（京津鲁琼专用）2020版高考生物二轮复习专题六第一讲发酵工程课件.pptx

1、考点整合融会贯通,加固训练课堂达标,网络构建错漏排查,4,专题演练巩固提高,专题六 生物技术与工程,第一讲发酵工程,2017级四省教学指导意见 1进行微生物的分离和培养。2.测定某种微生物的数量。 3.研究培养基对微生物的选择作用。4.探讨微生物的利用。5.掌握运用发酵技术制作食品的基本方法。,1理清微生物培养的基本技术 (1)培养基的制备：计算称量溶化灭菌倒平板。 (2)无菌技术：消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法以及使用化学试剂进行消毒。灭菌：对培养基进行灭菌，常采取高压蒸汽灭菌；对接种环灭菌采取灼烧灭菌；对玻璃器皿灭菌采取干热灭菌。 (3)倒平板：严格按照教材操作步骤进行，倒平板时培养基需冷却

2、至50 左右，在酒精灯火焰附近无菌区倒平板，平板冷却凝固后，将平板倒置，使皿盖在下，皿底在上。,(4)接种：常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。,2传统发酵技术的2个误区 (1)误认为泡菜制作过程中乳酸和亚硝酸

3、盐的含量都是先增加后减少。泡菜制作过程中乳酸含量是先增加后保持稳定。 (2)误认为果酒、果醋制作过程中都需要无氧条件。果醋制作过程中，利用醋酸菌的有氧呼吸，因此需要有氧条件。,1判断下列有关微生物叙述的正误。 (1)可以用血球计数板直接统计自来水中的大肠杆菌(2016高考江苏卷)( ) (2)高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖(2015高考江苏卷)( ) (3)菌落的大小、颜色、有无荚膜、隆起程度等肉眼可见的特征都可作为菌种鉴定的依据( ),(4)统计样品中的活菌数目时一般采用平板划线法( ) (5)在含有纤维素的培养基中加入刚果红，可通过培养基上是否形成透明圈来筛选

4、纤维素分解菌( ) (6)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了尿素分解菌( ),2判断下列有关发酵加工食品叙述的正误。 (1)控制发酵温度的主要目的是腐乳调味(2017高考江苏卷)( ) (2)腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用(2017高考江苏卷)( ) (3)果酒发酵中期通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸(2017高考江苏卷)( ) (4)果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关(2017高考江苏卷)( ),考点一微生物的分离与培养 明考向真题诊断 1(2019高考全国卷)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组

5、用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。 号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。 号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)。 号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)。,回答下列问题。 (1)在号培养基中，为微生物提供氮源的是_。、号培养基中为微生物提供碳源的有机物是_。 (2)若将土壤悬浮液接种在号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_，其原因是_。,(3)号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时

6、，应采用的方法是_。 (4)假设从号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_和_。,解析：(1)号培养基中含有牛肉膏、蛋白胨和有机物X等，其中X仅含有C、H两种元素，故为微生物提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨。、号培养基中除无机盐外，还含有有机物X，故为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因号液体培养基中的有机碳源只有X，故培养一段时间后，不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖，故不能降解X的细菌比例会下降。(3)对微生物分离的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但其中只有稀释涂布平板法能够计数。(4)能高效降解X的细菌

7、能将X代谢为丙酮酸，丙酮酸在有氧条件下被降解时能释放出大量能量，故丙酮酸可为该细菌的生长提供能量。丙酮酸还可以为该细菌中其他物质的合成提供原料。,答案：(1)牛肉膏、蛋白胨X(2)下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖(3)稀释涂布平板法(4)能量合成其他物质的原料,2(2019高考全国卷)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。 (1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_。,(2)在从土壤中分离目标菌的过程中， 发现培养基上甲、乙两种细菌都能生

8、长并形成菌落(如图所示)。如果要得 到目标菌，应该选择_菌 落进一步纯化，选择的依据是_。 (3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_。,(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。 在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_，三处滴加量相同。 一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明_；若A

9、、B处形成的透明圈直径大小相近，说明_。,解析：(1)物质W是一种含氮有机物，要分离能够降解物质W的细菌，需用以物质W为唯一氮源的选择培养基进行筛选。(2)由题图可知，甲菌落周围没有透明圈，说明甲菌不能降解物质W，乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解物质W，故要得到目标菌，应选择乙菌落进一步纯化。(3)要鉴定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，则培养基中不能添加氮源，所以将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上(其他条件相同且适宜)，若细菌能生长，则说明细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)实验目的是比较天然酶和酶E降解物质W的能力，做实验时要设计空白对照实验，所以C处应滴加缓冲液。C处没有出现

10、透明圈，说明缓冲液不能降解物质W，A、B处透明圈的出现说明物质W被降解，若两个透明圈直径大小相近，则说明酶E与天然酶降解物质W的能力相近。,答案：(1)W(2)乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(4)缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近,3(2018高考全国卷)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。 回答下列问题： (1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时

11、消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_ _。,(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。 (4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。 (5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。,解析：(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160 170 条件下加热12 h。耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。 (2)巴氏消毒法是在7075 条件下煮30 min或在80 条件下煮15 min，

12、可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。 (3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。,(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。 (5)在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是锅内原有的冷空气没有排尽。 答案：(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽,4(2018高考全国卷)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤

13、得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。 回答下列问题： (1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。,(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。 (3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。,(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤

14、样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果： 甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133； 乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。 有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。,解析：(1)链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素作为选择培养基，可筛选出真菌。 (2)培养基中的营养成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白质、核酸等，故所加入的氮源可参与以上物质的合成。 (3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解成麦芽糖，淀粉遇碘变蓝，向加有淀粉的培养基

15、中加入碘液后培养基呈现蓝色，产淀粉酶的菌落周围的淀粉被水解，形成透明圈，可根据透明圈的大小判断产生淀粉酶的多少。,(4)统计菌落数时一般选择菌落数在30300个的平板，甲同学统计的3个平板中的菌落数在正常范围内且差距不大，比较准确；乙同学统计的3个平板中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。 答案：(1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸 (3)碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差,研考点融会贯通 1把握微生物的培养过程,干热灭菌,(3)纯化培养,2掌握某种微生物的分离与计数方

16、法 (1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 其他微生物的生长。 (2)实例 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 筛选菌株：利用以 为唯一氮源的选择培养基筛选菌株。 计数方法,抑制或阻止,尿素,活菌计数法：稀释涂布平板法，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。为了增强实验的说服力和准确性，需设置重复组，一般选择菌落数在 的平板进行计数。 直接计数法：显微镜直接计数法。 过程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察。,低,30300,分解纤维素的微生物的分离 实验原理,可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落。 (3)

17、鉴定方法 添加酚红指示剂的培养基：尿素分解菌可使该培养基变 。 添加刚果红的培养基：纤维素分解菌的菌落周围产生 。,红,透明圈,1培养基的营养成分分析方法 (1)虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。 (2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源，新陈代谢同化作用类型的划分也是以是否能合成含碳有机物为依据，能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。 (3)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源。,2平板划线法与稀释涂布平板法区别的分析 (1)平板划线法适用于微生物的纯化，但不能用于微生物的计数。 (2)稀释涂布平板法常用于活菌计数，而显

18、微镜直接计数法不能区分菌体的死活。用稀释涂布平板法进行计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 的平板进行计数。,3选择培养基及鉴别培养基的使用方法 (1)分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；因培养基中无凝固剂，为液体培养基，利用液体培养基能使营养成分充分利用，以增加纤维素分解菌的浓度。 (2)鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。刚果红染色法就是应用的此类培养基。,解析：(1)制备固体培养基通常加入的凝固剂是琼脂。培养基调pH应在灭

19、菌前进行。(2)灭菌的方法通常有高压蒸汽灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌三种。采用干热灭菌的通常有玻璃器皿和金属用具。(3)平板划线接种过程中需在接种前、每次划线后对接种环进行灼烧灭菌。图中共接种5个区域，故接种环至少需要进行6次灼烧灭菌处理。微生物培养过程中，易产生冷凝水，为防止水珠滴在培养基表面造成污染，培养时需将平板倒置。(4)用稀释涂布平板法统计活菌数目时，要以菌落数目稳定时的记录为最终结果，这样可以防止因遗漏而导致统计结果偏小。,答案：(1)琼脂前(2)玻璃器皿和金属用具(3)6倒置避免培养基被污染和防止培养基水分过快挥发(4)菌落数目稳定时的记录,6(2019高考全国卷)回答下列与细菌培养

20、相关的问题。 (1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_。硝化细菌在没有碳源的培养基上_ (填“能够”或“不能”)生长，原因是_。 (2)用平板培养细菌时一般需要将平板_(填“倒置”或“正置”)。,(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_。 (4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。,解析：(1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可为细菌生长提供碳源和氮源

21、，葡萄糖只能提供碳源，NaNO3只能提供氮源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH不同，制备培养基时要根据所培养细菌种类的不同来调节pH。硝化细菌是自养生物，可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物，所以在没有碳源的培养基上也能生长。(2)用平板培养细菌时，一般将平板倒置，防止水滴倒流到培养基中造成污染。(3)在一定的培养条件下，不同微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此研究人员可根据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。(4)消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物，灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。使用后的培养基丢弃前要进行灭菌处理，防止其中的微生物感染操作者或污染环境。,答案：(

22、1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌,(2)为了分离出Hp，在配制培养基时，应选择的唯一氮源为_。 (3)步骤X表示_。在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。 (4)某同学将分离得到的Hp扩大培养，对其进行计数。取1 mL菌液稀释106倍后再各取0.1 mL分别涂布在3个培养基上，培养一段时间后，其菌落数分别为180、220、200，则每升菌液中Hp的数量为_，此方法测定的活菌数比实际活菌数少的原因为_。,(5)如需要长期保存Hp，可以采用_的方法。 (6)给病人服

23、用14C标记的尿素后，通过分析呼气中14C标记的CO2的含量即可判断患者是否存在Hp感染(已知胃中产生的CO2可经呼气排出)，请分析该方法检测Hp的原理是_。,解析：(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染。(2)从题干中可知幽门螺杆菌(Hp)可产生高活性的脲酶，在培养时应选择尿素作为唯一氮源。(3)步骤X表示接种。在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中。(4)1 L菌液中Hp的数量(180220200)30.110610321012，用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低的原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(5)对于需要长期保存的菌种，可以采

24、用甘油管藏的方法。(6)Hp产生的脲酶可将尿素分解为氨和14C标记的CO2，产生的CO2经呼气排出，通过收集呼出的气体，分析其中14C标记的CO2的含量即可判断患者是否存在Hp感染。,答案：(1)防止外来杂菌的污染(2)尿素(3)接种恒温培养箱(4)21012当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落(5)甘油管藏(6)Hp产生的脲酶可将尿素分解为氨和14C标记的CO2，产生的CO2经呼气排出(合理即可),8(2019河南郑州检测)常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上或土壤中分离这种酵母菌。操作如下：

25、(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是_。获得纯净培养物的关键是_。,(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是_。划线的某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是_。,(3)将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用涂布器涂布接种于以木糖为唯一_的固体培养基上，在适宜的条件下培养一段时间，获得能利用木糖的多个酵母菌_。实验中所用培养基

26、按功能属于_培养基。,(4)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用_法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是_。然后，将1 mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，各在3个平板上分别接入每种稀释度的稀释液0.1 mL，经适当培养后，6个平板上的菌落个数分别为59、57、58、2、7和5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为_。,解析：(1)将平板倒置的原因是可以防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。防止外来杂菌入侵是获得纯净培养物的关键。(2)利用平板划线法纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的

27、是将聚集的菌落逐步分散以获得单个菌落。造成划线无菌落的操作可能有两种，一是接种环灼烧后未冷却导致菌种死亡；二是划线时未从第一区域末端开始。,(3)木糖属于糖类，含有C、H、O，可以作为微生物培养中的碳源。在适宜的条件下培养一段时间，可在固体培养基上获得多个酵母菌菌落，所用的培养基属于选择培养基。(4)检测酵母菌的含量需要对酵母菌进行计数，应采用稀释涂布平板法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，观察培养基上有无菌落形成，目的是检测培养基是否灭菌合格。统计时应选取菌落个数在30300的平板，故每升土壤溶液中的活菌数为(595758)3100.11 0005.8106。,答

28、案：(1)可以防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染防止外来杂菌入侵(2)接种环将聚集的菌落逐步分散以获得单个菌落接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(写出一项即可)(3)碳源菌落选择(4)稀释涂布平板检测培养基灭菌是否合格5.8106,考点二传统发酵技术的应用 明考向真题诊断 1(2017高考全国卷)豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：,(1)该实验的自变量是_、_。 (2)如果发现发酵容器内上层大豆的发

29、酵效果比底层的好，说明该发酵菌是_。 (3)如果在实验后，发现32 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是 _。 (4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为_，脂肪转变为_。,解析：(1)实验使用甲、乙两种菌种，并在32 h内定期取样观测发酵效果，所以该实验的自变量是菌种和发酵时间。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是好氧型微生物。(3)如果在实验后，发现32 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，

30、还需要做的事情是延长取样观测时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间。(4)从大豆到豆豉，在相关微生物的作用下，大豆中的蛋白质转变为肽和氨基酸，脂肪转变为甘油和脂肪酸。,答案：(1)菌种发酵时间(2)好氧菌(3)延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间(4)氨基酸和肽脂肪酸和甘油,2(2016高考全国卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题： (1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_ _。,(

31、2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。 (3)乳酸菌在20 长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。,解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，装入1

32、 mL甘油后灭菌。将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。,答案：(1)无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油,解析：(1)图中过程和是酵母菌无氧呼吸产生乙醇的过程，无氧呼吸的场所是细胞质基质。乙醇可用酸性重铬酸钾试剂检测，颜色由橙色变为灰绿色。过程为有氧呼吸的第二和第三阶段，场所为线粒体。在有氧条件下酵母菌进行有氧呼吸，产生更多的能量供酵母菌繁殖利用，故有氧条件下酵母菌的繁殖速度更快。(2)醋酸杆菌是好氧型细菌，因此，在醋酸杆菌作用下，将乙醇转变为醋酸的过程需要在有氧条件下才能完

33、成。(3)在生产过程中，第一阶段酵母菌产生乙醇的适宜温度为1825 ，第二阶段醋酸杆菌产生醋酸的适宜温度为3035 ，第一阶段的温度低于第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于原核生物，原核细胞中的细胞器只有核糖体一种，不含线粒体。,答案：(1)细胞质基质重铬酸钾线粒体快(2)有氧(3)低于(4)原不含有,4(2015高考广东卷)泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到下图。,(1)制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是_。乳酸菌发酵第一阶段的产物有_。 (2)据图，与第3天相比，第8天后的泡菜更适于食用，因为后者_；pH

34、呈下降趋势，原因是_。 (3)该小组得到一株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍)，拟参照资料的实验方案和食盐浓度(4%10%)，探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件。请你设计一个实验结果记录表，并推测实验结论。,解析：(1)乳酸菌是厌氧微生物，在无氧条件下才能增殖和生长，进行各项生命活动。细胞无氧呼吸的第一阶段是葡萄糖分解为丙酮酸的过程，该阶段的产物有丙酮酸、H和ATP。(2)据题图分析，在第3天时，亚硝酸盐的含量为40 mg/kg，而在第8天时，亚硝酸盐的含量只有约5 mg/kg，故第8天后的泡菜更适于食用。由于乳酸菌进行无

35、氧呼吸的产物是乳酸，而乳酸呈酸性，经过大量的积累会使pH下降。(3)三因子自变量的表格中，自变量分别是食盐的浓度、不同菌种、培养时间，观察指标是亚硝酸盐的含量，其他都是无关变量，应保持相同且适宜。表格中要有单位。,研考点融会贯通 1区分“4”种传统发酵食品的生产技术,1825,3035,1518,2.熟记微生物在传统发酵技术中的应用,无氧,乳酸,醋酸,微生物发酵过程中灭菌措施的分析 微生物发酵过程应该从原料、装置和实验过程三个层次进行无菌操作。 (1)果酒与果醋制作中原料的消毒 榨汁前葡萄应先冲洗再去枝梗，因为若先去枝梗则会使一些微生物侵入果实内部，影响果酒的制作；体积分数为70%的酒精杀菌效

36、果最强，若酒精浓度过低，杀菌效果弱，而浓度过高，又会使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中，从而使杀菌效果受到影响。,(2)腐乳制作过程中的杀菌消毒 制作腐乳的玻璃瓶洗刷干净后用沸水消毒； 酒、盐、香辛料都有杀菌作用； 接种、封瓶时都要进行无菌操作。,解析：(1)微生物接种、纯化的方法有稀释涂布平板法和平板划线法。酿酒过程首先要利用某种微生物将原料中的淀粉转化为葡萄糖，再利用酵母菌将葡萄糖转化为酒精，要获得糖化能力强的菌种，即获得转化淀粉能力强的菌种，因此，可以以淀粉为唯一碳源来筛选这种微生物。(2)发酵液中的酒精浓度若过高，会对酵母菌细胞产生毒害作用。(3)温度、pH、氧气

37、含量等都会影响酒精发酵，从而影响红曲酒的风味。(4)在有氧的条件下，醋化醋杆菌能将酒精(乙醇)转化为醋酸和水。醋化醋杆菌是需氧型生物，故醋酸发酵时需要始终保持有氧状态。,解析：(1)制备泡菜的盐水中盐与清水的质量比约为14，盐水加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了避免高温杀死乳酸菌，保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。(2)在泡菜腌制过程中经常向坛口边缘的水槽中补充水分，目的是隔绝空气，提供乳酸菌发酵的无氧环境。在发酵初期，微生物呼吸作用产生的二氧化碳和泡菜坛中剩余的空气由于发酵坛内温度升高会从坛沿水槽内的水中溢出。(3)发酵后期，当乳酸含量达到1.2%以上时，pH过低会抑制乳酸菌的生

38、长，导致发酵速率渐渐变缓甚至停止。(4)盐过多会抑制乳酸菌发酵，会导致制作的泡菜“咸而不酸”。(5)亚硝酸盐在特定条件下会转变成亚硝胺，亚硝胺具有致癌作用。检测泡菜中亚硝酸盐含量的方法是比色法，检测时必须先制备已知亚硝酸盐浓度的标准显色液。,答案：(1)14加热煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响(2)无氧微生物呼吸作用产生的气体和泡菜坛中剩余的空气(3)pH过低抑制了乳酸菌的生长(4)盐过多抑制了乳酸菌发酵(5)亚硝胺比色法标准显色液,(2)腐乳制作的原理主要利用了毛霉等微生物产生的_，通过发酵使豆腐中营养物质的种类增加，且更易于消化和吸收。 (3)用来

39、腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要_。加入卤汤后，要用胶条密封，密封时最好将瓶口通过酒精灯火焰，防止_。 (4)配置卤汤所加的香辛料的作用是调制腐乳的风味和防腐杀菌；若你完成了腐乳制作，可以从_等方面评价腐乳的质量。,(5)吃腐乳时往往会发现有一层无毒致密的“皮”，该“皮”是由_形成的。 (6)腐乳含嘌呤量普遍较高，痛风、肾病患者及消化道溃疡患者，宜少吃或不吃，以免加重病情；腐乳中的嘌呤产生可能来自_代谢产物。,解析：(1)传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子。现代的腐乳生产将优良的菌种接种在豆腐上，可以避免其他菌种的污染，保证产品的质量。(2)腐乳制作过程中多种微生物参与了发

40、酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生蛋白酶能将豆腐中的蛋白质转化成小分子肽和氨基酸，脂肪酶将脂肪转化成甘油和脂肪酸，使豆腐中营养物质的种类增加，且更易于消化和吸收。(3)用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒，加入卤汤后，封瓶时将瓶口通过酒精灯火焰的目的是防止瓶口被污染。(4)完成了腐乳制作，可以从色泽、口味、块形等方面评价腐乳的质量。(5)在制作腐乳过程中，在腐乳表面的皮实际上是由毛霉的匍匐菌丝形成的。(6)嘌呤是核酸的组成成分，因此腐乳中产生的嘌呤可能来自核酸的代谢产物。,答案：(1)空气中的毛霉孢子(2)蛋白酶、脂肪酶等酶类 (3)用沸水消毒瓶口被污染(4)色泽、口味、块形

41、(5)毛霉的匍匐菌丝(6)核酸,1(2019河北衡水模拟)请回答下列有关生物技术实践方面的问题： (1)培养基配制的步骤为：计算称量_倒平板；为统计样品中活菌的数目，在37 培养箱中培养适当时间后形成菌落，一般选择菌落数在_个的平板进行计数。 (2)腐乳制作的流程是：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制。配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在_左右。,(3)某同学采用血细胞计数板计数(规格为1625, 0.1 mm3)，统计4个中方格中的细菌数，计算出每个小格所含细菌的平均数为2个，则每毫升样品中的细菌数是(稀释倍数为103)_个。 (4)对于频繁使用的菌种可将试管放入_保藏。,解析：(1

42、)制作培养基时，首先按配方计算培养基中各种成分的用量，然后称量溶化灭菌倒平板；选择菌落数在30300的平板进行计数。(2)在卤汤中加酒，一般要控制在12%左右。(3)血细胞计数板计数(规格为1625，0.1 mm3)，每个小格所含细菌的平均数为2个，稀释倍数为103，则每毫升样品中的细菌数为216250.11 0001038109(个)。(4)对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，将装有已长成的菌落的试管放入4 冰箱中保藏。 答案：(1)溶化灭菌30300(2)12%(3)8109(4)4 冰箱,2(2019安徽芜湖模拟)某科研小组尝试从光合细菌中提取类胡萝卜素，流程如图：,(1)将少量

43、污泥样品接入液体培养基中，培养基中加入铵盐和谷氨酸钠为光合细菌的生长提供_，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于_培养基。 (2)图中、过程需要重复几次，目的 是_。该小 组进行过程操作时，其中一个平板经 培养后的菌落分布如图所示，推测接种 时可能的操作失误是_。,(3)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是_。 (4)从浸提离心干燥后的菌体中提取胡萝卜素常用萃取法，萃取剂应该具有的特点是_， 在鉴定萃取样品时，若标准样品点样偏少，则其扩散的最终位置距点样处会_(填“偏远

44、”“不变”或“偏近”)。,解析：(1)培养基的铵盐和谷氨酸钠为光合细菌的生长提供氮源；培养基中没有加入有机碳，属于选择培养基。(2)过程需要重复几次，目的是分离得到光合细菌的纯净培养物。题图体现平板上菌落并非“均匀分布”，而是相对集中于左侧，这可能是由制作平板时“涂布不均匀”所致。(3)振荡培养提高培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。故振荡培养的细菌生长速度更快，说明该细菌是需氧菌。(4)萃取剂应该具有较高的沸点，能溶解色素并且不与水混溶等特点。鉴定胡萝卜素萃取样品时，可采用纸层析法，扩散的最终位置距点样处距离取决于溶解度，与含量无关，因此在鉴定萃取样品时，若标准样品点样偏少，则其扩散的最终位置距点样处会不变。,答案：(1)氮源选择(2)分离得到光合细菌的纯净培养物涂布不均匀(3)振荡培养能提