还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法_第1页
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文档简介

1、还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使 用。二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同， 可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的再分别求出样品中还原糖双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨

2、基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时， 每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。6COOHCOOH(fV屮1. i* 引側0OHOH三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH试纸。2. 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管：20mLX 11大离心管：5OmL2烧杯：lOOmlXl三角瓶：lOOmlXl容量瓶：100mL3(6)刻度吸管：ImK 1; 2mL 双糖 三糖 戊糖 己糖 酮糖醛糖 实验室常用的展开剂： 正丁醇:HAc：H2O=4:1:5 常用的显色剂:0.1N AgNONH4OH（SN）=1:1（灵敏度高，但斑点易扩散）ANQ/丙酮:NaOH/乙醇=1:1（克服上面缺点）（显色剂书上给出许多，同学们可以自己看）样品的处理可采用常规法如：糖的提取和蛋白质的除去可看前面讲的。根据R值可求出各种糖的R与标准样品的R值进行比较，可确定出糖的种

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