分析仪器厂） .1. 2 试药。PB 对照品（ 171222-201201 ） 、PH 对照品（ 100210-201110） 、CBZ 对照品（ 100142-201105） 、艾司唑仑对照品（ 171219-201112） 均购自中国药品生物制品检定所（

3、供含量测定用） .甲醇为色谱纯，乙酸乙酯为分析纯，水为二重纯化水。2 方法和结果。2. 1 色谱条件。色谱柱 Hypersil ODS2（ 150 mm×4. 6 mm,5 μm） ,检测波长 240 nm,柱温 25 ，流速 0. 9 mL/min,进样量10 μL,流动相甲醇-水（ 54 46） .以内标法定量。2. 2 对照品溶液配制。精密称取 PB 对照品 13. 03 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 521 2 mg/mL 的 PB 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 41. 70 &m

4、u;g/mL 的 PB 对照品溶液。精密称取 PH 对照品 11. 33 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 453 2 mg/mL 的 PH 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 36. 26 μg/mL 的 PH 对照品溶液。精密称取 CBZ 对照品 9. 25 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 370 0 mg/mL 的 CBZ 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 29. 60 μg/mL 的 CBZ 对照品溶液。精密称取艾司唑仑对照品

5、10. 10 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 404 0 mg/mL 的艾司唑仑对照品溶液，作为内标溶液备用。2. 3 血浆样品处理。精密量取血浆样品 400 μL 于 10 mL 离心管中，加内标溶液 10 μL、乙酸乙酯 3 mL,混匀，3 000 r/min 离心10 min,取上清液用氮气吹干，加 100 μL 甲醇复溶，取10 μL 进样。2. 4 标准曲线及线性范围。结果见表 1.取空白血浆，分别加入不同量的 PB、PH 和 CBZ 对照品溶液，混匀，作为标准曲线系列浓度标准品，按2. 3;项下方法处理，用内标法定量，分别计

6、算得三药标准曲线的回归方程。2. 5 专属性实验。结果见图 1.PB、PH、CBZ 及内标物艾司唑仑出峰处无杂质干扰，峰形尖锐，保留时间分别为 4. 6、8. 9、10. 5、14. 3 min.2. 6 精密度实验。分别配制低、中、高三个不同浓度的 PB、PH、CBZ 混合血浆样品，按2. 3;项下方法处理，每个浓度平行测定5 次，连续测定 5 d,记录测得浓度，计算日内、日间精密度（ RSD） 及相对偏差。三种药物低、中、高三个不同浓度的日内、日间 RSD 均80 μg/mL5） ,最高血药浓度为 54. 31 μg/mL.有 2 例次出现轻度中毒症状，其中 1 例次出现嗜睡，

7、血药浓度 46. 72 μg/mL; 1 例次出现感觉迟钝，血药浓度 50. 24 μg/mL.（ 2） 3 例次 PH 血药浓度超过了有效血药浓度范围（ 10 20 μg/mL） ,但未达到中毒血药浓度（ PH 中毒血药浓度40 μg/mL,致死血药浓度100 μg/mL5） ,均未出现中毒症状。（ 3）20 例次 CBZ 血药浓度达到了中毒血药浓度（ CBZ 中毒血药浓度12 μg/mL5） ,最高为 16. 28μg/mL.4 例次出现中毒症状，其中 2 例次出现恶心呕吐，2 例次出现少尿。（ 4） 三种药物血药浓度超过最大有效血药浓度时，虽然总有效率可达 100%,但不能说明血药浓度越高效果越好，而引起的药物不良反应应引起高度重视。参考文献：1杨宝峰。 药理学M. 第 7 版。 北京： 人民卫生出版社，2010: 133-136.2翁爱彬，方剑英，郑荔莉。 RPHPLC 法同时测多索茶碱和3 种抗癫痫药血药浓度J. 湖南中医药大学学报，2013,33（ 6） : 79-81.3张志国，李 冬，方 芳。 苯巴比妥、苯妥英钠及卡马西平血清药物浓度检测方法验证J. 黑龙江医药科学，