抑亢丸中芍药苷的质量控制

1、抑亢丸中芍药苷的质量控制 抑亢丸由羚羊角、白芍、天竺黄、桑椹、延胡索（醋炙）、 青皮（醋炙）、香附、玄参、石决明、黄精、黄药子、天冬、女 贞子、地黄等十四味药材组成，具有育阴潜阳，豁痰散结，降逆 和中等功效，用于瘿病（甲状腺机能亢进）引起的突眼，多汗心 烦，心悸怔忡，口渴，多食，肌体消瘦，四肢震颤等 1 。抑亢 丸方中主要成分白芍为毛茛科植物芍药 Paeonia lacti flora Pall. 的干燥根 2 。本实验采用薄层色谱法和高效液相色谱法对 白芍中芍药苷进行了质量控制，方法易于操作，结果准确，重现 性良好。 1 薄层色谱法 1.1 仪器设备与试剂试药 烘箱；硅胶G薄层板；芍药苷对照

2、品（由中国食品药品检定 研究院提供）批号： 110736-200526 ；抑亢丸样品由生产企业提 供；水为纯化水，其他试剂均为分析纯。 1.2 实验方法与实验结果 取本品水蜜丸15 g，研细；或取小蜜丸15 g或大蜜丸2丸， 剪碎，加水10 mL使溶散，加水饱和正丁醇50 mL，加热回流1 h， 滤过，滤液用正丁醇饱和的水 40 mL洗涤，正丁醇层蒸干，残渣 加少量甲醇溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，装入 一预先填好的中性氧化铝小柱（100200目，3 g,内径11.5 cm）上，用乙酸乙酯-甲醇（1 : 1）混合溶液40 mL洗涤，收集 洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 1 mL使溶解，作

3、为供试品溶液。另 取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg溶液，作为对照品 溶液。再取除白芍外的全部样品成分，同法制成阴性对照溶液。 照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VI B ）试验，吸取 上述两种溶液各10 ?1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以三氯 甲烷-乙酸乙酯 -甲醇-甲酸（ 4 0：5： 1 0：0.2 ）为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的蓝紫色 斑点。阴性对照无干扰。 2 高效液相色谱法 2.1 仪器设备与试剂试药 日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；芍药苷对

4、照品（由 中国食品药品检定研究院提供）批号： 110736-200526；抑亢丸 样品由生产企业提供；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均 为分析纯。 2.2 实验方法与实验结果 2.2.1 色谱条件 色谱柱：kromasil C18（4.6 X 250 mm 5 ?m ）;流动相： 乙腈-水（13: 87）;流速：0.7 mL/min;柱温：40 C;检测波 长：230 nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于6000。 2.2.2 溶液制备 2.2.2.1 对照品溶液。 精密称取芍药苷对照品适量， 加甲醇 制成每 1 mL 含 60 ?g 的溶液，即得。 2.2.2.2 供试品溶液。 取本品小

5、蜜丸或重量差异项下的大蜜 丸，剪碎，取约 3 g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀 乙醇50 mL密塞，称定重量，超声处理 30 min，使溶散，取出， 放至室温，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得。 2.2.3 专属性试验 按照处方制备不含白芍的抑亢丸阴性对照样品，按 “2.2.2.2 ”项下方法制备阴性对照溶液。取对照品溶液、供试 品溶液和阴性对照溶液，依法进行测定。结果，阴性样品色谱在 与芍药苷峰相应的保留时间附近无干扰峰检出， 表明抑亢丸中其 他药味及辅料等对本方法测定无干扰。 2.2.4 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇制成每1mL含

6、 68.70 ?g 的溶液，分别精密吸取 1、2、4、6、8、10 ?l 进样测 定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲 线，计算回归方程，回归方程为 y=1522250.28x+127.26 (r=0.9999 )，表明芍药苷在 0.0687-0.6870 ?g 范围内与峰面 积值成良好线性关系。 2.2.5 精密度试验 取同一批样品，依“ 2.2.2.2 ”项下方法制成供试品溶液。 精密吸取供试品溶液 10 ?l ，注入液相色谱仪，重复 6次，测定 其色谱峰面积值，结果样品含量的 RSD为0.04%,结果表明本实 验所用色谱仪精密性较良好。 2.2.6 稳定性试验 取同一

7、批样品， 依法“2.2.2.2 ”项下方法制成供试品溶液。 按“2.2.1 ”项下色谱条件，分别在 0， 2， 4， 8， 12、24 h 进样， 测定峰面积，其芍药苷的 RSD为0.20%，结果表明24 h内供试 品溶液中芍药苷的含量基本稳定。 2.2.7 重复性试验 取取同一批样品，按“ 2.2.2.2 ”项下方法平行制备 6 份， 按“2.2.1 ”项下色谱条件进行测定，计算其含量，结果芍药苷 的平均含量为0.4762 mg/g，RSD为1.54%，结果表明本法具良 好的重复性。 2.2.8 回收率试验 精密称取含量已知的供试品(批号： 061202)约 1.5 g ，共 6份，分别精密

8、加入对照品溶液(0.01619 mg/mL)50 mL，按 “2.2.2.2 ”项下方法制备供试品溶液，依该法测定，计算其回 收率，结果见表 1 。 如表 1 所示，测得芍药苷的平均回收率为 99.97%， RSD=1.09%结果表明本法回收率较好，准确度较高。 3 讨论 3.1 测定波长的选择 取芍药苷对照品的稀乙醇溶液， 经 UV-2550 紫外分光光度计 在200300 nm范围内进行扫描，结果芍药苷在231 nm波长处 有最大吸收， 并参照中国药典 2010 年版一部白芍项下， 选择 230 nm作为测定波长。 3.2 柱的选择及柱效的考察 实验中考察了 Gracesmart HP C

9、18 (4.6 x 250 mm 5 ?m) 色谱柱、VP-ODS C18(4.6 x 150 mm 5 ?m)色谱柱及 kromasil C18 (4.6 mmx 250 mm 5 ?m)色谱柱，结果 kromasil C18 的柱 子分离度较好，理论塔板数大于 10000，所以使用 kromasil C18 柱进行本次实验，暂定柱效应不低于 6000。 3.3 中国药典2010年版一部白芍的含量最低限度为1.6% 大蜜丸制造处方中白芍的投料量为18.8 g，制成量为55丸， 按100%提取率计，每丸含量应不得少于5.47 mg本品制法中白 芍为粉末入药， 考虑到生产工艺的波动， 暂时按 80%提取率计算， 本品大蜜丸每丸含白芍以芍药苷计不得少于4.40 mg ;小蜜丸制 造处方中白芍的投料量为 18.8 g ，制成量为 2500丸，每丸重约 0.15 g，即制成量约为375 g,按100%提取率计，每克含量应不 得少于 0.80 m g ，本品制法中白芍为粉末入药，考虑到生产工艺 的波动，暂时按 80%提取率计算，本品小蜜丸每克含白芍以芍药 苷计不得少于 0.64 mg ;浓缩水