分子生物学实验设计解读

1、基于基于LSU基因和基因和SSU基因的基因的 广义美味牛肝菌系统发育研究广义美味牛肝菌系统发育研究 姓名：李静娴 专业：生物工程 导师：马绍宾 学号：12015002274 ? 一、研究背景 ? 二、研究目的及意义二、研究目的及意义 ? 三、实验设计 ? 四、数据分析 核糖体 DNA ( ribos omal DNA, r DNA)是国际上公认的生物 各类群各分类水平比较研究的一个很好的分子指标 ,它是一类中 等重复的 DNA序列 ,每个重复单位都由非转录间隔区、 转录间 隔区和 3种 RNA ( 18SRNA, 5 . 8S RNA)基因编码组成.核糖体 DNA在细胞中以一种协同方式进化 ,

2、在个体和群体内有着较好 的均质性 ,因此个体的 rDNA通常具有种代表性 ,即少量个体的 抽样亦能有效地代表其来源群体的 DNA变异情况。 目前,核糖体 DNA的转录间隔区 ITS区、 大亚基片断 LSU r DNA (即 28S RNA )以及小亚基片断SS U r DNA (即 18S RNA) 等基因在原核生物研究中得到了广泛、 有效地应用，但在大型 真菌鉴定中的应用较少。 其中 LSU r DNA虽然较 ITS区保守 ,但它较 SSU r DNA变异 高 ,是一段由保守区与高变区相互镶嵌的 DNA片段,适合从种到 属的分类鉴定。 一、研究概况一、研究概况 云南省具有复杂的地形地貌和特殊

3、的气候条件以及多种多样的 森林类型和土壤种类。在这样得天独厚的自然生态条件下，孕育了 丰富多彩的食用菌资源。云南的野生食用菌加上人工栽培种类食用 菌有800种左右，食用菌种类约占世界的约40%，占全国的85.3%左 右；绝大多数属于口蘑科、牛肝菌科、红菇科、蘑菇科、裂褶菌科、 多孔菌科、珊瑚菌科和丝膜菌科等类群。 其中牛肝菌类是云南市场上最为重要的食用菌。牛肝菌类有近 40钟常见食用菌，主要分布有9属：牛肝菌属、疣柄牛肝菌属、绒 盖牛肝菌属、圆孔牛肝菌属、小牛肝菌属、粉孢牛肝菌属、褶孔牛 肝菌属、乳牛肝菌属和粉末牛肝菌属。滇中市场上以牛肝菌属为主， 占总贸易量至少70%。牛肝菌类以美味牛肝菌、

4、黑牛肝菌、褐疣柄 牛肝菌最为常见,同时美味牛肝菌也是国际著名的食用菌,在欧洲国家 深受欢迎,是出口创汇的重要种类之一。 一、研究概况一、研究概况 在云南，可食用的牛肝菌主要根据子实体的颜色被通俗地分为“白牛肝”， “黄牛肝”和“黑牛肝”，其中“白牛肝”即实际分类学上的“美味牛肝菌” 在贸易中占有重要的地位。从分类学上看，广义的美味牛肝菌复合群包括以下 5个种:美味牛肝菌(Boletus edulis Ball.ex Fr)、褐红牛肝菌(B.pinophilus Pilt 5.电泳结束后取出凝胶，在紫外灯下检测。 具体实验步骤： 3.7.5琼脂糖凝胶DNA的回收 回收的步骤如下： 在长波紫外灯下

5、，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切掉不含 DNA的凝胶。 先秤取空的1.5ml的离心管的重量，然后将切下含有DNA条带的凝胶放入 1.5ml离心管中秤重，两次秤得的重量相减便是凝胶的重量。 向1.5ml的离心管中加入600l的凝胶/结合液DB。 56水浴放置10min直到凝胶完全溶解，并且每2-3min斡旋振荡一次帮助凝 胶加速溶解。 加入150l的异丙醇，并振荡混匀。 将步骤获得的溶液加入到吸附柱AC中，并将吸附柱放入到收集管中，在 12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液 加入700l漂洗液WB，12000rpm离心1min，弃掉废液。 加入500l漂洗液WB，12000rpm离心1min，弃掉废液，重复一次。 12000rpm下离心2min。 将吸附柱AC放回空收集管中，12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液，以免 漂洗液中残留乙醇而抑制下游反应。 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加35l洗脱 缓冲液EB，室温放置2min，12000rpm离心1m