第十一章-维生素的测定ppt课件

1、食品分析,2,第十一章 维生素的测定,一、维生素的分类 二、各种维生素 的测定方法,3,维生素,维生素是是人体生长、发育、生殖及维持生理机能所必须的营养素。它主要是调节物质代谢，许多种维生素是构成辅酶的主要成分，在调节物质代谢方面具有十分重要的作用,脂溶性维生素 主要有维生素A、维生素D、维生素E及维生素K,水溶性维生素 主要有B 族维生素及维生素C。 维生素物质 机体内存在的一些具有类似维生素生物活性的物质，它们列为复合维生素B 族这一类中，通常称它们为“类维生素物质”。包括：胆碱、生物类黄酮（维生素P）、辅酶Q（泛醌）、肌醇等,4,维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然有机化合物。其

2、种类很多，目前已确认的有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余种。必须经常从食物中摄取维生素；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。近几年已经查明仅有少数几种维生素可以在体内合成，大多数维生素都必须由食物供给,一）概述,一、维生素的分类,5,因此，维生素作为强化剂已在食品工业的某些产品中开始使用，测定食品中的维生素含量，不仅可评价食品的营养价值，同时还起到监督维生素强化食品的剂量，以防摄入过多的维生素而引起中毒，所以，测定食品中维生素在营养分析方面具有重要的意义,一）概述,一、维生素的分类,6,维生素化学结构各异，生理功能也各不相同，化学结构上没有共性。 胺类（VB

3、1） 醛类（VB6） 醇类（VA）等,一）概述,一、维生素的分类,7,在这二类中与我们最密切，而且了解最多的有： 维生素A：是人体必需营养素，能促进人体发育，防止眼膜炎、夜盲症等疾病。 维生素B1：也叫硫胺素，对人体的功能主要是防脚气病、神经炎，帮助消化，促进发育。 维生素B2：对人体功能防口角炎、皮肤炎，防止怕光现象。 维生素C：防坏血病，促进外伤愈合，使机体增强抵抗力。 维生素D：调节体内矿物盐的平衡，特别是对人体内钙、磷的代谢，并能防止软骨病,一）概述,一、维生素的分类,8,VA：胡萝卜、西红柿、红薯等； B1（硫胺素）：胚芽、米糠、麸皮等； B2（核黄素）：动物肝脏、鸡蛋、牛奶； B1

4、2：只有肉类食品还有这种维生素； VC（抗坏血酸）: 各种新鲜蔬菜，新鲜水果等； VE: 麦胚油、玉米油、芝麻油、豆类等,二）富含维生素的食品,一、维生素的分类,9,VA、VD、VE、与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。 脂溶性维生素具有以下理化性质： 溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。 耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定， 对碱稳定，维生素E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,10,3耐热性、耐氧化性： 耐热性 氧化性 VA 好，能经受煮沸 易被氧化（光、

5、热促进其氧化） VD 好，能经受煮沸 不易被氧化 VE 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被 （光、热、碱促进其氧化,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,11,根据上述性质，测定脂溶性维生素时，通常： 皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 对于A、D、E共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂化提取后，还需进行层析分离,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,12,结构特点与分析方法之间的关系,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法

6、,1.维生素A的测定,维生素A,环己烯,共轭多 烯侧链,多异构体 UV 易被氧化,结构分析,共轭多烯结构：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进行鉴别，采用紫外分光光度法进行含量测定。天然维生素A是全反式维生素A,结构特点与分析方法之间的关系 维生素A含量测定方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。紫外分光光度法是法定方法。 三氯化锑比色法多用于食品或饲料中的维生素A的测定,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,维生素A,1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 原理,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A

7、的测定,氯仿溶液中,1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 适用范围及特点 本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于510g/g）。 该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 试剂 无水硫酸钠、乙酸酐 无水乙醚（不含过氧化物） 无水乙醇（不含醛类物质） 三氯甲烷（不含分解物和水） 250g/L三氯化锑三氯甲烷溶液 1:1氢氧化钠溶液、0.5mol/L氢氧化钾,二）脂溶性V的测定,二、

8、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003） 测定步骤： 样品预处理 含有维生素A的样品大多需首先除去脂肪，把维生素A从脂肪中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,样品预处理,样品测定,A、皂化法（皂化反应是碱催化下的酯水解反应，尤指油脂的水解 ）: 脂肪与VA分离原理：脂肪和植物油的主要成分是甘油三酯，它们在碱性条件下水解的方程式为,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,适用于维生素A含量不高的样品，但全部试验过程费时，且易导致维生

9、素A的损失,皂化 称取0.55g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及2040ml乙醇，在电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇,若无浑浊现象，表示皂化完全。 提取 将皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分两次冲洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分两次冲洗皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振摇2min，提取不皂化部分,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分两次冲洗，洗液倾入第二分液漏斗，振摇后静止分层，将水层放入三角瓶，醚层并入第一分液漏斗。如此重复操作

10、，直至醚层不再使三氯化锑一三氯甲烷溶液呈蓝色为止。 洗涤 在第一分液漏斗中加30ml水，轻轻振摇，静止片刻后，放出水层。再加入1520ml 0.5mol/L的氢氧化钾溶液，轻轻振摇后，弃去下层碱液（除去醚溶性酸皂），继续用水洗涤，至水洗液不再使酚酞变红为止。醚液静置10 20min后，小心放掉析出的水,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,浓缩 将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25ml乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右），使溶液中维生素A含量

11、在适宜浓度范围内(35g,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,B、研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于510g样品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确。 研磨 精确称取25g样品，放入盛有35 倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。 提取 小心地将全部均质化的样品移入带盖的三角瓶内，准确加入50100ml乙醚。紧压盖子，用力振摇2min；静置澄清（大约需12 h），或离心澄清（保持低温,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,浓缩 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在7080水浴上抽气

12、蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残渣,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,标准曲线的绘制,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,6个3cm比色管编号 1 2 3 4 5 6 加各种浓度VA标液1ml 10 20 30 40 50 60 ug/ml 乙酸酐d 1 1 1 1 1 1,于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸光度至零点；然后将标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入9ml三氯化锑一三氯甲烷溶液，于6s内测定吸光度（每支比色管都在临测前加入显色剂）。以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线,计

13、算,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,式中 -维生素A含量； c-由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，g/ml； c0-由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，g/ml； m-样品质量，g； V-样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，ml； 100-以每100g样品计,说明及讨论,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 所用氯仿中不应含有水分,因三氯化锑

14、遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外，由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡后再清洗,说明及讨论,二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S后便开始比色，产生蓝色后立即读取吸光度。 如果样品中含-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混合液为洗脱剂进行柱层析,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。但是由于它

15、们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常地由饮食来提供。 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理,维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取 纯化 维生素C通常采用草酸

16、、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸价廉，使用方便，对维生素C有很好保护作用,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用,1.维生素C的测定,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,维生素C具有

17、烯二醇结构，具有较强的还原性，可发生氧化还原反应；对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。 与糖类似的结构：具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别,1.维生素C的测定,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,总维生素C包括：还原型、脱氢型及二酮古乐糖酸。 维生素C常用的测定方法有,1.维生素C的测定,测定方法,二氯靛酚法（还原型VC,荧光法,2，4-二硝基苯肼法 （总VC,碘酸法,碘量法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,一）二氯靛酚法（测定还原型抗坏血酸， GB/T 619586 ） 原理,1.

18、维生素C的测定,还原型 抗坏血酸,还原型2，6-二氯靛酚（无色,H,2，6-二氯靛酚（粉红色,脱氢型 抗坏血酸,还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯血酸含量成正比,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,1）2%草酸溶液 （2）0.000167mol/L KIO3标液 （3）1%淀粉溶液； （4）6%KI溶液,C6H8O6I2= C6H6O62HI 3(-

19、)+5 I(-)+6 H(+)=3 I2+3 H2O,5）抗坏血酸标准溶液(1mg/ml)需标定 标定：吸标液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3滴用0.00167mol/L KIO3标液滴定到淡兰色,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,6）0.02%2，6二氯靛酚溶液 标定：吸5ml已知浓度V C标液 加5ml 1%草酸 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点。 计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测

20、定步骤,1.维生素C的测定,样品,还原型Vc的提取,还原型Vc的测定,1）提取 鲜样的提取：称100g鲜样加等量1%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取10-40g匀浆（含1-2 mg抗坏血酸）倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀释定容，混匀。 干样的制备：称1-4g （含1-2 mg抗坏血酸）放入研钵内，加入1%草酸溶液磨成匀浆，用草酸溶液定容到100ml。 上述溶液若颜色深，可加入白陶土，将上述溶液过滤，滤液备用,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,2）滴定 吸取5-10ml滤液，置于50ml三角瓶，快速加入2,6二氯靛酚溶液滴定

21、，直到红色不能立即消失，而后再尽快，逐滴加入，以呈现的粉红色在15秒内不消失为终点,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,计算,1.维生素C的测定,V -消耗染料体积（ml） V0-滴定空白时所消耗的燃料的体积（ml） T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数 含有样品的克数 M-滴定时所取滤液中含样品重量，g,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,说明及注意事项,1.维生素C的测定,1）样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素C氧化损失，测定过程要迅速。 （2）若样品滤液颜色较深，可加入白陶土再过滤。不能使用活性碳进行脱色处

22、理，因为活性碳会氧化维生素C，同时还会吸附维生素C。 （3）贮存过久的罐头食品，可能含大量的Fe2+，要用8%的醋酸代替2%草酸。 （4）本法适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐和硫代硫酸盐）。 （5）若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高,二氯靛酚法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,二） 2，4-二硝基苯肼法（GB/T 5009.86-2003） 原理,1.维生素C的测定,还原型抗坏血酸,脱氢型抗坏血酸,氧化,二酮古乐糖酸,氧化,二酮古乐糖酸,2，4-二硝基苯

23、肼,脎,浓硫酸,双-2，4-二硝基苯,500nm比色,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,4.5mol/L硫酸 （9:1）硫酸:H2O 2% 2，4-二硝基苯肼 2%草酸 抗坏血酸标准溶液1mg/ml,2%硫尿 1%硫尿 1mol/ml盐酸 1%草酸 活性炭,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,标准曲线绘制,1.维生素C的测定,加2g活性碳 于50ml 1mg/ml抗坏血酸标准溶液中，振摇1min，过滤。取10ml滤液置于500ml容量瓶中，加5.0g硫尿，用1%草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度为20ug/ml,2

24、，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,样品的制备,显色,硫酸处理,比色,氧化,称一定样（100g)鲜样 加等量2%草酸 于高速捣碎机捣碎 取匀浆140g 用1%草酸定容100ml 过滤滤液待用,取滤液25ml 加2g活性炭 摇1分钟 静置过滤 弃去初滤液，取滤液10ml 加入2%硫脲溶液 混匀 得样品氧化液,取上述氧化液各4ml于三支试管中向其中两支管加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白 将三支管加盖 于37保温箱3小时 取出后样品管放入冰水中 样品空白管取出后冷至室温 在样品空白管加入2，4-二硝基苯肼 1ml 置

25、于室温下放置10-15min 样品管和空白管都于冰浴中,向上述已放入冰水中的三支试管各加入（9:1）H2SO4 5ml于各管中（边加边摇） 将试管从冰浴中取出 室温下放置30分钟后,立即比色，在520nm测吸光度，从标准曲线上查出相应的含量,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,取7个100ml容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7 加VC标液20ug/ml 5 10 20 25 40 50 60ml 加硫脲溶液（ml） 95 90 80 75 60 50 40ml 2，4-二硝基苯肼（ml） 1 1 1 1 1 1 1ml 按

26、样品测定步骤进行显色反应，形成脎并比色。以抗坏血酸为纵坐标，吸光度为横坐标绘制标准曲线,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,结果计算,1.维生素C的测定,式中：X-样品中总抗坏血酸含量，mg/100g c- 从标准曲线查得“样品氧化液”中总Vc的浓度，ug/ml V-试样用1%草酸定容的体积，ml m-样品质量，g F-样品氧化处理过程中的稀释倍数,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,注意事项,1.维生素C的测定,活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血酸

27、的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定，颜色会逐渐加深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准时比色。 检出限：112ug/mL，所测结果为总量,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,注意事项,1.维生素C的测定,活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血酸的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定，颜色会逐渐加深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准时比色。 检出

28、限：112ug/mL，所测结果为总量,2，4-二硝基苯肼法,三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,VB2在440500nm波长下光照产生绿色荧光，稀溶液中其荧光强度与浓度呈正比。 一般在525nm下测定荧光强度。再在试液中加入低亚硫酸钠（Na2S2O4）还原VB2，使其荧光消失，再次测量试液中残余荧光，两者相减极为VB2荧光强度，进一步查标准曲线测算,3.维生素B2的荧光测定法,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,高效液相色谱法测定维生素是近几年发展起来的方法，此法能快速分离和测定维生素和它的同分异构体、酯及其衍生物,高效液相色谱法（HPLC）是20世纪6

29、0年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,原理,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相

30、,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,原理,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分

31、在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,原理,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,高效液相色谱仪的结构示如下图，一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作过程如下：注入欲分离的

32、样品时，流动相将样品带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,原理,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液

33、相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重现性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,高压输液系统,优点：泵容积小，易于清洗及更换流动相，泵压较高，可达400MPa。 缺点：脉冲较大，需要有阻尼器或采用双泵系统来克服脉冲，达到恒定的流速。双泵系统根据连接方式的不同分为串联式和并联式双柱塞往复泵,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC,高压输液系统,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010,一）高