离心分离技术ppt课件

1、离心分离技术 概述： 据物质颗粒的沉降系数、质量、密度及浮力等因子的不同，而使物质分离的技术。 一、离心机的种类与用途 一般按转速可分为,低速离心机(low-speed centrifuge） ： 转速8000r/min以下（R.C.F 10000g以下） 用于分离细胞、细胞碎片及培养基残渣等 高速离心机（high-speed centrifuge） ： 转速1000025000r/min（R.C.F 10000 100000g） 用于分离各种沉淀物、细胞碎片和较大细胞器等 超速离心机（ultracentrifuge） ： 转速25000150000r/min（R.C.F 100000 100

2、0000 g,制备用超速离心机： 用于生物大分子、细胞器和病毒等的分离纯化 分析用超速离心机： 用于样品纯度的检测、沉降系数和相对分子质量的测定 有公式： S = (lnX2lnX1) / 2（t2t1） M = RTS / D(1,二、离心方法的选择 超速离心方法可分为： 差速离心、密度梯度离心、等密度梯度离心 l 差速（分级）离心: 采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法。 此法适用于沉降系数差别较大的组分之间的分离,差速离心过程,a）在离心管内含有三种沉降系数不同的颗粒，简称之为大、中、小颗粒；（b）当以一定离心力在一定的离心时间内进行离心后，沉淀主要以大颗粒组

3、成；（c）提高离心力把上清液离心一定时间后，得到主要由中颗粒组成的第二种沉淀；（d）如果要把小颗粒沉淀下来，可进一步提高离心力，经一定时间后把上清液中的小颗粒分离出来,密度梯度离心： 样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离。 特点：maxmin (为介质密度、为粒子密度) 常用的梯度介质有蔗糖和甘油，梯度的类型有线形、凹形和凸形梯度等,等密度离心： 样品在密度梯度介质中进行离心，不同浮力密度的颗粒会移动到于它们各自浮力密度恰好相等的位置（等密度点），形成区带。即：=处 =0 等密度差分离心 第一次=或稍大于，则可去除大于的杂质 选稍小于，则目的物可沉淀分离出来,等密度区

4、带离心 类似于密度梯度离心，介质的密度从上到下由小到大，但 特点：maxmax 所以样品离心后停留在=处,离心结果示意图,三、离心条件的确定 离心力和相对离心力 离心力： Fc = mac 相对离心力：指颗粒所受的离心力与重力之比 RCF=Fc/Fg=mac/mg= 42n2r/3600980.6 (g) 化简为： RCF = 1.1210-5 n2 r (g) 显然，相对离心力的大小与转速的平方成正比，也与旋转半径成正比,一般低速离心通常以转子每分钟的转速表示（r/min）; 而较高速度离心时，往往用相对离心力来表示(g,.离心时间 离心时间据离心方法的不同而有不同概念 差速离心： 某种颗粒完全沉降到离心管底的时间 等密度梯度离心： 颗粒完全到达等密度点的平衡时间 密度梯度离心：指形成界限分明的区带的时间,沉降时间 又称澄清时间，它决定于颗粒沉降速度和沉降距离 若沉降系数S已知，有公式： t = 括号中的部分可用转子的效率因子K表示， 它与转子的半径和转速有关,1 lnr2 inr1 S 2,若S未知，可按下式估算沉降时间： T = 4.5,2d2(-0,Lnr2/r1,离心腔和驱动