微柱凝胶卡标准操作程序资料

1、文件类别：医疗管理编码： XC-DJPS-YLGL-XK-001-01初审人：审核人：批准人：初审日期： 2014 年 1 月 20 日批准日期：2014 年 10 月 20 日执行日期：2014 年 10 月 20 日回顾日期：2014 年 10 月 20 日微柱凝胶卡标准操作程序（SOP）襄城县人民医院血库目录1、ABO.RhD 血型抗原检测卡标准操作程序（ SOP） 32、ABO 、RhD 血型检测卡标准操作程序（ SOP）53、不规则抗体筛检卡标准操作程序 （SOP）84、抗人球蛋白交叉配血卡标准操作程序 （ SOP） 105、新生儿溶血病检测卡标准操作程序 （SOP） 116、新 生

2、儿溶血病 母体 IgG 抗体效 价检测卡标 准操作程 序（SOP）137、新 生儿溶血病 母体 IgG 抗体效 价检测卡标 准操作程序（SOP）158、微柱凝胶检测卡在实验室操作的注意事项 17、 ABO.RhD 血型抗原检测卡标准操作程序（SOP)一、准备工作1、微柱凝胶试剂卡的准备： 观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温 （1825）平衡，再用专用离心机离心 5 分钟。2、检测标本的准备：红细胞悬液的制备： 取被检者压积红细胞 10微升，加入 1 毫升红 细胞稀释液，此浓度大约为 0.8% 1%。外观应为均匀淡红色，无絮 状物和血块。二、操作步骤1 将准备好的微柱凝胶试

3、剂卡做好标记。2 将配制好的被检者红细胞悬液分别加入第 1至第 3管或第 第 4 至第 6 管中，每管 50 微升。3 即刻使用专用离心机离心 5 分钟（900rpm2 分钟，1500rpm3 分钟），取出肉眼判定结果。血型判定见表：血型抗A抗B抗DD阳性A+B+O+AB+D 阴 性A+B+OAB+三、注意事项1、检测标本必须为抗凝血。2、红细胞标本一定不能被细菌污染， 否则出现假阳性反应。 尽可 能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、如在微柱凝胶管中出现溶血现象， 强烈提示为红细胞抗原抗体 阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析， 并向上级主管技术人员报告并讨论。4、若结果

4、为或 1需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。5、红细胞悬液的浓度控制在 0.8 1之间，否则可能出现漏检 或混合凝集。6、每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温， 以防冷凝集。7、试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放在 4冰箱，建议 每 1-2 个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献： 1、输血技术学2、全国临床检验操作规程第三版、 ABO 、 RhD 血型检测卡标准操作程序（ SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（二）检测标本的

5、准备：1红细胞悬液的制备 ：取被检者压积红细胞 10微升，加入 1 毫 升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2血清标本的制备 ：采集被检对象静脉血，放入兔脑粉或其它 促凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝 剂试管中，4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心，2000r/min,10 分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀） 。二、操作步骤1. 将准备好的 ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记2. 将待检者 0.8%1红细胞悬液分别加入第 1至第 4 管中，每 管 50ul3. 将待检者血清分别加入第 5 和第 6 管，每管 50ul4. 将已知

6、的 A型和 B型红细胞 0.8%-1%浓度悬液或 ABO血型反定 型红细胞试剂，每管 50ul 分别加入第 5 和第 6 管5. 即刻使用专用离心机离心， 900rpm2分钟，1500rpm3分钟，取 出肉眼判定结果。结果判定：阳性结果 ：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗 原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。阴性结果： 被检红细胞抗原无相应的抗体结合， 不出现特异性抗 原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。血型判定：血型抗 A抗 B抗 D阴性照对 照A 细胞B 细胞D阳性A+B+O+AB+阴性DA+B+O+AB+三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。2. 红细胞标本

7、一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可 能应用当日采集的新鲜血做本试验。3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白， 否则标本中纤维蛋 白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体 阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析， 并向上级主管技术人员报告并讨论。5. 若结果为或 1需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原。6. 红细胞悬液的浓度控制在 0.8 -1%之间，否则可能出现漏检或混合凝集。7. 每日实验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷 凝集。8 试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放

8、在 4冰箱，建议每1-2 个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献： 1、输血技术学2、临床检验操作规范第三版三、不规则抗体筛检卡标准操作程序（ SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备 ：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（二）检测标本的准备：1红细胞悬液的制备 ：取被检者压积红细胞 10微升，加入 1 毫 升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2血清标本的制备 ： 采集被检对象静脉血，放入兔脑粉或其它 促凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝

9、剂试管中，4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心，2000r/min,10 分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀） 。二、操作步骤1、将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记。2、将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中，各一滴 （或 50 l ）。3、分别立即加入被检者血清 1滴（或 50l ）。4、加样后的试剂卡，置 37中孵育 15 分钟。5、使用专用离心机离心 5分钟，（900rpm2分钟， 1500 rpm3 分钟），取出肉眼观察结果。结果判定 ：根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反映格局来判定 结果例：按（- ）； （ 4+）； III （ - ）的实验结果及提供如下的筛

10、检红细胞反应格局来分析筛检细胞反应格局DCEceJkaJKbMNSsFyabFybDiaKkLeab LeP1阴性结果用排除法；阳性结果用可能包含法以前五种抗原为例：（- ） 可排除 D、C、e；（ 4+） 判断可能含有 D、E、c；III （- ） 可排除 D、C、c、e； 综上，可认为：此样品血清中可能含有 E三、注意事项1、应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞 时，一定要用适量 EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入 4-10 冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。 尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、

11、血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维 蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗 体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血， 故对此标本一定认真分析， 并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。5、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6、筛检细胞或谱细胞悬液的浓度严格控制在 0.8%1之间。7、试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放在 4冰箱，建议 每 1-2 个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献： 1、输血技术学2、全国临床检验操作规程第三版四、抗人球蛋白交叉配血卡标准操作程序

12、（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备 ：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（二）检测标本的准备：1红细胞悬液的制备： 将受血者与献血者的红细胞和血浆分离， 各取其压积红细胞 10微升，分别加入含 1 毫升红细胞稀释液的两个 试管中，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。2血清标本的制备 ： 采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其 它促凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗 凝剂试管中， 4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心， 2000r/min,10 分钟，取上清（该上清不得

13、有絮状物或沉淀） 。二、操作步骤1、将准备好的抗人球交叉配血卡做好标记。2、将受血者血清 1 滴（或 50l ）与献血者红细胞 1 滴（或 50 l ）加入主侧管中。3、将受血者红细胞 1 滴（或 50 l ）与献血者血清 1 滴（或 50 l ）加入次侧管中。4、加样后的试剂卡，置 37中孵育 15 分钟。5、使用专用离心机离心 5 分钟，900rpm2分钟，1500 rpm3分钟， 取出肉眼观察结果。三、结果判定：1、阴性结果 ：红细胞完全沉降于凝胶管底部，表明受血者与献 血者血型相合。2、阳性结果 ：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，表明受血 者与献血者血型不相合。四、注意事项1、应用直

14、接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时， 一定要用适量 EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入 4-10 冰 箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。2、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽 可能应用当日采集的新鲜血做本试验。3、血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维 蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。4、如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗 体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血， 故对此标本一定认真分析， 并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。5、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6、红细胞悬液的浓度

15、控制在 0.8%1之间。7、试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放在 4冰箱，建议 每 1-2 个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。10五、新生儿溶血病检测卡标准操作程序SOP)一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（ 二） 试剂的制备 ： 6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制 备成红细胞标本和血清标本。（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红 细胞最终浓度为 0.8% 1。（五）血清标本的制备：

16、将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促 凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入 无抗凝剂试管中， 4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心， 2000rpm，10 分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。（六）放散试验： 1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤 后的压积血和 6%牛血清白蛋白（或生理盐水）混匀，置于 56孵育 10 分钟，期间不断摇动，离心 1000rpm，2 3 分钟，取上清。即放 散液。2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂 盒做室温放散。参见酸性放散试剂盒使用说明书。二、实验步骤1、直接抗人球蛋白实验， 取新生儿的红细胞

17、0.8% 1悬液 50ul 分别加入卡 1中的 1或其它孔中。 6 孔中。2、使用专用离心机离心 5分钟， 900rpm 2分钟， 1500 rpm 3 分 钟。3、取出，判读结果。4、第二卡游离试验 1 3 孔分别加入 50ul 新生儿血清，放散试 验 46 孔分别加入 50ul 新生儿红细胞放散液。5、将 A型红细胞悬液 50ul 分别加入 1 号、 4号；将 B型红细胞 悬液 50ul 分别加入 2 号、5 号；将 O型红细胞悬液 50ul 分别加入 3 号 6 号孔中。6、37孵育 15 分钟。7、取出，使用专用离心机离心 5 分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3 分钟），取出

18、，判读结果。结果判定 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血11 清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。阴性结果 ：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细 胞扣。表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被 致敏。反应强度 ：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性 反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈 小，反应愈弱（ 2+或 1+）。三、注意事项1、红细胞标本一定不能被细菌污染， 否则出现假阳性反应。 尽可 能应用当日采集的新鲜血做本实验。2、血清标本： 血清标本必须充分去除纤维蛋白， 否则标本中纤维 蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假

19、阳性反应。3、如在微柱凝胶中出现溶血现象， 强烈提示为红细胞抗原抗体阳 性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并 向上级主管技术人员多报告并讨论。4、父亲红细胞标本也可用与其同型的 A型或 B 型红细胞代替。 5洗出尽量多红细胞进行放散； 注意放散的温度不可超过 56， 以防溶血；天冷时放散液注意保温；尽可能多得放散液吸出；注意出 去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤，至少三次。6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。7、红细胞悬液的浓度控制在 0.8%1之间。8、试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放在 4冰箱，建议 每 1-2 个月取出，用专用离心机离

20、心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献： 1、输血技术学2、全国临床检验操作规程第三版12六、新生儿溶血病母体 IgG 抗体效价检测卡标准操作程序（ SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备 ：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（二）试剂配制：用 100ml pH7.4的 PBS溶解 0.154g二硫苏糖醇， 即 0.01M DTT ；或吸取 2Me14.7 l, 加 pH7.4 磷酸盐缓冲液至 1ml 为 0.2M 2-Me 应用液。密闭，避光，保存于 4冰箱内，可使用 1 个 月。（三）标本采集：检查用

21、的血样为孕妇静脉血或新生儿脐带血 5ml, 一般为不抗凝血，无需空腹。同时，提供 3-4ml 胎儿父亲的抗凝 血，对判断母子血型的配合与否是十分有益的。（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红 细胞最终浓度为 0.8% 1。（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促 凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入 无抗凝剂试管中， 4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心， 2000rpm，10 分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。二、操作步骤1、在试管加入 50ul 母体血清和 350ul 生理盐水（为 1：8 稀释）。2、取 6只

22、干净试管，做好标记；在第 1号管中加入等体积 （ 比 如 200ul） 的母体稀释过的血清和 2-Me 应用液或 DTT应用液，置 37 水浴，并密封口， 45-60 分钟，以充分破坏血清中的 IgM 类抗体，混 匀（为 1： 16 稀释）；第 2-6 号管中依次加 100ul 的生理盐水。取 1 号管的混合液 100ul ，加入 2 号管，依次做倍比稀释。结果为： 2 号 1：32稀释， 3号 1：64稀释， 4号 1：128稀释，5号 1：256稀释， 6 号 1： 512 稀释。3、将卡标记好，依次将倍比稀释 50ul 血清分别加入标记卡中。 （可以从 3 号 1：64 开始）4、在所有

23、孔中加入 50ul 父亲的 0.8%-1%红细胞悬液 （或与父亲 同型的 0.8%-1%红细胞悬液），（测定孕妇 ABO血型系统 IgG 血型抗体 效价）；或在所有孔中加入 50ul 标准 O型 0.8%-1%红细胞悬液，（测 定孕妇 ABO血型系统以外 IgG 血型抗体效价）。5、加样后的试剂卡，置 37中孵育 15 分钟。6、用专用离心机离心 5分钟（900 rpm 2 分钟，1500 rpm 3分钟）, 取出，判定结果。结果判定：产生 1+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价 1、阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。 2、阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底13 部形成红细胞

24、扣。传统方法（试管法）： Rh 系统抗体效价 16 有临床意义； ABO 系统抗体效价 64 有临床意义注：据文献报道卡式抗人球蛋白法测出的母体效价值比聚凝胺 和抗人球蛋白试管法高出 1-2 个滴度。故微柱凝胶卡式检测法： ABO 系统抗体效价 256 作为临界值。三、注意事项1、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽 可能应用当日采集的新鲜血做本实验。2、血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤 维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。3、如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体 阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，

25、 并向上级主管技术人员报告并讨论。4、父亲红细胞标本也可用与其同型的 A 型或 B型红细胞代替。5、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。6、红细胞悬液的浓度控制在 0.8%1之间。7、试剂卡应放在 18-25 储存，如若长期放在 4冰箱，建议每1-2 个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。四、参考文献： 1、输血技术学2、全国临床检验操作规程第三版14七、新生儿溶血病母体 IgG 抗体效价检测卡标准操作程序（ SOP）当孕妇 RhD是阴性时，丈夫 RhD是阳性时一、准备工作（一） 微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气 泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 25

26、）平衡，再用专用离心机 离心 5 分钟。（二）试剂配制：用100ml pH7.4的PBS溶解 0.154g二硫苏糖醇， 即 0.01M DTT ；或吸取 2Me14.7 l, 加 pH7.4 磷酸盐缓冲液至 1ml 为 0.2M 2-Me 应用液。密闭，避光，保存于 4冰箱内，可使用 1 个 月。（三）标本采集：检查用的血样为孕妇静脉血或新生儿脐带血 5ml, 一般为不抗凝血，无需空腹。同时，提供 3-4ml 胎儿父亲的抗凝血， 对判断母子血型的配合与否是十分有益的。（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红 细胞最终浓度为 0.8% 1。（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入

27、含兔脑粉或其它促 凝剂的试管中， 10 分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入 无抗凝剂试管中， 4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心， 2000rpm，10 分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。取同体 积的血清和 DTT 混匀， 37孵育 3060 分钟。二、操作步骤1、在试管加入 200ul 母体血清和 200ul 2-Me 应用液，置 37水 浴， 3060 分钟，以充分破坏血清中的 IgM 类抗体。2、 取 6 只干净试管，做好标记；第 1 号管中加入处理后的血清 100ul 和 100ul 生理盐水，混匀（为 1：4稀释）；第 2-6 号管中依次 加 100ul

28、的生理盐水和前一号管中的血清 100ul ，做倍比稀释。 （ 1:8/1:16/1:32/1:64/1:128 ）3、将卡标记好，依次将倍比稀释 50ul 血清分别加入标记卡中。4、在所有孔中加入 50ul 标准 O型 0.8%-1%红细胞 （ 或用 O形红 细胞）悬液，测定孕妇 ABO血型系统以外 IgG 血型抗体效价。5、加样后的试剂卡，置 37中孵育 15 分钟。6、用专用离心机离心 5分钟（900 rpm 2 分钟，1500 rpm 3分钟）, 取出，判定结果。三、结果判定：产生 1+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价1、阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。2、阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底 部形成红细胞扣。参考值： Rh 系统抗体效价 32 有临床意义 注：据文献报道卡式抗人球蛋白法测出的母体效价值比聚凝胺和抗人15 球蛋白试管法高出 1-2 个滴度。四、注意事项1、红