人参不同部位超氧化物歧化酶活力比较

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减人参不同部位超氧化物歧化酶活力比较(作者：单位：邮编：)作者：李红艳，赵雨，杨士慧，张鑫，牛放，赵大庆【摘要】 目的比较人参不同部位-芦头、主根及须根SOD活力，为 探讨SOD在人参药材中的分布及人参各部位的临床应用提供依据。 方法样品采用中性缓冲液4 C浸提24 h，采用改良的邻苯三酚自氧 化法测定SOD活力，采用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。结果人参芦 头SOD活力为6.518 U/mg，主根SOD活力为5.232 U/mg，须根 SOD活力为2.51 U/mg。结论人参SOD活力以芦头最高、主根次之， 须根最低。【关键词】人参；芦头；主根；须根；超氧化物歧

2、化酶Abstract : ObjectiveTo compare the superoxide dismutase (SOD) activity of rhizome, taproot and fibrous root of Panax ginseng and to provide the basis of the SOD distributi on, the quality evaluation in the different parts of Ginseng and clinical application. MethodsThe samples were extracted by n

3、eutral pH buffer at 4Cfor 24 hs. Coomassie brilliant blue method was used to determine the protein concentration, and improved pyrogallol auto-oxidation method was adopted to determine the SOD activity. ResultsThe SOD activitity of rhizome, taproo and fibrous root was 6.518 U/mg, 5.232 U/mg and 2.51

4、 U/mg, respectively. ConclusionThe SOD activity of different ginseng parts is different. The SOD activity in rhizome is the highest, taproot is followed, and fibrous root is the lowest.Key words : Ginseng; Rhizome; Taproot; Fibrous root; SODSOD(Superoxide Dismutase, EC..，超氧化物歧化酶) 是一种能清除生物体内产

5、生的超氧阴离子自由基(O2-)的金属蛋白酶类，其广泛存在于一切生物体内，能清除超氧阴离子使其生成过氧化 氢，然后过氧化氢又被其他酶分解为水和氧气，从而减轻或消除超氧阴离子自由基对机体的损害1。该酶具有潜在药用价值，具有抗衰老、 抗炎、抗辐射、祛斑、抗皱等多种药理作用1，2，并且该酶还具有 较高的催化活性和化学稳定性，因此可以被作为药剂学及临床研究的 参考因素3。人参为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Meyer.的干燥根。 研究表明，人参具有抗衰老、抗氧化、增强机体免疫力等多种药理活 性4，5。迄今已知人参根中含有人参皂苷、多糖、蛋白质等多种有 效成分，但目前的研究大多针

6、对人参皂苷，对于人参蛋白尤其是SOD 的研究相对较少69。本实验通过比较不同产地人参芦头、主根和 须根SOD活力，为科学评价人参不同部位质量提供科学依据。1材料与仪器人参分别购自吉林省靖宇县、长白县、抚松县、临江市和安国 县等5个地区，经长春中医药大学研发中心姜大成教授鉴定， 均为五 加科植物人参 Panax ginseng C. A. Meyer.，生长年限均为5年。高速离心机Minispin，德国Eppendof公司;CP225D型电子天 平(十万分之一),北京赛多利斯仪器系统有限公司；LL3000型冷冻干 燥机，德国Heto公司;UV mini-1240型紫外可见分光光度计，日本 Shi

7、madzu 公司;Multiskan MK3型酶标仪，美国Thermo 公司。Bradford蛋白质定量试剂盒，北京 Tiangen公司;Tris(三羟甲基氨基 乙烷)，美国Sigma公司;其他试剂均为国产分析纯。2方法与结果2.1样品的制备取5年生不同产地人参各若干根，切取芦头、 主根及须根，分别磨粉。精密称取各参粉末2 g，加入10 mmol/LTris-HCI(pH 7.4)缓冲液 10 ml，4C浸提 24 h，10 000 r/min 离心 10 min，上清液用0.45呵 滤膜过滤，收集滤液，得5批不同来源 的样品共15个。各样品留取0.5 ml待测定SOD活力，其余液体冷 冻干燥

8、，待测蛋白浓度。2.2蛋白含量测定2.2.1绘制标准曲线采用Bradford蛋白试剂盒法，将0，10， 20，30，40，50，60山牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(1 mg/ml)分别 加入到EP管中，加入PBS缓冲液补足到150山混匀。从各管中依 次取出15山加入285山考马斯亮蓝染色液，混匀，室温放置 5 10 min。转置96孔板中，于酶标仪595 nm处测定光密度值。以不 含BSA的缓冲液的光密度值作为空白对照，以蛋白浓度为横坐标， 光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程Y=0.121 2X + 0.008 2， 相关系数R2=0.998 8。2.2.2测定蛋白含量将冻干后的样品分

9、别用 PBS缓冲液配制成 一定浓度，各取15山加入285山考马斯亮蓝染色液，于酶标仪 595 nm处测定光密度值，每个样品设 3个复孔，根据标准曲线，计 算蛋白含量。结果见表1。2.3 SOD活力测定上述样品分别采用改良的邻苯三酚 自氧化法10进行酶活力测定。以1 ml反应液中每分钟抑制邻苯三酚 自氧化速率达50%时所需的酶量定义为一个活力单位。在碱性条件 下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据 SOD抑制邻苯三酚自氧化能力 测定SOD活力，以比活力U/mg蛋白表示，每个样品测3次取平均 值。结果见表1。根据表1数据，分别统计不同来源的5批样品芦头、 主根及须根SOD活力。结果见图1。表1人参不同部

10、位SOD活力2.4离散度考察利用Excel统计学软件，分别统计5批样品芦 头、主根及须根SOD活力的标准差与平均数，计算三者的离散系数 (C.V)。结果见表2。表2样品离散度考察3讨论本实验采用中性缓冲液抽提法从人参中提取人参蛋白，方法简 便易行。结果显示，5批样品人参蛋白收率均比较高，平均蛋白收率 为1.194%。SOD活力测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和 等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，在化学方法中，又以改良的 邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。本实验采用该法测得人参芦 头、主根和须根SOD活力相差悬殊，这说明人参不同部位存在一定 的质量差别。离散系数的大小反应资料中各观测值的变

11、异程度。本实验采用 样本标准差与平均值的比值即标准差系数 (C.V)考察人参各部位SOD 活力的离散度。表2结果显示，芦头的离散系数较大，主根和须根的 离散系数较小。这说明，人参 SOD活力因产地不同而差别很大，尤 其以芦头SOD活力受产地影响最大。据历代一些本草医籍记载，芦头具有涌吐作用，因此人参入药 前要将芦头除掉。虽然已有一些报道认为芦头无涌吐作用，但仍有一 些药厂及医院袭用旧法，将芦头去掉。本实验结果表明，芦头具有较 高的SOD活力，这从侧面反映了芦头的药用价值。已有研究表明人参不同部位皂苷及无机元素含量有着明显区别 11，12。本实验通过比较人参芦头、主根和须根SOD活力，结果亦显示

12、了不同部位的含量差别。这提示我们人参不同部位可能具有不 同的药用价值，同时说明SOD可作为人参质量评价的内在指标之一。【参考文献】1 马振华，杨红强，杨 琼.超氧化物歧化酶(SOD)的功能 及应用J.新学术，2008，4:316.2 时沁峰，曹威荣.超氧化物歧化酶(SOD)的研究概况J.畜禽业，2009 , 4:66.3 Anne D., Achim Z., Ralph P., et al. Hein ema nn, andIvana Iva no vic -Burmazovic Water Excha nge on Seve n-Coord in ateMn (II)Complexes wi

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14、and ribonuclease activitiesJ. Life Sciences 2001 ，68: 739.6 Kim S., Kweon S. M., Kim E. A., etc. Characterizationof Rnase-like major storage protein from the ginseng root by proteomic approach. Journal of Plant Physiology ，2004,161: 837.7 Yoon J. Y., Ha B. H., Woo J. S., et al. Purification andcharacterization of a 28-kDa major rotein from ginseng rootJ.Comparative Biochemistry and Physiology B, 2002, 132:551.8 Wang H. X., Ng T. B. A ribo nuclease from Chi nese ginseng flowersJ. Protein Expression and Puri