水产品中天然毒素及检验方法

1、水产品天然毒素及其检测技术,水产品天然毒素分类,两,类,重,要,水,产,品,天,然,毒,素,不够美观,鱼类毒素,贝类毒素,河豚毒素,1.1,西加毒素,1.2,其他等,麻痹性毒素,腹泻性毒素,神经性毒素,失忆性毒素,1.1,河豚毒素,毒素来源,河豚毒素,(TTX),主要存在于鱼纲硬骨鱼亚纲豚形目,的,近百种河豚鱼和其他生物体内,是一种生物碱类,天然毒素,。,中毒机理,：河豚毒素阻抑神经和肌肉的电信号传导，,阻止肌肉、神经细胞膜的离子通道，使神经末梢及,神经中枢麻痹，使机体不能运动。毒素量大时，迷,走神经麻痹，呼吸减慢至停止，迅速死亡。,河豚毒素的检验方法,生物检测法：,小鼠生物检测法和组织培养分

2、析法,。,仪器检测法：,荧光检测法,是检测方法之一,主要是利用河豚毒素加碱水解,后生成,C,9,碱,该物质在特定波长发荧光,从而可进行检测。,薄层层析,(TLC),用于河豚毒素的定量测定。,高效液相色谱,(HPLC),反相色谱,用硅胶柱作固定相。,免疫检测法：主要有,单克隆抗体法,(McAb),应用原理是指在,特异性抗原刺激机体后，产生相应抗体。抗原与抗体都是,蛋白质，抗体为免疫球蛋白。它们之间可以相互识别，并,发生结合反应，从而确定是否有毒。,尽量用图解方式表达,1.2,西加毒素,?,西加鱼毒,(ciguatera),是指加勒比海地,区除河豚中毒之外的所有鱼肉中毒现象，,它包含,雪卡毒素,(

3、CTX),、,刺尾鱼毒素,(MTX),。,?,西加毒素,在鱼的内脏中浓度比较高。,西加毒素,( c iguatox in, CTX),是,20,世纪,60,年代从毒,爪哇裸胸鳝肝脏中提取发现的,它是深海藻类分泌的,毒素,被热带或亚热带食草性鱼类蓄积并在鱼体内被,氧化而成的一类强毒性聚醚类毒素,通过食物链逐级,传递和积累,最终传递给人类。据报道全世界每年至,少,2,万人不同程度的遭受,CTX,的伤害,食入,0. 1 Lg,的,CTX,可使一个成年人致病。,CTX,中毒最显著的特征,是,干冰的感觉,和热感颠倒,即当触摸热的东西会感,觉冷,把手放入水中会有触电或摸干冰的感觉。,尽量用图解方式表达,C

4、TX,的检测方法,生物毒性试验,(,小白鼠法,),方法的原理是对毒素采用适宜的提取方法,将样品中的毒素转,移到提取液中,;,通过向固定种系和体,重的小白鼠腹腔注射样品,提取液,记录小白鼠的存活时间以计算样品毒素的量。,高效液相色谱分析,(HPLC),方法的原理是利用毒素分子结构上的羟基反应生成荧光性物质,然后在,FLD,上检测,线性较好,极限浓度可达,3. 5 ng /kg,。,细胞毒性试验,( cell bioassay),细胞毒性试验是,CTX,主要作用于神经末梢和中枢神经节利用毒,素对细胞的毒性来检测毒素的一种技术。,免疫学测定法,( immunoassays),该方法是利用抗原与抗体专

5、一、特异结合的特点,从而对毒素,进行定性定量的检测。,尽量用图解方式表达,2,贝类毒素,?,定义：贝类动物因摄取有毒藻类而在体内积累的,毒素。,?,种类：麻痹性贝类毒素（,PSP,）、腹泻性贝类毒,素（,DSP,）、神经毒性贝类毒素（,NSP,）、失忆性,贝类毒素（,ASP,）。,2.1,麻痹性贝类毒素（,PSP,）,?,麻痹性贝类毒素专指摄食有毒的涡鞭毛藻,莲,状原膝沟藻,塔马尔原膝沟藻被毒化的双壳贝,类所产生的生物毒素。,?,按结构可分为氨甲酰基类毒素如石房蛤毒素、,新石房蛤毒素、膝沟藻毒素及氨甲酰,N,磺,基类毒素。,化学结构示意图？,2.2,腹泻性毒素（,DSP,）,腹泻型贝类中毒一般

6、分布于生长环境中的,浮游生物，特别是赤潮生物鳍藻有关，在,赤潮区生长的贝类很容易积累腹泻型贝类,毒素。,化学结构示意图？,2.3,神经性贝类毒素（,NSP,）,引起人产生以神经麻痹为主的中毒症状，毒性较低，未,见有死亡报道。神经性贝毒分布范围较小，主要分布在,美国佛罗里达海岸和墨西哥湾沿岸，以及欧洲和新西兰。,化学结构示意图？,2.4,记忆缺损贝类毒素（,ASP,）,ASP,的主要成分是一种具有生理活性的氨基酸类物质,-,软骨藻酸（,Domoic acid,，,DA,）是浮游植物代谢的产物，,他能,提高钙离子的渗透性，使细胞长时间处于去极化的,兴奋状态而导致死亡,8,。,ASP,能够导致头晕眼

7、花，短时,期内失去记忆力，但在人体内的降解速度也快。目前许,多国家对贝类中,DA,的控制标准为,20 g/g,。,化学结构示意图？,贝类毒素的检测方法,一、,生物测定法,：,小鼠生物测定法,(MBA),、家蝇或蝗,虫生物检验法、细胞毒性测试法（也称组织培养分,析法）,二、物理、化学检测法：,HPLC-FDL,原理是将,PSP,毒素分子的环结构在碱性条件,下氧化再酸化生成荧光生色团，进行荧光检测。,此外还有,液一质联用技术、薄层色谱（,TLC,）法,三、,免疫检测法,免疫学方法检测贝毒的技术已经得到了初,步的应用，但是免疫技术和贝毒本身存在的,一些问题,如产生抗体的交叉反应、系列标准,毒素的缺乏以及像酶联免疫吸附试验、钠离,子通道受体结合试验等还存在着各种不足之,处,，