光谱分析仪器与技术

1、第二章,光谱分析仪器与技术,钱士匀,目,录,第一节,吸收光谱分析仪器与技术,第二节,发射光谱分析仪器与技术,第三节,散射光谱分析仪器与技术,重点提示,1.,光的基本性质和朗伯,-,比尔定律的意义是什么？,2.,光谱分析技术如何分类，各有哪些技术特征？,3.,紫外,-,可见分光光度计按其光学系统可分为哪几类，各有,何特点？,4.,原子吸收分光光度计的结构组成及影响测定灵敏度和精确,度的因素有哪些？,5.,简述原子发射光谱分析的特点及其局限性。,6.,荧光光谱仪的种类和基本结构有哪些？影响荧光强度的因,素有哪些？,7.,散射光谱技术分析方法有哪两类？简述其检测原理。,8.,根据雷莱光散射理论，散射

2、光强度主要与哪些因素有关？,光谱分析技术,?,光谱分析技术是利用物质具有发射光谱、吸收光谱或,散射光谱的特征，对物质进行定性、定量分析的一类,分析方法。,?,光谱分析依据光谱特征可分为吸收光谱分析技术、发,射光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。,?,光谱分析技术在生物化学检验中是最基本和最常用的，,它因具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点,而被广泛使用。,第一节,吸收光谱分析仪器与技术,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（一）光的基本性质,光是一种电磁波，具有波动性和粒子性。,光的波长可用纳米（,nm,）为单位来表示。,E = h,（二）光的选择吸收与物质颜色的关系,物质的分子

3、或离子团对可见和紫外光区的光波具有选择,吸收作用。,可见光谱分析要求被测溶液的颜色与所用的单色光互补，,以求达到溶液对光的最大吸收。,?,吸收光谱（,absorption spectrum,）,：,不同,的物质会吸收不同波长的光。改变入射光,的波长，并依次记录物质对不同波长光的,吸收程度，就得到该物质的,吸收光谱,。,第一节,紫外,-,可见分光光度计,的工作原理和基本结构,各种试液的紫外扫描图谱,A,一葛根素；,B,空白微乳；,c,一空白肠循环液；,D,一酚红,吸收光谱：又名吸收曲线。不同波长,光对样品作用不同，吸收强度不同,以,A,（波长做横坐标，吸光度做纵坐,标）作图,一、紫外,-,可见分

4、光光度分析仪器与技术,（三）紫外,-,可见分光光度技术,?,紫外光（,200,400nm,），可见光（,400,780nm,）,1.,朗伯,-,比尔定律,?,一束单色光通过物质溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓,度及液层厚度的乘积成正比。,A,=,KCb,?,A,为吸光度；,K,为比例系数；,C,为吸光物质的浓度；,b,为,溶液的液层厚度。,?,当,K,、,C,一定时，吸光度,A,与液层厚度,b,成正比，称为朗,伯定律（,Lambert,定律）；,?,当,K,、,b,一定时，吸光度,A,与溶液浓度,C,成正比，称为比,尔定律（,Beer,定律）。,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,1.,朗

5、伯,-,比尔定律,（,1,）吸光度：吸光度表示单色光通过溶液时被吸收的程度，,以,A,表示。,（,2,）透光度：透光度又称为透光率，表示透过光占入射光的,比例，以,T,表示。,?,吸光度与透光度之间的关系：,A,= log,=,log,T,（,3,）比例系数,K,：,K,值表示单位浓度、单位液层厚度溶液的吸,光度，是与吸光物质性质及入射光波长有关的常数。,K,值的表,示方法依赖于溶液浓度的表示方法。,?,吸收系数,a,、摩尔吸收系数,、百分吸收系数。,一、紫外,-,可见分光光度计的工作原理,kbc,I,I,T,?,?,?,10,0,?,朗伯,-,比尔定律：,I,0,：,入射光强度,b:,液层厚

6、度,T:,透光度,k:,吸光系数,kbc,T,I,I,I,I,T,A,?,?,?,?,?,?,?,1,lg,lg,lg,lg,0,0,C:,溶液浓度,I:,透射光强度,A:,吸光度,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,2.,定量分析的方法,（,1,）直接比较法：分别测出试样溶液及标准溶液的吸光度,A,x,及,A,s,，进行比较可求得样品的浓度。,C,x,=,A,x,C,s,A,s,（,2,）标准曲线法：,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,2.,定量分析的方法,（,3,）摩尔吸光系数（,=K,）检测法：,?,在给定条件（单色光波长、溶剂、温度等）下，吸光系数是,表示物质特性的常数。

7、根据朗伯,-,比尔定律，可以用,C = A/,b,公式直接计算物质的含量。,（,4,）,双波长分光光度法（补充）,：,?,当吸收光谱相互重叠的,两种组分共存时，利用,双波长分光光度法可对,单个组分进行测定或同,时对两个组分进行分析,。,1,、,朗伯,-,比尔定律,：,A,=,KCb,2,、吸光度与透光度：,A,= log,=,log,T,A,：吸光度；,I,。：入射光的强度；,I,1,：透射光的强度；,T,：透射比，或称透光度；,K,：系数，可以是吸收系数或摩尔吸收系数,b,：吸收介质的厚度，一般以,cm,为单位；,C,：吸光物质的浓度，单位可以是,g/L,或,mol/L,。,3,、,直接比较

8、法（有标准溶液时）：,C,x,=,A,x,C,s,A,s,4,、摩尔吸光系数（）检测法（,在给定条件（单色光波长、溶剂、温,度等）下,）：,C = A/,b,5,、,吸光系数,K:(A,k,bc),(1) k,与入射波长、溶液的性质以及温度有关。,吸收物质在特定波长和溶剂条件下的,特征常数,；,不随浓度,c,和光程长,度,b,的改变而改变,。在温度和波长等条件一定时，,k,仅与吸收物质本身,的性质有关；,入射光,I,0,透射光,I,t,（,2,）是物质吸光能力的量度，可作为,定性鉴定的参数,；,同一物质在不同波长下的,k,值是不同的。在,最大吸收波长,max处,的摩尔吸光系数，常以,k,max

9、,表示。,K,max,表明了该吸收物质最大限,度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度,。,k,max,越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵,敏度越高。,（,3,）,k,在数值上等于,单位,浓度为、,单位,液层厚度为时,特定,溶液在,某一,波长下的吸光度。浓度,单位不同：,吸收系数,a,、摩尔吸收系数,、百分吸收系数,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（四）紫外,-,可见分光光度计的基本结构,1.,光源,?,可见光区：钨灯、卤钨灯光源，波长范围在,320,2500nm,。,?,紫外区：氢、氘灯光源，波长,185,400nm,。,一、紫外,-,可见分光光

10、度分析仪器与技术,（四）紫外,-,可见分光光度计的基本结构,2.,单色器,?,将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光,束的光学装置，由棱镜或光栅、狭缝和准直镜等部分组,成。,?,常用单色器：棱镜、干涉滤光片、光栅分光。,3.,吸收池,?,分光光度计中用来盛放溶液的容器，又称比色皿或比色,杯。,?,多用石英比色杯，适用于紫外和可见光区；玻璃比色杯,只能用于可见光区。自动生化分析仪多用塑料比色杯。,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（五）紫外,-,可见分光光度计的类型,1.,单光束分光光度计,（,1,）单光束可见光分光光度计,1.,光源；,2.,聚光透镜；,3.,色散棱镜；,4.

11、,准直镜；,5.,保护玻璃,；,6.,狭缝；,7.,反射镜；,8.,光栅；,9.,聚光透镜；,10.,吸收池；,11.,光门；,12.,保护玻璃；,13.,光电倍增管,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（五）紫外,-,可见分光光度计的类型,1.,单光束分光光度计,单光束紫外,-,可见分光光度计,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（五）紫外,-,可见分光光度计的类型,2.,双光束分光光度计,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（五）紫外,-,可见分光光度计的类型,3.,双波长分光光度计,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（六）分光光度计分析条件的选择,1.,入射光波

12、长的选择,?,选择最强吸收带的最大吸收波长（,max,）的单色光为入,射光，以得到最大的测量灵敏度。,?,当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，,峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。,2,吸光度范围的选择,?,选择适宜的,吸光度范围,，以保证测量结果的误差最小。,?,吸光度范围为,0.1,2.0,时，测定结果的相对误差最小。,一、紫外,-,可见分光光度分析仪器与技术,（六）分光光度计分析条件的选择,3.,狭缝宽度的选择,?,狭缝宽度影响测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。,?,狭缝,宽度,增大，入射光的,单色性降低,，会使灵敏度下降，,校准曲线偏离朗伯,-,比尔定律。,?,狭缝宽度大约是

13、试样吸收峰半宽度的,1/10,。,4.,显色反应条件的选择,?,反应的生成物的摩尔吸光系数较大；,?,反应应有较高的选择性；,?,反应生成物有足够的稳定性；,?,反应生成物的组成恒定。,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（一）原子吸收分光光度法原理,E=E2,El=,h,式中：,E,为能级差；,E,2,、,E,1,分别为高、低能级的能量；,h,为普朗克常数；,为吸收光的频率。,?,电子从低能级跃迁到高能级时，需要吸收特定波长的光。,?,用特定波长的光去照射待测元素，待测元素就会吸收一部分,光能而被激发，使得入射光变弱、变暗，如同溶液对单色光,的吸收。,?,利用光电检测器检测出入射光线的强度变

14、化即待测元素的吸,光度，根据朗伯,-,比尔定律，得到待测元素的浓度。,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（二）原子吸收分光光度计的基本结构,1600,条谱线,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（二）原子吸收分光光度计的基本结构,1,光源,?,能够产生待测元素所需的特征线性光谱，谱线的,宽度要,窄,，发射,强度要高,，还要十分,稳定,。,?,常用的光源为空心阴极灯。,2,原子化器,?,提供合适的能量，将样品干燥、蒸发并转化为所需的,基,态,原子蒸气。,?,原子化器有火焰原子化器与石墨炉原子化器。,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（二）原子吸收分光光度计的基本结构,3,分光系统（单色器）,

15、?,单色器由入射和出射狭缝、反射镜和色散元件等组成，,?,作用是将所需的共振吸收线与邻近干扰线分离。,4,检测系统,?,由检测器、放大器、对数变换器和显示装置组成。,?,检测器的作用是进行光电信号转换变成电信号，然后再,经放大，滤波后，被测信号进行对数变换，变成线性信,号，最后由读出装置显示读数或由记录仪记录下来。,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（三）原子分光光度计分析条件的选择,1,吸收波长,?,选择元素的共振线作为分析线；,?,分析浓度较高的样品时，可选择灵敏度较低的谱线进,行分析；,?,有些元素的共振线靠近远紫外区，最好用背景吸收校,正法扣除背景吸收，若浓度较高，可改用次灵敏线作为

16、,分析线。,2,灯电流,?,在所选的电流下，光源能够提供足够强和稳定的入射谱,线，以提高信噪比和测定精确度；同时，还要有较高的,测定灵敏度。,二、原子吸收分光光度分析仪器与技术,（三）原子分光光度计分析条件的选择,3,狭缝的宽度,?,狭缝宽度的选择应以能分开分析线与邻近线为原则。,4,燃烧器的高度,?,必须使测量光束从自由原子浓度最大的火焰区域通过。,5,雾化器的调节,?,一般约,4ml/min,的进样量是比较合适的。,第二节,发射光谱分析仪器与技术,一、原子发射光谱分析仪器与技术,（一）原子发射光谱分析基本工作原理,?,当原子受到外界能量的作用时,，原子由于与高速运动的气态,粒子和电子相互碰

17、撞而获得了能量，,使原子中外层电子从基,态跃迁到激发态,，使样品蒸发并将各组分转变成气态原子或,离子，引起气体中各基本粒子的电激发。,?,被激发的原子或离子回到基态时发射出每个元素的特征谱线,。,?,研究特征谱线的波长和强度就可以对被测样品进行,定性和定,量,分析。,?,原子发射光谱分析对一个试样既能,同时进行多元素分析,，又,可测定元素各种不同的,含量,（高、中、微含量）。具有分析,速度快，选择性、准确性高，检出限低，样品消耗少等优点。,一、原子发射光谱分析仪器与技术,（二）原子发射光谱分析仪器,1.,仪器基本结构,?,原子发射光谱仪由激发光源和光谱仪两部分组成。,（,1,）激发光源：,?,

18、提供使试样中被测元素原子化和原子激发发光所需要的能,量，使样品蒸发、原子化、激发，产生光谱。,?,常用火花式与电感耦合等离子体两种方式。,（,2,）光谱仪：,?,常用的光谱仪有棱镜摄谱仪、光栅摄谱仪和光电直读光谱,仪。,?,光谱仪的作用是将光源发射的电磁辐射色散后，得到按波,长顺序排列的光谱，并对不同波长的辐射进行检测与记录。,一、原子发射光谱分析仪器与技术,2.,原子发射光谱分析方法,（,1,）,定性,分析方法,?,元素的特征谱线波长是由元素的原子性质所决定的。,?,通过检查谱图上有无特征谱线的出现来确定该元素是否存,在。,（,2,）,定量,分析方法：,?,根据样品中被测元素的谱线强度来确定

19、其元素含量的方法。,?,元素的谱线强度与该元素在试样中浓度,c,的相互关系：,I=ac,b,式中：,I,为被测元素谱线强度；,a,是与样品的蒸发、激发过程,和样品组成等有关的一个参数；,c,为被测元素的浓度；,b,为自吸系,数，其数值与谱线的自吸有关。,一、原子发射光谱分析仪器与技术,（三）原子发射光谱分析的干扰与处理,?,基体效应是其他元素的存在影响被测元素谱线强度的干扰,作用。,?,样品组成越复杂，基体效应越明显，分析误差越大。,?,向样品和标准样品中加入经过选择的辅助物质，如光谱缓,冲剂或光谱载体，以消除或减少基体干扰。,?,光谱缓冲剂可稀释样品，能控制样品在弧焰中蒸发、激发,的温度和降

20、低背景影响。,?,光谱缓冲剂纯度要高，谱线简单。按所起的作用不同。,?,光谱载体的作用是改变样品中被测元素的熔点、沸点，从,而改变各元素的蒸发状况，起到增强被测元素谱线强度或,抑制干扰元素谱线强度等作用，提高分析的灵敏度。,二、荧光分析仪器与技术,（一）荧光分析工作原理,?,物质经高能量射线激发后，所发出的比原激发光波长较,长的可见光称为荧光。,?,某些物质受到紫外光照射后，发射出比吸收的紫外光波,长更长或相等的紫外光荧光或可见光荧光。,?,通过测定物质分子产生的荧光强度进行分析的方法称为,荧光分析。,?,荧光分析可应用于物质的定性检测及定量分析。,?,荧光法的主要特点是灵敏度高,，检出限为,

21、10,-7,10,-,9,g/ml,。,?,荧光法的选择性强。,?,荧光法样品用量少、操作简便。,二、荧光分析仪器与技术,（二）荧光光谱仪的基本结构,?,激发单色器中的激发光，投射到样品上。样品杯里的荧,光物质被激发而发出荧光光谱。荧光光谱投射到光电检,测器上。光电检测器将荧光强度转换成电信号，信号强,度与物质浓度的成正比。,1.,激发光源,?,激发荧光物质产生荧光，通常用氙灯、汞灯、氙,-,汞弧灯、,激光器及闪光灯等。,2.,单色器,?,分为激发单色器和发射单色器，分别将入射的激发光和,发射的荧光变成单色光。,二、荧光分析仪器与技术,（二）荧光光谱仪的基本结构,二、荧光分析仪器与技术,（三）

22、分子荧光定量分析方法,?,分子荧光定量分析方法与紫外,-,可见分光光度法相同，也是,采用直接比较法和标准曲线法。,1.,直接比较法,C,x,=,C,s,式中：,C,x,为待测样品溶液的浓度；,C,s,为标准溶液的浓度；,F,x,为待测样品溶液的荧光强度；,F,s,为标准溶液的荧光强度。,2.,标准曲线法,用标准物质配成一系列不同浓度的标准溶液，测定标准系列溶液,的荧光强度。以荧光强度为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标，绘,制标准曲线，然后测定待测样品的荧光强度，由样品的荧光强度,和标准曲线求出待测样品中荧光物质的含量。,二、荧光分析仪器与技术,（四）影响荧光强度的因素,1.,溶剂的影响,?,荧光,

23、强度,在一定范围内可随溶剂黏度的减小而减小。,?,溶剂和荧光物质反应，会使荧光,峰的波长,和荧光强度改变。,?,溶剂中的杂质会影响荧光,光谱,。,2.,温度,的影响,?,荧光强度对温度变化敏感。,温度增加，荧光效率和荧光强,度会明显降低。,3.,pH,的影响,?,pH,影响荧光物质的存在形式。,?,苯胺在,pH 7,12,的溶液中以分子形式存在发射蓝色荧光。,?,在,pH,2,和,pH,13,的溶液中呈苯胺离子形式不能发射荧光。,二、荧光分析仪器与技术,（四）影响荧光强度的因素,。,4.,荧光淬灭,?,荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起,荧光强度降低，或荧光强度不与浓度成线性关

24、系的现象。,?,荧光熄灭剂，如卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基,化合物、重氮化合物等均为常见的荧光熄灭剂。,5.,其他干扰因素,?,光散射可以影响荧光强度；,?,洗涤器皿的合成去污剂常能产生很强的荧光；,?,玻璃器皿所使用的润滑油也能产生较强荧光。,第三节,散射光谱分析仪器与技术,一、散射光谱技术基本原理,?,光的散射,?,光在媒质中传播的过程中，不完全沿着原来的方向传播，,沿着四面八方或多或少都有光线存在的现象。,?,散射光谱分析,?,测定光线通过溶液后的光吸收或光散射程度的一类免疫,浊度定量分析,方法。,?,测定方式,?,分为散射免疫比浊法,和透射免疫比浊法。,?,按照形成复合物的速度

25、测定,?,可分为终点浊度法和速率浊度法。,一、散射光谱技术基本原理,透射法,散射法,雷莱散射（瑞利）,米,-,德拜散射,一、散射光谱技术基本原理,（一）浊度分析的基本原理,1,胶体溶液,?,指一定大小的固体颗粒或高分子化合物分散在溶媒中所,形成的溶液，其质点一般在,1,100nm,之间。,2,朗伯,-,比尔光透射理论,E= KC,式中：,E,为吸光度变化率；,K,为常数；,C,为溶液的浓度。,一、散射光谱技术基本原理,（一）浊度分析的基本原理,3,雷莱（,Rayleigh,）光散射理论,?,粒子尺度远小于入射光波长时（小于波长的十分之一）。,式中：,I,0,为入射光强度；,为入射光波长；,n,

26、1,、,n,2,为分散,介质和分散相的折射率；,为单位体积内的粒子数；,V,为单个粒,子的体积。,一、散射光谱技术基本原理,（一）浊度分析的基本原理,3,雷莱（,Rayleigh,）光散射理论,（,1,）单位体积的散射光强度与每个粒子体积的平方成正比。,（,2,）散射光总能量与入射光波长的四次方成反比。入射光,波长愈短，散射愈显著（蓝光）。,（,3,）分散相与分散介质的折射率相差愈显著，则散射作用,亦愈显著。,（,4,）散射光强度与单位体积中的粒子数成正比。,公式仅适用于稀释溶液，微粒直径约为入射光波长的,1/20,1/10,的溶液。,一、散射光谱技术基本原理,（一）浊度分析的基本原理,4.,

27、米,-,德拜（,Mie-Debye,）散射理论,?,当粒子直径与入射光波长的比例大于,1/10,值时，各方向,散射光的强度成为,不对称或各向异性,的了，此时,正向散,射光强度趋于增强,。,?,式中,为光信号检测器与入射光之间的夹角。表明检测器,的位置与被测光信号的性质及强度之间的关系。,?,米,-,德拜公式适合于粒子直径略小于入射光波长的情况，,和粒径等于或大于入射光波长的场合。这些修正反映了,散射光的不对称性与粒子大小及入射光波长之间的相关,性变化。,一、散射光谱技术基本原理,（二）浊度分析的基本方法,?,透射免疫比浊法检测器的与光源呈直线测定透射光强度和,被测溶液中微粒浓度关系。,?,散射

28、免疫比浊法检测器在,5,96,角的方向上测量散射,光强度和被测溶液中微粒浓度关系。,一、散射光谱技术基本原理,（二）浊度分析的基本方法,1.,透射免疫比浊法,?,测定入射光因反射、散射或吸收后的衰减，读数以吸光度,（,A,）表示，这种,A,值反映了透射光和入射光的比率。,?,免疫复合物大小为,35,100nm,之间，选择,290,410nm,波长最佳。,?,加入促聚剂，如,4%,聚乙二醇（,MW 6000,8000Da,）可,使复合物的形成在,3,10,分钟内完成。,?,透射免疫比浊法可分为沉淀反应透射免疫浊度测定和免疫,胶乳浊度测定。,?,抗原抗体形成抗原,-,抗体复合物，使反应液出现浊度，

29、与一,系列的,标准品,对照，即可计算出未知蛋白质的含量。,透射免疫比浊法,?,灵敏度较低。要求抗原抗体复合物分子应足够大、足,够多，分子太小则入射光直接通过。,加增敏剂,。,?,直线光路，灵敏度有先天缺陷。,设计散射比浊,。,?,透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能,测定抗原抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原抗体,温育反应时间，检测时间较长。,缺陷,一、散射光谱技术基本原理,（二）浊度分析的基本方法,2,散射免疫比浊法,?,光源从水平轴照射，通过溶液时，遇到抗原,-,抗体复合物,粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转形成光散射。,?,偏转角度可以从,0,96,，偏转的角度可因光线波长,和

30、粒子大小不同而有所区别。,?,散射光的强度与抗原,-,抗体复合物的含量、散射夹角成正,比，波长成反比。,二、常用浊度法分析仪器,（一）透射浊度分析仪,1,分光光度仪,?,普通分光光度仪可用于透射比浊分析，待测溶液在近紫,外光区（,400,500nm,）有一吸收峰，终点法可获得定,量数据（,A,值）。,2,自动生化分析仪,?,临床实验室的自动生化分析仪一般均可用于浊度测定。,（二）散射浊度分析仪,1.,速率法散射浊度分析仪,2.,终点法散射浊度分析仪,散射免疫比浊法,?,速率散射比浊分析,基本原理：,抗原抗体结合反应的一种动态测定法，适时检测抗原抗体复合物形,成的散射光信号。是测定抗原抗体结合反

31、应的动态过程。,所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成复合物的速度。将各单位时,间内形成复合物的速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态的速率比浊分,析。,当仪器测定到某一时间内形成速率下降时，即出现,速率峰，该峰值的高低,，即代表所测抗原的量。,速率峰值一般在,25,秒时出现。,在反应介质中加入一定量的促凝剂，可加速抗原抗体复合物的形成，以减,少反应时间。,速率法的优点：是快速、不需要减去样本和试剂本底读数，校正结果也较,稳定。,免疫比浊技术分类,按光路,透射免疫比浊,散射免疫比浊,按测定时间,终点比浊,速率比浊,按增敏剂,无增敏,PEG,增敏,胶乳增敏,本章小结,?,根据光谱来鉴别物质和

32、确定它的化学组成的方法叫做光,谱分析技术。,?,依据光谱特征可分为吸收光谱分析技术、发射光谱分析,技术和散射光谱分析技术三大类。,?,原子光谱法有：原子发射光谱法、原子吸收光谱法及原,子荧光光谱法等。,?,分子光谱法有：紫外,-,可见分光光度法、红外光谱法、分,子荧光光谱法和分子磷光光谱法等。,?,紫外,-,可见分光光度计是医学实验室的重要仪器，郎伯,-,比尔定律是比色分析的基本定律。,本章小结,?,原子光谱分析仪器包括原子吸收和原子发射光谱分析仪，,仪器基本结构包括光源、原子化器、分光系统及检测系,统。,?,荧光光谱分析仪器是利用物质吸收能量后可发射荧光，,通过测定物质分子产生的荧光强度进行

33、物质定性与定量,的仪器。,?,散射光谱分析技术主要有,透射免疫比浊分析,和,散射免疫,比浊分析两种，其中,速率测定和胶乳粒子增敏是散射比,浊分析的发展方向,。,原子吸收与普通分光光度法的差别,普通分光光度法,原子吸收光谱,分子或离子团的吸收,基态原子的吸收,溶液,基态原子蒸气,宽带吸收,(,几几十,nm),窄带吸收,(0.00Xnm),连续光源,锐线光源,低分辨率单色器,高分辨率单色器,吸收池,原子化器,+,很好,好,（,+,）尚可,差；很差,原子吸收,（,AAS,）,原子荧光,（,AFS,）,原子发射,（,AES),火焰法,电热法,火焰法,电热法,ICP,电弧法,检出限,+,+,+,+,+,

34、+,精密度,+,（,+,）,+,（,+,）,+,准确度,+,+,+,样品用量,+,+,（,+,）,+,多元素分析,（,+,）,（,+,）,+,+,分析线性范,围,（）,（）,（,+,）,（,+,）,+,（,+,）,操作简单性,+,+,+,+,设备费用,+,（,+,）,+,（,+,）,（,+,）,1.,在分光光度计中，常因波长不同而选用不同的检,测器，下面两种检测器各适用于哪个光区？,A.,光电倍增管用于（,可见紫外,）,B.,热电偶用于（,红外,）,（首都师范大学,1999,年）,2.,原子吸收分析法与发射光谱分析法，其共同点都,是利用,_,原子外层电子发生能级跃迁产生的光谱现,象,_,，在本质上有区别，前者利用的是,_ _,现象，,后者利用的是,_,现象。,（首都师范大学,2001,年）,考,研,真,题,3.,原,子,吸,收,法,测,量,时,，,要,求,发,射,线,与,吸,收,线,的,一,致,，,且,发,射,线,与,吸,收,线,相,比,，,谱,线,半,宽,要,得多。产生这种发射线的光源，通常是,4.,荧光分光光度计通常具有两个单色器，其中，一,个,称,，,其,作,用,是,；,另,一,个,称,，其作用是,。,5.,双,光,束,原,子,吸,收,分,光,光,度,计,由,于,两,光,束,是,由,