全血胆碱酯酶活性的测定

1、.全血胆碱酯酶活性的测定 羟胺三氯化铁法实验目的1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。3. 学会末梢血的采集。实验原理 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。未被胆碱酯酶水解而剩余的乙酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红色羌酸铁络合物。颜色深度与剩余乙酰胆碱的量成正比。在波长520nm比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。试剂和材料；.蒸馏水盐酸溶液(12)碱性羟胺溶液磷酸盐缓冲液(PH7.20)三氯化铁溶液氯化乙酰胆碱标准液分光光度计10mL比色管漏斗恒温水浴箱，控温0.5采血针头血色素吸管采样、运输和保

2、存用血色素吸管，取指血20L，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。实验步骤A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37水浴 5min+1.0mL乙酰胆碱应用液 37水浴 30minB 对照管0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血 37水浴 5min+1.0mL水 37水浴 30minC 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37水浴 5min + 1.0mL乙酰胆碱应用液 37水浴 30minD 空白管1.0mL 磷酸盐缓冲液 37水浴 5min +1.0mL水 37水浴 30min水浴之后对A、B、C、D四个试管分别进行以下操作：1.加入 4.0m

3、L 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min；2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min；3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇；4.滤纸过滤，520nm比色。实验结果表1-1 520nm波长下样品的吸光度样品编号 A B C D 吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000结果计算计算酶活性的绝对值带入得： Xs=3.149molXs：水解乙酰胆碱的浓度，mol(0.02mL3730min)；A：以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；B：以试剂空白为参比的在波长520nm处对照管的吸光度值；C：以试剂空白为参比的在波长520nm处标准管的吸光度值。计算酶活性的

4、相对值 Y=197Y酶活性的相对值，%；Xs被测血样中酶活性的绝对值，mol(0.02mL3730min)；Xc正常人血中酶活性绝对值，mol(0.02mL3730min)。Xc=1.60mol(0.02mL3730min)讨论1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19 0.398 mol ；因3.149mol在3.19 0.398 mol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。3.采血要迅速，防止凝固及氧化；振摇要充分，同时防止液体溅出；比色时有以D管调零。注意事项1.采血前应准备好试管，提前加入磷酸盐缓冲液；2.采血时严格消毒，用过的采血针放入