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文档简介

1、pcr,基因的体外扩增,一、实验原理,pcr（polymerase chain reaction，聚合酶链式反应）。 聚合酶链式反应(pcr)是体外酶促合成特异dna片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的dna得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等优点,标准反应中一般采用三温度点法，双链dna在9095变性，再迅速冷却至4060，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至7075，在taqdna聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸,目的条带,变性 denature,退火 anneal,延伸elongate,second cyc

2、le,变性 denature,退火 anneal,延伸elongate,end of the third cycle,pcr反应体系,此实验中我们采用20l体系） 在200l eppendorf管（pcr管）中依次加入： ddh2o 13.5l 10pcr buffer（含mg2+） 2l dntp （2.5mm） 1l 模板 2l primer 1 0.5l primer 2 0.5l taq酶 0.5l total 20 l,pcr反应程序,94 4min 94 1min 57.0 40s 34个循环 72 50s 72 10min,反应结束后，取反应液10l进行琼脂糖凝胶电泳，确认pcr反应产物,引物a3 p1/p2,pcr反应程序,94 4min 94 1min 57.0 50s 34个循环 72 2min40s 72 10min,反应结束后，取反应液10l进行琼脂糖凝胶电泳

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