血清总胆红素TBIL测定作业指导书

1、血清总胆红素TBIL测定作业指导书1. 实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大 多数方法是在1883年Ehrlich 提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用 来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和 重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而 间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行 反应。胆红素+DCA奥林巴斯总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一 种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆 红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度 最大。在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的 浓度成正比。红色偶氮化合表面

2、活性剂2. 标 本 ：2.1 病 人 准 备 ： 无 特 殊 要 求 。 最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少乳糜血的干扰。2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。3. 标本存放：1525C保存可稳定2天；28C保存可稳 定7天；-20 C保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复 冻融！。4. 标 本 运 输 ： 常 温 条 件 下 避 光 保 存 运 输 。5. 标 本 拒 收 标 准 ： 标 本 溶 血 、 细 菌 污 染 、 脂 血 、 非 避光保存运输的标本。6. 实 验 材 料6.1 试剂： 奥林巴斯总胆红素试剂盒（ 试剂试剂 空白对照）6.1.1 试剂准备： 试剂为

3、即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于28C,若无污染，可稳定至失 效 期 。试 剂 有 效 期 为 18 个 月 。试 剂 必 需 避 光 保 存 。试 剂不可冰冻。6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表 明有细菌污染， 不能继续使用。6.1.4 注 意 事 项 ： 此 试 剂 为 体 外 诊 断 用 ， 不 要 入 口 ， 毒性还末确定；警告！腐蚀剂！不要入口；避免和眼 睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水 冲 洗 受 损 害 的 部 位 15 分 钟 ，接 触 到 眼 睛 或 吞 服 ，立 即 寻找医疗保护。6.2 校 准 品 ： 使 用 奥 林 巴 斯 校 准

4、品 对 自 动 分 析 仪 进 行 校 准 ， 参 见 生 化 检 验 校 准 品 和 质 控 品 .SOP 文 件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品 .SOP 文件7. 仪 器 ： 奥 林 巴 斯 AU2700 生 化 分 析 仪8. 操 作 步 骤8.1 项目基本参 数： 参见生化检验奥林巴斯 AU2700 生 化 分 析 仪 项 目 测 定 参 数 .SOP 文 件 。8.2 仪 器 操 作 步 骤 ：参 见 生 化 检 验 奥 林 巴 斯 AU2700 生 化分析仪操作规程.SOP文件。9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水 平I与II质控

5、做为未知标本进行分析，以2S为质控 警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U 复合校准品校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测 结果无需手工计算，以卩mol/L 报告。手工测定计算 方法为： Au总胆红素（卩mol/L）= Asx校准液浓度12.参考值范围：婴儿：出生24小时内v 150 卩 mol/L出生第2天22-193 卩mol/L出生第3天12-217卩mol/L出生第46天1.7-216 卩mol/L儿童： 一个月3.4-17卩mol/L成年人：1.7-21卩mol/L

6、参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所 差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己 的参考值。13. 临床意义： 胆红素是血红蛋白的降解产物。游 离 胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白 蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红 素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸 酯由胆管排入肠道。溶 血（ 肝 前 黄 疸 ）、实 质 的 肝 损 伤（ 肝 性 黄 疸 ）和 胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形 成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血 症，称为Gilbert 综合症。由于胆红素降解酶的功能 滞后以及出生后红细胞破碎增多，使6070%的婴儿 血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检 测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检 测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直 接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14.操作性能14.1 线性范围：1.2513卩mol/L14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准 方法5, AU270