常用染料的激发与发射

1、常用荧光染料的激发和发射波长Fluoresce ntDye （荧光染料）Excitation（激发波长，nm ）Emissi on （发射波长， nm ）Cy2 ?489506GFP（Red Shifted）488507YO-PRO ? -1491509YOYO ?-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa ? 488490520Rhodami ne 110496520ABI,5-FAM494522Oregon Green ?500503522Oregon Green ? 488496524RlboGree n ?500525Rhodam

2、ine Gree n ?502527Rhodami ne123507529Magn esium Gree n ?506531Calcium Gree n ?506533TO-PRO ?-1514533TOTO-1514533ABI,JOE520548BODIPY? 530/550530550Dil549565BODIPY?R542568BODIPY558/568558568BODIPY564/570564570Cy3 ?550570Alexa ? 546555570TRITC547572Magn esium Orange ?550575Phycoerythrin,R & B565575Rhod

3、am ine Phalloidin550575Calcium Orange ?549576Pyro nin Y555580Rhodam ine B555580ABI,TAMRA560582Rhodami ne Red ?570590Cy3.5 ?581596ABI,ROX588608Calcium Crims on ?590615Alexa ? 594590615Texas Red595615Nile Red549628YO-PRO ? -3612631YOYO ? -3612631R-Phycocya nin618642C-Phycocya nin620648TO-PRO ? -364266

4、0TOTO-3642660DiD DilC (5)644665Cy5 ?649670Thiadicarbocya nine651671Cy5.5675694备注：发射波长的颜色及频率颜色波长频率红色约625 740纳米约480 405兆赫橙色约590625纳米约510 480兆赫黄色约565570纳米约530 510兆赫绿色约500565纳米约600 530兆赫青色约485500纳米约620 600兆赫蓝色约440485纳米约680 620兆赫紫色约380440纳米约790 680兆赫荧光染料的使用吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料， 它可对细胞中的DNAffi RNA同时染 色而显示不同

5、颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA 和RNA荧光素双醋酸酯（FDA）: FAD本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。 一旦进入原生质体后，由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它 不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光，无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA溶于1ml丙酮中，避光4C下贮存，使用时取0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用时,使最终浓度为0.01%。荧 光染料HO33342和若丹明123:?活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的 生物染料不能穿透细胞膜， 只有当细胞被固定后改变

6、了细胞膜的通透性， 染料才 能进入细胞内。 但有些活体染料能进入活细胞， 并对细胞不产生毒性作用。 荧光 染料HO33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的 结合，若丹明 123 能与线粒体进行特异的结合。 采用两种荧光染料的混合染液可 对一个活细胞的核和线粒体同时染色。荧光组化实验中应注意的几个问题：1 每种荧光染料，均有自己的最适 PH值, 此时荧光最强。当 pH 改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此 荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2 放荧光染色在20C以下时 荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。3在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭， 造成观察和照相困难。 为此最好用能量小的长波长光 进行观察，需照相时再适当增强激发光。 4一般荧